组织芯片检测胃癌组织中TOB1蛋白的表达及临床意义

李玉芳，沈文香，杨 蕴，陈长广，付爱林

（昆山市第一人民医院肿瘤二科，江苏215300）

组织芯片检测胃癌组织中TOB1蛋白的表达及临床意义

李玉芳，沈文香，杨 蕴，陈长广，付爱林

（昆山市第一人民医院肿瘤二科，江苏215300）

目的 利用胃癌组织芯片研究胃腺癌及癌旁组织中ErbB2转录因子1（TOB1）的表达及临床意义。方法 通过免疫组织化学法检测含有90对胃腺癌及其癌旁组织的组织芯片中TOB1表达情况。结果 TOB1在胃癌组织中呈低表达为75.6%（68/90）、高表达为24.4%（22/90）；癌旁组织中TOB1呈低表达为14.4%（13/90）、高表达为85.6%（77/90）；TOB1在胃癌组织中表达较癌旁组织明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。TOB1表达于胃癌组织及癌旁组织的细胞质和细胞核中。TOB1在胃癌组织及癌旁组织细胞核中的表达水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；就细胞质而言，TOB1在胃癌组织中呈低表达为 82.2%（74/90）、高表达为17.8%（16/90）；癌旁组织中 TOB1呈低表达，为 22.2%（20/90）、高表达为77.8%（70/90）；TOB1在胃癌组织细胞质中表达较癌旁组织明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），并与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、肿瘤分期明显相关（P＜0.05）。结论 TOB1在胃癌组织细胞质中的低表达，并且与肿瘤分化、分期有关。TOB1作为一种抑癌基因可能在胃癌的发生发展中发挥着重要的作用，对判断胃癌生物学行为和预后有一定的价值。

胃肿瘤； 转录因子； 染色与标记； 细胞分化

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤[1]，研究发现胃癌发生发展多基因共同作用，这其中癌基因的活化是促使肿瘤发生的关键因素，但抑癌基因的失活在肿瘤发生、发展过程中往往发挥着更为重要的作用[2]。ErbB2转录因子1（TOB1）基因是B细胞异位基因/ErbB2转录因子（BTG/TOB1）抗增殖蛋白家族中研究最多的一个成员，TOB1基因定位于染色体17q21，编码含345个氨基酸的蛋白质分子，可以通过多种途径影响肿瘤细胞恶性增殖、转移和侵袭[3-5]。本实验利用组织芯片研究胃癌及癌旁正常组织中TOB1的表达情况，并探讨其与胃癌临床病理学参数之间的关系及其意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 90对胃腺癌及癌旁组织标本取自上海芯超生物科技有限公司组织库2010年2月至2015年1月新鲜手术切除标本，全部病例术前均未作化疗或放疗。90例患者中男 65例，女25例；年龄38～87岁，平均62岁；临床分期：胃癌Ⅰ期15例，Ⅱ期27例，Ⅲ期38例，Ⅳ期10例；其中低分化腺癌37例，中分化腺癌50例，高分化腺癌3例；有淋巴结转移59例，无淋巴结转移31例。每例胃腺癌患者均取癌旁组织作为对照。所有患者均知情同意，本研究经医院伦理委员会审核通过。所有组织标本取出后迅速用10%中性甲醛溶液固定，常规脱水、石蜡包埋备用。

1.2 方法

1.2.1 试剂与组织芯片制备 抗TOB1单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，二抗由上海芯超生物科技有限公司提供。组织芯片由上海芯超生物科技有限公司制作。首先，对每一个标本蜡块进行切片、苏木精-伊红（HE）染色；然后，在显微镜下对需穿取的组织进行定位，每一个标本选取癌组织及癌旁正常组织各1个点，共计180个位点。用组织阵列仪（基泰公司）设计抽提的组织阵列块在52℃恒温烤箱中加热融合，用全自动组织切片机（莱卡公司）依次从标本蜡块上穿取直径为1.0 mm的组织芯，按5mm的厚度连续切片，切片裱附在防脱片处理的载玻片上，阵列切片置于60℃恒温烤箱中烤片16h，置于5℃冰箱保存。所得组织芯片的每个点均需经过病理诊断。采用二步法进行免疫组织化学（免疫组化）染色。用柠檬酸高温高压法进行抗原修复。

1.2.2 免疫组化染色结果判断 结果采用半定量积分法，即对每个点的阳性细胞率及阳性细胞着色强度分别进行分级记分。按表达为阳性的细胞数量占这个组织芯中该类细胞总数的比率作为这个组织芯的阳性率。以5%为一个递增值，染色的细胞数阳性率0为（0）；5%～30%为（1）；35%～70%为（2）；75%～95%为（3），结果由二者相乘而得，0～2分为低表达，≥3分为高表达。细胞核或细胞质含棕黄色颗粒者为阳性。TOB1阳性着色位于细胞核和细胞质中。按染色强度分为0、1、2、3这4个级别，即0表示阴性；1表示染色强度为淡黄或浅棕色；2表示染色强度为黄或棕色；3表示染色强度为棕黄或深棕色。

