转化生长因子β1和白细胞介素17与变应性结膜炎相关性研究

李雯霖　何爱群　卓晓等

[摘要] 目的 探讨过敏性结膜炎患者TGF-β1和IL-17的表达水平。 方法 对我院治疗的过敏性结膜炎患者和健康人群的TGF-β1和IL-17的表达水平进行检测，探讨在各型过敏性结膜炎患者中的表达强度。 结果 过敏性结膜炎患者TGF-β1和IL-17水平高于健康人群，差异有统计学意义（P<0.01），过敏性结膜炎四个临床亚型中TGF-β1和IL-17的表达水平不一，以春季角结膜炎表达水平最高，其次为常年性过敏性结膜炎和季节性过敏性结膜炎，特应性角结膜炎表达水平最低，但四个临床亚型组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 过敏性结膜炎患者TGF-β1和IL-17 表达水平高于正常健康人群。TGF-β1和IL-17在各型过敏性结膜炎患者中表达强度不同，在春季角结膜炎表达水平明显高于其他类型。

[关键词] TGF-β1；IL-17；过敏性结膜炎

[中图分类号] R276.7 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）11-0069-03

[Abstract] Objective To investigate the expression level of transforming growth factor β1 （TGF-β1） and interleukin 17 （IL-17） in patients with allergic conjunctivitis. Methods TGF-β1 and IL-17 expression levels in allergic conjunctivitis patients hospitalized in the authors hospital and a healthy population were detected to explore the expression level in all types of patients with allergic conjunctivitis. Results TGF-β1 and IL-17 levels were significantly higher in patients with allergic conjunctivitis than in healthy population （P<0.01）. Among the four clinical subtypes of allergic conjunctivitis， vernal keratoconjunctivitis had the highest expression level of TGF-β1 and IL-17 in spring， followed by perennial allergic conjunctivitis and seasonal allergic conjunctivitis， and atopic keratoconjunctivitis had the lowest expression level. However， the differences among the four subtypes were not significant （P>0.05）. Conclusion Patients with allergic conjunctivitis have higher TGF-β1 and IL-17 expression levels than normal healthy people. TGF-β1 and IL-17 expression level vary in different subtypes of allergic conjunctivitis， vernal keratoconjunctivitis has higher expression level than other types in spring.

[Key words] TGF-β1； IL-17； Allergic conjunctivitis

变应性结膜炎是眼科门诊患者中常见的引起眼部不适的疾病，且反复发作，给患者带来极大的痛苦。因此，对此病的防治已引起眼科同仁的高度重视，但目前其发病机制仍不十分清楚，为从根本上治愈变应性结膜炎， 揭示其发生机制已成为目前眼科医师需要迫切解决的问题。转化生长因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）在炎症和组织修复等方面都具有重要的调节作用。IL-17（Interleukin-17）可以通过促进释放促炎细胞因子来放大炎症反应，从而诱导自身免疫性疾病及引起慢性变应性疾病的发生。本课题拟研究变应性结膜炎患者血清中TGF-β1和IL-17的水平，从而初步探讨TGF-β1和IL-17在其发病过程中的作用，有望为变应性结膜炎的防治开辟新的途径。

1 对象与方法

1.1研究对象

实验组200例，均为2013年6月～2014年6 月我院眼科门诊收集的变应性结膜炎患者，年龄11～46 岁，其中男78例，女122例。其中季节性变应性结膜炎、常年性变应性结膜炎、春季角结膜炎、特应性角结膜炎均为50例，分别设为实验组1、实验组2、实验组3和实验组4，另选健康人群50例为对照组，年龄15～42岁，男21例，女29例。实验组临床症状和体征符合各临床亚型的诊断标准。具有眼部奇痒、畏光、流泪、眼睑水肿、睑结膜乳头与滤泡增生、球结膜充血水肿等临床表现，并有明确的过敏原接触史，或过敏原虽不明确，但在某一特定的环境下容易发病，常伴有哮喘、鼻炎和湿疹等病史。健康对照组均为社会健康志愿者，眼部均无上述症状，检查眼病无异常，无变应性疾病家族史。因巨乳头性结膜炎多有配戴软性角膜接触镜史，临床上少见，未纳入研究对象。所有入组的研究对象近1个月内无药物应用史，全身各系统体检无异常。实验组与对照组性别、年龄差异无统计学意义（P>0.05）。本文涉及的所有实验都经过患者或家属同意，并签署知情同意书。

1.2 仪器与试剂

TGF-β1和 IL-17均采用酶联免疫吸附法（ELISA）进行检测。ELISA 检测试剂盒购置于晶美生物公司。严格按照试剂盒说明书进行操作。细胞因子单位为pg/mL。

