HOST2和HE4在上皮性卵巢癌早期诊断中的意义

刘 静 汪先桃

HOST2和HE4在上皮性卵巢癌早期诊断中的意义

刘 静 汪先桃

目的 探讨HOST2、HE4检测对上皮性卵巢癌的诊断价值。方法 选取上皮性卵巢癌21例、上皮性交界性卵巢瘤23例和正常卵巢21例，使用PCR方法检测组织中HOST2 lncRNA和HE4 mRNA的表达量和阳性率。结果 Ⅲ～Ⅳ期上皮性卵巢癌患者HE4表达率高于Ⅰ～Ⅱ期上皮性卵巢癌患者HE4的表达率，且均显著高于卵巢正常组，差异有统计学意义（P＜0.05）；Ⅲ～Ⅳ期上皮性卵巢癌患者HOST2表达率与Ⅰ～Ⅱ期上皮性卵巢癌患者HOST2的表达率比较，差异无统计学意义；但均显著高于卵巢正常组，差异有统计学意义（P＜0.05）。上皮性卵巢癌组的HOST2和HE4联合检测卵巢癌和上皮性交界性卵巢肿瘤的阳性率均显著高于HOST2或HE4检测阳性率，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 HE4和HOST2均在上皮性卵巢癌和上皮性交界性卵巢瘤组织中表达升高，可成为提高上皮性卵巢癌早期诊断率的分子肿瘤标志物。HE4和HOST2联合检测可提高上皮性卵巢癌早期诊断率。

卵巢癌；早期诊断；HOST2；人附睾分泌蛋白-4

卵巢癌是严重威胁妇女生命的恶性肿瘤，在妇科肿瘤中发病率居第3位而病死率居首位，甚至超过宫颈癌和子宫内膜癌的总和[1-2]。因缺乏有效的早期诊断方法，卵巢癌确诊时75%的患者已属晚期。早期卵巢癌治疗效果相对较好，而晚期卵巢癌预后却极差，5年生存率徘徊于25%～30%[2]。HOST2是目前发现仅在上皮性卵巢癌上表达的一种长链非编码基因[3]。HE4是目前广泛应用来检测上皮性卵巢癌及治疗后效果的监测，其临床价值已得到肯定[4]。本研究率先联合分析HE4和HOST2在上皮性卵巢癌上的表达，并与上皮性卵巢交界性肿瘤、卵巢上皮性良性肿瘤检测的结果进行比较，以评价HOST2在卵巢中的诊断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1．1 一般资料 选取2012年1月～2013年4月成都市龙泉驿区第一人民医院收治的上皮性卵巢癌21例、上皮性交界性卵巢瘤23例和正常卵巢21例。正常卵巢组织组（上皮来源卵巢囊肿）、上皮性卵巢交界性肿瘤组（浆液性9例，黏液性6例，卵巢内膜样8例）和上皮性卵巢癌组（手术病理分期：Ⅰ～Ⅱ期11例，Ⅲ～Ⅳ期10例；组织分类：浆液性12例，粘液性5例，卵巢内膜样4例）。组织标本收自于成都市龙泉驿区第一人民医院接受手术患者，术前均未接受放化疗。术中切取卵巢部分组织立即置液氮中，用于提取RNA。部分组织HE染色后用于病理诊断。所有涉及人体标本的研究均事先获得成都市龙泉驿区第一人民医院伦理委员会的批准。

1．2 主要试剂和仪器 总RNA抽提试剂盒、逆转录试剂盒、PCR扩增试剂SYBR GreenⅡ（大连TaKaRa公司）；磷酸盐缓冲液（PBS）为本院自配。荧光定量PCR扩增仪（gene cycle TM Bio-Rad，美国）。

1．3 实验方法

1．3．1 RNA提取和cDNA合成 先用Trizol试剂从组织中提取总RNA。提取总RNA后，经真空干燥，溶解于DEPC水中。测定A260nm/A280nm比值及RNA浓度后，立即进行cDNA合成。cDNA合成，根据RNA的浓度，分别取一定量的RNA模板样品，依次加入逆转录试剂，总反应体积60μL，具体操作按逆转录试剂盒说明书进行。

1．3．2 引物设计 根据HOST2和HE4全长基因序列，利用Primer Premier 5．0设计HOST2和HE4特异性的引物和内参引物。见表1。引物是上海英俊(Invitrogen)公司合成。

表1 HOST2基因、HE4和β-actin基因的引物序列

1．3．3 PCR扩增 扩增体系：目的基因与内参基因反应体系为25μL，体系中各成分的量见表2、3。扩增条件：预变性95℃，5min；变性95℃，30s；延伸52℃，30s；退火72℃，1min，30个循环；72℃复性5min。进行cDNA PCR扩增。目的基因和内参基因的扩增在同时完成，检测样本的同时制备目的基因和内参基因的双标准曲线，判断二者的扩增效率是否一致并对样本进行定量，同时实验设阴阳性和空白对照。F值=目的基因拷贝数/内参基因拷贝数。

