苍山三条溪中捕食线虫真菌资源调查研究*

代　琦，魏　芳，梅雄娥，周福仙，苏鸿雁

（大理学院农学与生物科学学院，云南 大理 671003）

苍山三条溪中捕食线虫真菌资源调查研究*

代琦，魏芳，梅雄娥，周福仙，苏鸿雁

（大理学院农学与生物科学学院，云南 大理 671003）

摘要：对苍山三条溪沉水腐木中捕食线虫真菌进行调查，并对中游和下游中的分布情况进行比较。方法：从苍山黑龙溪、灵泉溪、万花溪三条溪的中游、下游各采集腐木50份，总计腐木300份，进行捕食线虫真菌的分离与鉴定。结果：共分离出4属17种。其中腐木中的优势种是Arthrobotrys longiphorum和Dactylellina ellipsosporum。结论：苍山溪水腐木中有着丰富的捕食线虫真菌资源；溪水中游的捕食线虫真菌的多样性要远大于下游，下游受人为因素影响较大，溪水比中游浑浊且有生活垃圾及生活污水，可能是导致捕食线虫真菌分布量下降的主要原因。

关键词：苍山；沉水腐木；捕食线虫真菌；资源；污染

捕食线虫真菌是一类以营养菌丝特化形成三维菌网、粘性球、收缩环、非收缩环、粘性分枝、粘性菌丝等捕食器官来捕食线虫的真菌，在动植物及食用菌线虫生物防治中起重要的作用［1］。捕食线虫真菌可以生活在土壤、粪便、腐木、腐叶、植物残渣、地衣等多种基质上［2］，目前对捕食线虫真菌的研究多限于陆地环境中的捕食线虫真菌，对水体中捕食线虫真菌的研究相对较少。由于特殊水生环境的影响，水生真菌可能会在进化过程中产生出不同的代谢方式、调控机制及基因等，所以研究水生真菌比普通真菌有更高的应用价值［3-4］。就国内而言，对于生活在淡水环境中的捕食线虫真菌有了一定的研究，特别是在底泥方面［5-9］，但对水中其他基质上的捕食线虫真菌的研究较少［10］。本实验对苍山三条溪水中沉水腐木上的捕食线虫真菌进行资源调查，并比较中游和下游溪水中捕食线虫真菌的分布情况，这对于进一步研究捕食线虫真菌适应环境的能力及在不同基质上的分布情况具有一定的指导意义，同时还可以发掘更多的生防资源菌株。

1.材料与方法

1.1样品采集地点 苍山位于云南大理 （99°55′～100°12′E，25°34′～26°00′N），南北长950km，东西宽19km，总面积950km2。海拔1980-4122m，年降雨量1846.4mm，年均温差8.4℃。植被按不同的海拔梯度主要有云南松林及灌丛草坡带、华山林人工带、常绿栎类、杜鹃箭竹灌丛林、苍山冷杉林带、高山杜鹃灌丛草甸。苍山有十九峰，每两峰之间有一条溪，即苍山十八溪，溪水流入洱海［11］。黑龙溪、万花溪、灵泉溪中游无人类居住，受人为因素影响较少，水较清澈；下游居住人群较多，受人为因素影响大，水体略浑浊且水中有生活垃圾及家庭排放的废水。

1.2样品采集2014年5月分别从苍山黑龙溪、灵泉溪、万花溪三条溪的中游、下游各采集腐木50份，总计腐木300份，随机采样，样品放于封口袋中，带回实验室处理。

1.3培养300份腐木采用塑封盒培养法。在塑封盒底铺上一层吸水纸，撒上无菌水保持纸湿润并饱和，在吸水纸上放上2～3根吸管，将腐木放在吸管上，盖上盖子，常温下保湿培养一周。

1.4 CMA的配制称取玉米粉28g，琼脂条16g，加水1000mL，煮沸至30min，用四层纱布过滤，取滤液加水至1000mL后混匀，自然pH，分装至500mL锥形瓶，121℃高温高压灭菌30min。

1.5菌种分离与鉴定用体视镜对腐木样品进行镜检，将镜检到的菌种转接至CMA培养基中，并在培养基中间挖一个1x1cm2的小室，在25℃的恒温箱内培养5～7d，待长出较多孢子时，在小室内加入诱饵线虫，培养12～24h后进行镜检，观察捕器的产生情况［12］。根据孢子着生方式、孢子梗形态、孢子形态及捕器等特征采用Li Yan等［13］分类系统对捕食线虫真菌进行形态学鉴定，对于形态学无法鉴定的菌种使用CTAB法［14］提取DNA，PCR扩增，测序，BLAST序列比对，采用分子学手段进行鉴定。

1.6捕食线虫真菌检出率及统计检出率 （0F） =含有某一菌种的样品数/总样品数×100%

2.结果

对苍山三条溪水中捕食线虫真菌资源的调查结果如表1所示，由表可知，从沉水腐木中共分离出捕食线虫真菌4属17种，其中A.longiphorum和Dac.ellipsosporum为优势种，A.longiphorum在中游和下游的检出率分别为25.33%和10.67%，Dac.ellipsosporum在中游和下游的检出率分别为10.67%和8.67%。由表1可以看出苍山溪流沉水腐木上有着丰富的捕食线虫真菌且中游捕食线虫真菌的检出率远高于下游的检出率。