1.3 方法

1.3.1 标本采集 实验组和对照组均常规采集外周静脉血8 mL，其中2 mL用于分离血清，-80℃冻存备用。6 mL用肝素抗凝，用于分离外周血单个核细胞。

1.3.2 TGF-β1和 IL-17检测方法 使用细胞裂解仪裂解实验组和对照组细胞后，将裂解液低温高速离心，分装上清液，-20℃保存。ELISA法检测血中TGF-β1和IL-17含量。具体操作按试剂盒说明书进行，具体步骤如下：①包被：每个反应孔中加0.1 mL用包被缓冲液稀释的抗体（该抗体的蛋白质含量为1～10 μg/mL），4℃过夜，次日用洗涤缓冲液洗涤3遍，每遍3 min。②加样：在上述已包被的反应孔中加一定稀释的上清液0.1 mL置37℃孵育1 h，然后洗涤，同时做对照组。③加酶标抗体：将稀释的酶标抗体0.1 mL加入各反应孔中，37℃孵育1 h，然后洗涤。④加底物液显色：将临时配置的TMB底物溶液0.1 mL加入各反应孔中，37℃孵育30 min。⑤终止反应：将2M硫酸0.05 mL加入各反应孔中终止反应。⑥检测结果：在ELISA检测仪上波长450 nm处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值2.1倍，即为阳性。

1.4统计学处理

应用SPSS 16.0 统计学软件建立数据库进行统计分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，行t检验和方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

血中TGF-β1和IL-17的表达：与对照组比较，各实验组患者血中TGF-β1和IL-17的表达均明显高于对照组，差异具有显著性（P<0.01）。四个实验组中TGF-β1和IL-17的表达水平不一，以实验组3表达水平最高，其次为实验组2 和实验组1，实验组4表达水平最低，但四个临床亚型组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

3 讨论

变应性结膜炎是一类常见的眼表过敏性疾病，其发病率高达20%[1]。该病最主要的症状是眼痒，常有结膜充血、水肿、乳头和滤泡等体征。临床多见季节性变应性结膜炎、春季角结膜炎、特应性结膜炎和常年性变应性结膜炎，而巨乳头状结膜炎因常与戴角膜接触镜史有关，在临床较为罕见。

TGF-β家族包括TGF-β的3个亚型（TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3），其中TGF-β1是调节多种细胞生长、分化和细胞周围基质环境的多功能细胞因子，存在于气道上皮、黏膜下层和平滑肌层。TGF-β1 可诱导大量炎性细胞趋化，还可延长某些免疫炎性细胞，如T淋巴细胞、巨噬细胞和中性粒细胞的存活期，同时在某些情况下TGF-β可诱导B淋巴细胞、T淋巴细胞和巨噬细胞的增殖。TGF-β对调节细胞外基质的形成起着关键作用，TGF-β的持续产生可致细胞外基质的无序沉积，从而导致组织重塑。研究发现TGF-β1 在气道重塑中起重要作用，是气道重塑中的重要细胞因子[2，3]，可促进其发生及发展，从而参与哮喘的发生，其可能的发病机制是在气道损伤的修复过程，如果抗原反复刺激气道引起持续的慢性炎症，可导致TGF-β1持续过度产生，引起组织纤维化、气道重建及气道慢性阻塞[4，5]。另有研究表明，过敏性鼻炎患者鼻黏膜上皮细胞TGF-β1的免疫活性明显升高，提示TGF-β1在过敏性鼻炎的发生发展过程可能起着重要作用[6，7]。

IL-17是Th17 细胞的主要效应因子[8，9]。目前越来越多的研究证实IL-17与过敏性哮喘、过敏性鼻炎及特应性皮炎等变应性疾病的免疫炎症反应有关。有动物实验发现，在急性气道炎症中，IL-17 可以诱导气道内平滑肌细胞产生IL-8和嗜酸细胞活化趋化因子-1（eotaxin-1），这些趋化因子的大量分泌促使中性粒细胞广泛浸润。中性粒细胞在哮喘发病中扮演了重要的角色[10，11]，IL-17能够分别活化NF-κB、p38促分裂原活化蛋白激酶和细胞外信号调节激酶等信号激酶，诱导大量的化学介质和炎症趋化因子产生，调节嗜酸粒细胞的功能，放大炎症反应[12]。在过敏性鼻炎组中Th17 细胞有明显的表达，IL-17 水平也明显增高。Ciprandi等[13]发现，在持续性花粉过敏鼻炎中，血清IL-17 表达水平与鼻炎严重程度呈正相关。Larsen等[14]研究证实，IL-17/Th17参与了特应性皮炎发病的免疫病理过程，包括接触过敏原时天然免疫及适应性免疫反应。总之，目前越来越多的研究证实IL-17与过敏性哮喘、过敏性鼻炎及特应性皮炎等变应性疾病的免疫炎症反应有关。

综上，本研究发现，与对照组比较，各型变应性结膜炎患者血中TGF-β1和IL-17的表达明显高于对照组，差异具有显著性（P<0.01）。因此我们推测TGF-β1和IL-17参与了变应性结膜炎的发生发展过程，但其作用机制有待我们进一步研究。

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（收稿日期：2014-12-16）