1.3 统计学处理 应用SPSS17.0统计软件进行数据分析，计数资料以率或构成比表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

TOB1在胃癌组织中呈低表达为75.6%（68/90）、高表达为24.4%（22/90）；癌旁组织中TOB1呈低表达为14.4%（13/90）、高表达为85.6%（77/90）；TOB1在胃癌组织中表达较癌旁组织明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。TOB1在胃癌组织及癌旁组织的细胞质和细胞核中均有表达，主要位于细胞质。就细胞质而言，TOB1在胃癌组织中呈低表达为82.2%（74/90）、高表达为17.8%（16/90）；癌旁组织中TOB1呈低表达为22.2%（20/90）、高表达为77.8%（70/90），见图1；TOB1在胃癌组织细胞质中表达较癌旁组织明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），并与分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、肿瘤分期明显相关（P＜0.05）。见表1。

图1 TOB1在胃癌及癌旁正常组织中的表达情况

表1 胃癌患者临床病理特征与TOB1表达的关系

续表1 胃癌患者临床病理特征与TOB1表达的关系

3 讨 论

TOB1蛋白是1996年日本学者Matsuda在筛选与ErbB2相互作用的蛋白时首次发现，因此被命名为TOB1。TOB1基因定位于染色体17q21，编码含345个氨基酸的蛋白质分子[6]。TOB1是TOB/BTG抗增殖蛋白家族中研究最多的一个成员，有研究表明，TOB1基因在抑制肿瘤细胞增殖、转移过程中发挥重要的作用[7]。

目前，组织芯片技术已广泛用于人类肿瘤的研究，在肿瘤相关基因的生物学功能及筛选肿瘤相关标志物等方面发挥了重要作用。其与基因芯片技术联合可用于新的肿瘤候选基因的筛选；与免疫组化联合可用于蛋白水平的肿瘤标志物的筛选[8]。目前临床上TOB1在胃癌组织中表达水平的研究甚少，本试验采用组织芯片技术研究胃癌及癌旁组织中TOB1的表达及临床意义。研究发现，TOB1在胃癌组织中的表达水平较癌旁组织明显降低，并与分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、肿瘤分期明显相关。综合既往的研究结果，作者认为TOB1在胃癌的发生发展、远处转移过程中发挥重要作用[9]，其作用机制有待进一步研究，这将为TOB1为靶点进行肿瘤靶向治疗提供新的理论依据。

[1]Siegel R，Ma J，Zou Z，et al.Cancer statistics，2014[J].CA Cancer J Clin，2014，64（1）：9-29.

[2]Yan SM，Tang JJ，Huang CY，et al.Reduced expression of ZDHHC2 is associated with lymph node metastasis and poor prognosis in gastric adenocarcinoma[J].PLoS One，2013，8（2）：e56366.

[3]Tzachanis D，Boussiotis VA.Tob，a member of the APRO family，regulates immunological quiescence and tumor suppression[J].Cell Cycle，2009，8（7）：1019-1025.

[4]Lin S，Zhu Q，Xu Y，et al.The role of the TOB1 gene in growth suppression of hepatocellular carcinoma[J].Oncol Lett，2012，4（5）：981-987.

[5]O′Malley S，Su H，Zhang T，et al.TOB suppresses breast cancer tumorigenesis[J].Int J Cancer，2009，125（8）：1805-1813.

[6]Ezzeddine N，Chang TC，Zhu W，et al.Human TOB，an antiproliferativetranscription factor，is a poly（A）-binding protein-dependent positive regulator of cytoplasmic mRNA deadenylation[J].Mol Cell Biol，2007，27（22）：7791-7801.

[7]Helms MW，Kemming D，Contag CH，et al.TOB1 is regulated by EGF-dependent HER2 and EGFR signaling，is highly phosphorylated，and indicates poor prognosis in node-negative breast cancer[J].Cancer Res，2009，69（12）：5049-5056.

[8]Wang YX，Zhang XY，Zhang BF，et al.Study on the clinical significance of Argonaute2 expression in colonic carcinoma by tissue microarray[J].Int J Clin Exp Pathol，2013，6（3）：476-484.

[9]Jiao Y，Sun KK，Zhao L，et al.Suppression of human lung cancer cell proliferation and metastasis in vitro by the transducer of ErbB-2.1（TOB1）[J]. Acta Pharmacol Sin，2012，33（2）：250-260.

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.22.024

B

1009-5519（2015）22-3431-03

2015-08-04）

李玉芳（1968-），女，湖北麻城人，主任医师，主要从事肿瘤的临床与基础研究工作；E-mail：18952455458@126.com。