1．4 统计学方法 所有数据采用SPSS19．0统计学软件进行处理，组间比较采用t检验分析，计数资料比较采用χ2检验，以P＜0．05为统计学有显著差异。考虑实验影响因素，当F≥0．20时判断该标本为有表达，实验均重复3次。

2 结果

2．1 卵巢组织HOST2和HE4表达的比较 HOST2和HE4基因在各类卵巢组织中的表达：PCR结果显示，2个基因在卵巢癌组均有一定程度表达。2者相比，差异无统计学意义；Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期相比较中，HE4差异有统计学意义（P＜0．05），而HOST2差异无统计学意义；PCR结果显示2个基因在正常卵巢组织中表达弱；HOST2基因在上皮性交界性卵巢瘤较HE4基因在上皮性交界性卵巢瘤表达量高，统计学有明显差异（P＜0．01）。见图1。

图1 组织中HOST2和HE4 F值

2．2 各组患者HOST2和HE4阳性率比较 HOST2在上皮性卵巢癌组、上皮性交界性卵巢瘤组和正常卵巢组分别为90．5%、69．6%和4．8%；HE4阳性率在上皮性卵巢癌组、上皮性交界性卵巢瘤组和正常卵巢组分别为85．7%、30．4%和14．3%；二者联合检测阳性率分别为95．2%、73．9%和14．3%。见表2。在上皮性卵巢癌组中，2个基因同时阴性率为4．8%(1/21)，在正常卵巢组织中同时阳性没有，在交界性卵巢肿瘤中HOST2阳性率高于HE4阳性率。见表3。

表2 组织中HOST2和HE4阳性率[%（n）]

3 讨论

卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率逐年上升，病死率居女性生殖系统恶性肿瘤之首，5年生存率由早期的90%下降为晚期的25%～30%[1]。因缺乏有效的早期诊断方法，患者出现临床症状就诊时往往已是晚期，而早期治疗和晚期治疗的生存率有显著的区别［2］。为提高卵巢癌早期诊断的敏感度和特异度，寻找多种具有不同特性肿瘤标志物的联合检测是当前的研究方向。

HE4基因位于染色体20q12-13．1上，对机体的免疫功能具有保护作用，在正常卵巢组织中不能测出。HE4在上皮性卵巢癌组织中呈高表达，是重要的上皮性卵巢癌肿瘤标志物[4-8]。HOST2(ovarian cancer-speci c transcripts 2，HOST2)是Rangel等于2003年在卵巢癌组织中发现具有组织和癌特异性的lncRNA[3]。HOST2和HE4在上皮性卵巢癌患者的表达率显著高于良性卵巢肿瘤患者。由于HE4是目前诊断卵巢癌较好的指标。HOST2与HE4在卵巢癌诊断相比较，差异无统计学意义，说明HOST2具有较好的诊断效能。由于交界性卵巢肿瘤是低度恶性肿瘤，而HOST2和HE4在交界性卵巢癌表达量显著高于正常卵巢组织。

表3 各组患者 HOST2和HE4联合检测结果[%(n)]

综上所述，HOST2和HE4都可能具有对卵巢癌的早期诊断作用。本研究率先联合检测HOST2和HE4来诊断上皮性卵巢癌，联合检测卵巢癌阳性率比单测HOST2或HE4阳性率高。HE4、HOST2在早期上皮性卵巢癌中升高，可以成为提高上皮性卵巢癌早期诊断率的肿瘤标志物。

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Objective To evaluate the value of HOST2, HE4 detection in the diagnosis of epithelial ovarian cancer.Methods 21 cases of epithelial ovarian cancer,20 cases of benign ovarian tumors. The expression uses the PCR method to detection of HOST2 lncRNA and HE4 mRNA and the positive rate.Results III-IV epithelial ovarian cancer patients the expression rate of HE4 is higher than that of I-II expression in patients with epithelial ovarian cancer were significantly higher than the rate of HE4, ovarian benign tumor group (P＜0.05), Ⅲ and Ⅳ HOST2 epithelial ovarian carcinoma expression rate and expression of Ⅰ-Ⅱ in patients with epithelial ovarian cancer the rate of HOST2 had no significant difference, but significantly higher than that of benign ovarian tumor group (P＜0.05). The positive rate of epithelial ovarian cancer group HOST2 and HE4 combined detection of ovarian and epithelial borderline ovarian tumors were significantly higher than the positive rate of HOST2 or HE4 detection (P＜0.05). Conclusion The high expression of HE4 and HOST2 are at the junction of epithelial ovarian carcinoma and epithelial ovarian tumor tissue, can to improve the epithelial ovarian cancer early molecular diagnosis of tumor markers. The combined detection of HE4 and HOST2 can improve the early diagnosis of epithelial ovarian cancer.

Ovarian cancer; Early diagnosis; HOST2; Human epididymis secretory protein-4

10．3969/j．issn．1009-4393．2015．18．001

四川 610100 成都市龙泉驿区第一人民医院 （刘静 汪先桃）

汪先桃 E-mail:38495964@qq.com