红景天人参银杏叶软胶囊的研制

2015-08-10何正军赵文吉尼科贾国夫

食品研究与开发 2015年2期

关键词：红景天软胶囊本品

何正军，赵文吉，尼科，贾国夫

（四川省草原科学研究院，四川成都611731）

红景天人参银杏叶软胶囊的研制

何正军，赵文吉，尼科，贾国夫*

（四川省草原科学研究院，四川成都611731）

以红景天、人参、银杏叶的提取物为主要原料，大豆油、蜂蜡等为辅料，经原料前处理、配料、溶胶、压丸、定型等工艺制成红景天人参银杏叶软胶囊，进行急性经口毒性、三项遗传毒性、三十天喂养试验，结果表明其无明显毒副作用；亚硝酸钠中毒试验和急性脑缺血试验，表明其具有提高缺氧耐受力的保健功能作用。

红景天提取物；人参提取物；银杏叶提取物；红景天甙；软胶囊

缺氧无处不在，日本医学博士野田英世认为“一切疾病的根源是缺氧症”。据世界卫生组织统计，世界各国因缺氧而导致处于亚健康状态或患病的人群正在迅速增加。陈玉满等[1]研究大花红景天对小鼠的抗缺氧作用，表明大花红景天能提高整体动物的耐缺氧能力；吴万征等[2]对西藏红景天抗氧作用进行了研究，说明西藏红景天提取液能增强整体动物在缺氧条件下的生存能力；戴寿荣[3]等探讨红景天对提高缺氧耐力和劳动能力的机理，说明红景天明显提高动物的耐缺氧能力；王丽云等[4]对复方红景天抗缺氧作用研究，表明复方红景天具有提高实验动物抗缺氧的能力；龙怡[5]等研究红景天有效成分对缺氧缺糖心肌细胞损伤的保护作用，表明红景天对缺氧缺糖心肌细胞损伤具有明显的保护作用。林松毅等[6]研究了小白鼠在常压缺氧和急性脑缺氧条件下使用人参等复方中药功能液对其抗缺氧能力，表明对心、脑功能具有一定的保护作用；邹焰等[7]探讨人参等耐缺氧、耐疲劳及抗氧化作用，表明人参能提高小鼠耐缺氧的能力和有抗氧化作用；张爱民[8]以添加人参提取物的饲料饲喂小鼠，进行密闭缺氧实验和游泳抗疲劳实验，表明人参可有效提高小鼠耐缺氧能力和抗疲劳能力；顾建兰[9]等研究人参银杏叶合剂对高原缺氧大鼠脑组织作用，表明人参银杏合剂对高原缺氧脑损伤具有保护作用。明亮[10]等观察银杏叶提取物对小鼠缺氧的研究，表明银杏叶提取物具有较好的耐缺氧作用；张卫明[11]等通过银杏叶对小鼠常压耐缺氧评价实验，说明银杏叶具有显著的耐缺氧作用。本试验根据红景天、人参、银杏的功能特点，研制出的具有提高疲劳耐受力功能的红景天人参银杏叶软胶囊，并进行了工艺流程、毒理学、功能性评价的研究，为生产提供参考。本品的研制对改善人类健康状况和指导人类生产生活有着十分重要的意义。

1 材料与设备

1.1 材料

红景天提取物：干燥失重≤5%，西安双德生物技术有限公司；人参提取物：干燥失重≤5%，湖北巨胜科技有限公司；银杏叶提取物：干燥失重≤5%，西安四叶草生物科技有限公司；鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102：美国Moltox公司；乙醇、甲醇、亚硝酸钠：成都市科龙化工试剂厂；环磷酰胺、钠石灰、凡士林、棕氧化铁、多氯联苯：成都金山化学试剂有限公司；昆明种小鼠、SD大鼠：华西医科大学实验动物中心，大豆油：成都市明禾春粮油食品有限公司。

1.2 设备与仪器

高速分散均质机：上海中庸检验设备有限公司；HTR实验型搅拌化胶罐：北京中天汇通科技有限公司；电热恒温水浴锅：苏州珀西瓦尔实验设备有限公司；光学显微镜：OLYMPUS奥林巴斯；全自动血球计数仪：法国Horiba ABX；BS-200全自动生化分析仪：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；电子天平：德国赛多利斯；ZTJSY-III型实验滴丸机：北京中天汇通科技有限公司；真空抽滤装置、电炉，秒表，玻璃器皿等。

2 方法

2.1 工艺流程

工艺流程如图1。

2.2 操作步骤

2.2.1 原料前处理

将符合质量要求的红景天、人参、银杏叶的提取物进行Co60辐照灭菌，剂量6 kGy，检验合格后脱去外包装进入洁净区。

2.2.2 内容物配制

红景天、人参、银杏叶的提取物经粉碎分别过80目筛，按配方比例精确称量。将定量的大豆油加热至70℃～75℃，加入蜂蜡，搅拌熔融，放冷即得油蜡混合液，依次加入红景天、人参、银杏叶的提取物，边加边搅拌。置真空均质乳化机中乳化30min，真空（-0.06MPa～0.08 MPa）脱去气泡得内容物料液。

