几种柑橘果实中 β-隐黄质等类胡萝卜素含量初探

2015-08-02姚周麟刘新艳张延国林媚王天玉冯先橘

浙江柑橘 2015年4期

关键词：黄素胡萝卜素果皮

姚周麟刘新艳张延国林媚王天玉冯先橘

（1.浙江省柑橘研究所台州 3188026；2.中国农业科学院蔬菜花卉研究所/农业部蔬菜品质监督检验测试中心）

几种柑橘果实中 β-隐黄质等类胡萝卜素含量初探

姚周麟1刘新艳2张延国2林媚1王天玉1冯先橘1

（1.浙江省柑橘研究所台州 3188026；2.中国农业科学院蔬菜花卉研究所/农业部蔬菜品质监督检验测试中心）

柑橘包括有橘、柚、枳、柑、橙、橼等，因汁多、味美，具有较高的营养价值和药理功效而广受人们喜爱。一些研究表明，柑橘富含类黄酮类、类萜、香豆素类、胡萝卜素类等功能性物质，具有抗癌活性、防止心血管疾病、抗病毒、镇痛等生理活性功能。类胡萝卜素就是其中重要的一类生物活性物质，由于主要存在于新鲜蔬菜和水果中，而动物及人体自身不能合成[1]，因此，从自然界中寻找富含天然类胡萝卜素的植物资源日益受到人们的重视。

柑橘是类胡萝卜素含量最为丰富的水果之一，我国又是柑橘的原产地，蕴藏着丰富的柑橘资源，本文运用液相色谱分析技术测定不同柑橘品种的 β-隐黄质等主要类胡萝卜素成分的含量，对于合理开发和利用我国柑橘资源具有重要的理论价值和应用前景。

1 材料与方法

1.1 试验材料和试剂

胡柚、高橙、椪柑、科塔葡萄柚、甜橘柚、瓯柑等六种柑橘，均采自浙江省柑橘研究所种质资源圃。取成熟果实，-18℃冰冻保存备用。

2,6-二叔丁基- 4-甲基苯酚，丙酮，石油醚，无水硫酸钠，石英砂等为分析纯，丙酮，乙腈，二氯甲烷，乙醇等为色谱纯。分析中使用GB/T6682-2008中规定的一级水，试验中所有有机试剂含 0.1% 2,6-二叔丁基- 4-甲基苯酚。

类胡萝卜素标准品：辣椒红素、叶黄素、玉米黄素、β-隐黄质、 β-胡萝卜素、番茄红素，均购自美国Sigma公司，纯度≥95%。

类胡萝卜素标准贮备液：准确称取0.0010 g类胡萝卜素标准品，辣椒红素、 β-胡萝卜素、番茄红素用二氯甲烷溶解；叶黄素、玉米黄素、隐黄质用乙醇溶解，转移至10mL容量瓶中，定容至刻度，得到质量浓度为100mg/L的类胡萝卜素标准贮备液。应避免光照和高温，贮于-70℃冰柜中备用。

1.2 仪器条件

色谱柱：C30不锈钢柱( 4.6mmi.d.× 250mm,5μm)。岛津ΜFLC20ADvp液相色谱仪，配紫外检测器。柱温：25℃；检测波长：450nm；流速：1.5mL/min；进样体积：10 μ L。流动相：丙酮-乙腈梯度洗脱,洗脱程序见表1。以保留时间定性，以待测液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。

1.3 类胡萝卜素的提取方法

分别称取柑橘果肉5 g或果皮 1 g（精确至0.01 g），置于研钵中，加入石英砂后再加入适量丙酮-石油醚混合溶液直至完全淹没试样，用研棒充分研磨，然后移入砂心漏斗中真空抽滤，滤液收集于试管中，重复上述步骤直至将试样洗至无色。

表1 流动相梯度洗脱程序

将全部滤液转移至分液漏斗中，静置分层，上层有机相通过装有无水硫酸钠的玻璃漏斗后收集至圆底烧瓶中，下层水相继续用20mL石油醚萃取，继续收集有机相，无水硫酸钠用石油醚洗至无色并收集滤液。全部有机相在水浴温度35℃的旋转蒸发仪上浓缩至近干，再经氮气吹干，用5.00mL丙酮复溶，加入乙腈5.00mL，涡旋混匀，过0.45 μ m微孔滤膜，待测。

1.4 结果计算

试样中各类胡萝卜素含量用质量分数 w表示，单位为mg/kg，按下述公式计算：

Ps：标准溶液质量浓度（mg/L）；Vs：标准溶液进样体积（μ L）；V0：试样溶液最终定容体积（mL）；Vx：待测液进样体积（μ L）；As：标准溶液的峰面积；Ax：待测液的峰面积；m：试样质量（g）。

2 结果与分析

2.1 方法确认

按 1.2所描述的色谱条件，对待测样品进行测定，六种类胡萝卜素标准溶液色谱图见图1。该检测方法在线性范围0.5～50mg/ L 的相关系数R= 0.9980；在添加水平为1.0, 5.0,20.0mg/L的回收率（n= 3）为83.1%～113.5%，相应的RSD为7.3%～12.2%，重现性良好。

2.2 柑橘果皮和果肉中 β-隐黄质等六种类胡萝卜素含量

图1 六种类胡萝卜素标准溶液色谱图

柑橘果皮和果肉中含有多种类胡萝卜素，但由于条件所限，不能获得所有色素的标样。本研究通过液相检测，根据色素保留时间和标样特征峰对每个峰进行鉴别。用外标法计算柑橘果皮和果肉中 β-隐黄质等六种类胡萝卜素的含量，结果见表 2和表 3。供试的六个品种间 β-隐黄质等类胡萝卜素成分及其含量有较大差别，其中胡柚果皮中β-隐黄素、番茄红素和 β-胡萝卜素含量最高，分别为2.92、 6.80、10.42 μg/g；甜橘柚其次，β-隐黄素、番茄红素和 β-胡萝卜素含量，分别为2.42、2.29、 9.44 μg/g。果肉中椪柑β-隐黄素含量最高为0.51 μg/g；科塔葡萄柚其次，为0.23 μg/g。结果表明，不同品种柑橘及其不同部位类胡萝卜素成分及其含量是不相同的，橘皮中类胡萝卜素含量要高于橘肉中的含量。