表1　苍山三条溪流沉水腐木上捕食线虫真菌资源的调查结果

3.讨论

中游的捕食线虫真菌检出率明显高于下游的检出率，可能是由于下游受人为因素的影响，从而导致捕食线虫真菌的多样性下降。张仕颖等［6］研究发现水环境的污染状况对淡水生捕食线虫真菌的分布有显著影响，这一研究结果与本实验的研究结果相似。此外，A.oligospora在土壤中是优势种［15-16］，而本实验在腐木上未分离出这个种，腐木上的优势种为 A.longiphorum 和A.ellipsosporum，说明不同基质中捕食线虫真菌的分布存在着差异。对于腐木上捕食线虫真菌的生理生化特性是否与土壤中的相同，腐木上捕食线虫真菌的种类是否随着季节有明显的变化等方面，还有待研究。此外，罗晶等［17］研究发现淡水中的真菌在环境指数、污染处理、新功能结构化合物以及生物防治等方面具有重要作用，淡水中腐木上的捕食线虫真菌作为淡水水生真菌的一员，是否兼具这些功能还有待研究。

参考文献：

［1］张克勤，刘杏忠，李天飞.食线虫菌物生物学［M］.北京：中国科学技术出版社，2001.

［2］Duddington C L.The ecology of predacious fungi.ⅠPreliminary survey［J］.Trans Brit Mycol Soc，1951，34：322—331.

［3］郝玉娥，张铭洋，谭胜全，等.水生捕食线虫真菌季节性分布及多样性研究［J］.南华大学学报 （自然科学版），2012，26（01）：87—92.

［4］Dreyfuss M M，Chaela I H.The discovery of natural products with therapeutic potential［J］. Dtoneham，1994，26：49—80.

［5］郝玉娥.西南高原水生捕食线虫丝孢菌多样性研究［D］.昆明：云南大学，2005.

［6］张仕颖，郝玉娥，张克勤.云南及贵州部分地区淡水生捕食线虫真菌多样性研究［J］.云南大学学报 （自然科学版），2007，29（02）：199—207.

［7］杨晓燕，苏鸿雁，叶远邦.程海捕食线虫真菌资源的调查［J］.大理学院学报，2008，7（12）.

［8］杨晓燕，刘立盘，苏锡钧，等.洱海捕食线虫真菌生物多样性研究 ［J］.安徽农业科学，2011，39（23）：14183—14184，14207.

［9］郝玉娥，张铭洋，谭胜全，等.水生捕食线虫真菌季节性分布及多样性研究［J］.南华大学学报 （自然科学版），2012，26（01）：87—92.

［10］Peach M.Aquatic predacious fungi［J］.Transactions of the British Mycological Society，1950，33：148—153.

［11］大理白族自治州苍山保护管理局.苍山志［M］.昆明：云南民族出版社，2008.

［12］高仁恒，雷丽萍，刘杏忠.一种诱导和观察捕食线虫真菌捕食器官的简易方法 ［J］.真菌学报，1996，159（04）：304—305.

［13］Li Y，Hyde K，Jeewon R，et al.Phylogenetics and evolution of nematode-trapping fungi（Orbiliales）estimated from nuclear and protein coding genes［J］.Mycologia，2005，97（05）：1034—1046.

［14］易润华，朱西儒，周而勋.简化CTAB法快速微量提取丝状真菌DNA［J］.湛江海洋大学学报，2003，23（06）：72—73.

［15］毕廷菊，张克勤，李文鹏.云南省捕食线虫真菌资源调查 ［J］.云南大学学报 （自然科学版），2000，22（01）：71—75.

［16］苏鸿雁.中甸打日坝牧场捕食线虫真菌资源调查及季节性分布 ［J］.楚雄师范学院学报，2006，21（06）：54—57.

［17］Luo J，Zhang K，Cai L，et al.Freshwater fungi in mainland China［J］.Journal of Huazhong （Central China）Agricultural University，2004，23（01）：7—13.

（责任编辑徐成东）

中图分类号：Q949.320.1

文章标识码：A

文章编号：1671-7406（2015）03-0054-03

*基金项目：国家基金 （31060019；31460015）；云南省中青年学术技术带头人后备人才培养计划资助项目 （2012HB-042）。

收稿日期：2015-01-14

作者简介：代琦 （1991—），女，在读本科生，研究方向：微生物及疾病。

通信作者：苏鸿雁 （1967-），女，教授，主要从事菌物学研究。

Investigation on the Nematode-trapping Fungi from Three Streams of the Cangshan Mountain

DAI Qi，WEI Fang，MEI Xionge，ZHOU Fuxian&SU Hongyan
（College of Agriculture and Biology Science，Dali University，Dali，671003，Yunnan Province）

Abstract：Objective：To survey the resource of nematode-trapping fungi on submerged rotten wood from three streams of Cangshan and compare the distribution of nematode-trapping fungi between midstream and downstream.Methods：We collected 50 rotten wood from each part of creeks'middle and lower reaches of Cangshan—Black dragon creek，Lingquan creek and Wanhua creek，a total of rotten wood is 300，then to prey on separation and identification of nematode-trapping fungi.Results：A total of 4 genera 17 species were isolated.The dominant species of rotten wood are Arthrobotrys longiphorum and Dactylellina ellipsosporum.Conclusion：Freshwater rotten wood has a wealth resources of nematode-trapping fungi；the diversity of the nematode-trapping fungi in middle of brook is greater than the downstream's，downstream are greatly influenced by human factors，whose streams is turbider than middle's.What's more，there are household garbage and sewage in the downstream，which maybe the main reason causing distribution's decrease of nematode-trapping fungi.

Key words：Cangshan；submerged rotten wood；nematode-trapping fungi；resources；pollution