2.2.3 溶胶

按比例称取检验合格的明胶、甘油、纯净水、棕氧化铁；先将纯净水和甘油加入化胶罐，加热至70℃～80℃时加入明胶、棕氧化铁，搅拌熬制1.5 h～2 h，真空（-0.06 MPa～-0.08 MPa）脱气，然后将胶液80目过滤，置贮胶罐保温55℃～65℃，备用。

2.2.4 压丸

内容物料液、胶液通过软胶囊机制成软胶囊。整个压丸过程，温度控制18℃～26℃，相对湿度30%～40%（应检测丸重，确保重量差异在合格范围内，检查软胶囊外观，性状是否正确，有无漏丸等现象）。

2.2.5 定型

压制好的软胶囊定型4h，温度控制在18℃～26℃，相对湿度在30%～40%。

2.2.6 洗丸

用95%食用乙醇洗丸，直至软胶囊表面光洁，无油脂后取出。

2.2.7 干燥

将洗丸后的软胶囊置洁净干燥室内干燥，温度24℃～28℃，相对湿度20%～30%，干燥24 h～36 h。

2.2.8 拣丸

将干燥的软胶囊转到拣丸室，人工操作者应带口罩、手套，除去大小丸、异性丸、瘪丸、破裂丸等不合格的软胶囊。

2.2.9 包装

将合格产品采用PVC板和铝箔泡罩进行包装。

2.2.10 检验入库

成品检验合格后方可入库。

图1 工艺简图Fig.1 Process diagram

2.2.11 生产环境卫生洁净级要求

生产环境及管理符合保健食品GMP要求。

2.3 产品毒理学试验

2.3.1 小鼠急性毒性试验

选用体重为18 g～22 g的昆明小鼠20只，雌雄各半。取本品内容物经口给小鼠灌胃1次，灌胃体积为0.2 mL/10 g·bw，测本品内容物比重为1.061 g/mL，折合剂量为21.22 g/kg·bw。灌胃前禁食16 h，灌胃后连续观察两周，记录中毒表现及死亡情况。

2.3.2 Ames试验

采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株进行试验。采用多氯联苯（PCB）诱导的大鼠肝微粒体酶（S-9）作为体外代谢活化系统。试验设五个剂量分别为5 000、1 000、200、40、8μg/皿，同时设自发回变、溶剂对照和阳性突变剂对照。样品配制时，无菌条件下称取本品内容物1.25 g加二甲基亚砜（DMSO）至25 mL，为5 000 μg/皿剂量，取此液5 mL加溶剂至25 mL配成1 000 μg/皿，以下3个剂量如此类推配制。试验时在顶层琼脂中加入0.1 mL试验菌株增菌液、0.1 mL受试物溶液和0.5 mL S-9混合液（当需要代谢活化时），混匀后倒入底层培养基平板上，37℃培养48 h，计数每皿菌落数。如果受试物的回变菌落数超过自发回变菌落数的2倍以上，并有剂量—反应关系者定为阳性。整套试验在相同试验条件下重复做一次。

2.3.3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

采用间隔24 h两次口灌胃法进行试验。取体重为25g～30g的昆明小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。以40 mg/kg·bw剂量的环磷酰胺为阳性对照，大豆油为阴性对照。试验组高、中、低3个剂量分别为10.00、5.00、2.50g/kg·bw，分别取本品内容物50.00、25.00 g和12.50 g加大豆油至100 mL，配成相应剂量的受试液给小鼠灌胃（0.2 mL/10g·bw）。末次给样后6 h颈椎脱臼处死动物，取胸骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定，Giemsa染色。光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞（PCE），微核发生率以含微核的PCE千分率计，计数200个嗜多染红细胞，计算嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值（PCE/NCE）。

2.3.4 小鼠精子畸形试验

取体重25 g～35 g的雄性昆明种小鼠25只，随机分为5组，每组5只。以40 mg/kg·bw剂量的环磷酰胺为阳性对照，大豆油为阴性对照。试验组高、中、低3个剂量分别为10.00、5.00、2.50 g/kg·bw，分别取本品内容物10.00、25.00 g和12.50 g加大豆油100 mL，配成相应剂量的受试液给小鼠灌胃（0.2 mL/10g·bw）。每日灌胃一次，连续5 d，于末次灌胃后的第30天处死动物，取双侧副睾，做精子涂片，伊红染色，每只动物计数1 000个结构完整的精子，计算畸变精子发生率。2.3.530天喂养试验

取SD大鼠80只，雌雄各半，将实验动物随机分为四组，即对照组及三个受试动物组，每组20只，雌雄各半。设本品内容物低、中、高剂量分别为0.83、1.67、3.33 g/kg·bw（相当于人体推荐剂量的25、50、100倍）。低、中、高剂量受试液配制时分别称取样品16.60、33.40、66.60 g加大豆油定容至100 mL，对照组给予等体积大豆油，每日灌胃一次，灌胃体积为0.5mL/ 100g·bw连续30 d。实验期间所有动物单笼饲养，自由摄食饮水，每天观察动物的活动和生长情况，每周加食2次，记录给食量和剩食量，每周称一次体重，计算食物摄入量和食物利用率。给受试物30 d后禁食16 h采血，禁食前和禁食后（采血前）称量动物体重。采血时，每只大鼠摘眼球采集两份血：抗凝血用全自动血球计数仪测定血红蛋白（Hb）、红细胞压积（HCT），进行红细胞（RBC）、白细胞（WBC）、血小板（PLT）计数及WBC分类。非抗凝血分离血清，用全自动生化分析仪测定TP、ALB、ALT、Cr、BUN、AST、CHOL、TG和GLU。采用后颈椎脱臼处死动物作大体解剖，称肝、肾、脾、睾丸重量，计算脏／体比值，取肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸、卵巢作病理切片检查。在对各剂量组动物作大体检查未发现明显病变和生化指标改变时，只进行最高剂量组及对照组动物主要脏器的组织病理学检查，如发现病变则对较低剂量组相应器官及组织进行检查。

2.4 提高缺氧耐受力功能试验

2.4.1 剂量选择

将昆明种小鼠120只，体重18 g～22 g，分为三个实验组，分别记为实验I组（常压耐缺氧实验）、Ⅱ组（亚硝酸钠中毒存活实验）、Ⅲ组（急性脑缺血性缺氧实验），每个实验组根据动物体重随机分为四组，每组10只。设本品低、中、高剂量分为0.167、0.333、1.000 g/kg· bw（分别相当于人体的推荐剂量的5、10、30倍）。试验时，分别称取本品内容物1.67、3.33、10.00 g加大豆油至100 mL，配成相应计量受试液，供各剂量组灌胃。对照组给予等体积动物食用油。每日灌胃一次，灌胃量为0.1 mL/10g·bw，连续30 d。实验期间动物自由摄取饮水。每天观察动物的活动及生长情况。

2.4.2 方法

2.4.2.1 常压耐缺氧试验

各剂量组经口连续给予不同浓度本品内容物，对照组给予同等容量溶剂，与末次灌胃后1 h，将各组小鼠分别放入盛有5 g钠石灰的25 mL磨口瓶内（每瓶1只）用凡士林封瓶口，盖严，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为标准，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。

2.4.2.2 亚硝酸钠中毒存活试验

各剂量组经口连续给予不同浓度本品内容物，对照组给予同等容量溶剂，于末次灌胃后1 h，各组动物按240 mg/kg·bw剂量腹腔注射亚硝酸钠（注射量为0.1 mL/10 g·bw），立即计时，记录动物存活时间。

2.4.2.3 急性脑缺血缺氧试验

各剂量组经口连续给予不同浓度本品内容物，对照组给予同等容量溶剂，与末次灌胃后1 h，各组动物自颈部逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止时间。

2.5 结果与讨论

1）小鼠急性毒性试验，表明对雌、雄小鼠的最大耐受剂量均大于21.22 g/kg·bw，属无毒级；Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验结果均为阴性。30 d喂养试验，表明0.83、1.67、3.33 g/kg·bw剂量的本品内容物给SD大鼠灌胃30 d，实验期间，动物生长发育良好，各剂量组体重、增重、食物利用率、血常规指标、血生化指标、脏器重量及脏器/体重比值与对照组比较，无显著性差异（P>0.05）。大体解剖和组织病理检查未见与本品内容物有关的异常改变。本品内容物30 d喂养对大鼠未见明显毒副作用。

2）提高缺氧耐受力功能试验，表明经口给予小鼠0.167、0.333、1.000 g/kg·bw剂量的本品内容物30 d，1.000 g/kg·bw计量能明显延长亚硝酸钠中毒存活时间、急性脑缺血性缺氧耐受时间（P<0.05或p<0.01）。表明本品内容物具有提高缺氧耐受力作用。

3 质量指标

质量指标见表1、表2、表3、表4。

表1 感官要求Table 1Sensory requirements

表2 有效成分含量要求Table 2Active ingredient content requirements

表3 理化指标Table 3Physical and chemical requirements

表4 微生物学要求Table 4Microbiological requirements

4 结论

红景天人参银杏叶软胶囊采用红景天、人参、银杏等主要功能原料科学配方，经原料前处理、溶胶、压丸、定型、洗丸、干燥、拣丸等工艺研制而成。该产品呈深棕色，标志性成分主要为红景天苷，产品具有较好的提高缺氧耐受力的保健功能，且无毒性、安全。

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Study on the Rhodiola Ginseng Ginkgo Soft Capsule

HE Zheng-jun，ZHAO Wen-ji，NI Ke，JIA Guo-fu*
（Sichuan Academy Of Grassland Sciences，Chengdu 611731，Sichuan，China）

With Rhodiolae crenulatae，Ginseng，Ginkgo folium extract as the main raw material，Soybean oil，beeswax for the accessories materials，The pre-treatment of raw materials，ingredients，sol，pressure pills，stereotypes，such as technology made Soft Capsule.Acute oral toxicity test，Three genotoxicity tests and thirty days feeding test show that it has no significant side effects.Sodium nitrite poisoning test and trials of acute cerebral ischemLa shows that it has improved the health functions of hypoxia tolerance role.

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