针刺提插补泻法对血虚证模型家兔血清铁蛋白、总铁结合力的影响*

王心怡，曾永欣，刘温丽，周明亮，王健彤，刘冰云，睢明河

( 北京中医药大学，北京100029)

本实验采用放血加限食的方法制备血虚证家兔模型［1-4］，通过科学方法研究针刺提插补泻手法中操作时间、频率、提插幅度等刺激量和补泻效应［5-6］的作用，观察血虚证家兔在不同刺激量下血清铁蛋白( serum ferritin，SF) 和总铁结合力( total iron binding capacity，TIBC) 的变化，探讨提插补泻的刺激量大小与效用的关系，为科学分析提插补泻的相关因素提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

经检疫的健康日本大耳白兔60 只，月龄( 3 ±0.5) 个月，雌雄各半，体重( 2000 ±500) g。由北京兴隆养殖场提供清洁级实验动物，合格证号为： SCKX( 京)2006-0001。由北京中医药大学针灸机理研究室提供标准实验室与动物房，动物房及实验室室温保持在22℃～24℃，湿度保持在40% ～50%。对动物的处置符合中华人民共和国科技部颁布的( 2006) 相关动物伦理学规定。

1.2 主要试剂及仪器

人血清铁蛋白放免试剂盒、铁试剂盒、总铁结合力试剂盒( 上海泛柯生物科技有限公司) 。

毫针：直径0.25 mm，长0.25 mm( 苏州环球针灸医疗器械有限公司) ；自制针具：管针及细铁丝改制成的特制针具，在针柄上缠绕铁丝制成控制杆，将管针套管部分切除而成控制套，可控制进针时的最浅深度及针刺提插时的幅度，见图1； 低温离心机(5810R，德国Eppendorf 公司) ；超低温冰箱( MDF-U50V，日本三洋公司) ； 电子天平( ER-182A，日本) ； P1000 微量可调移液器(100-1000ul，芬兰DRGON) 。

1.3 分组与造模

购入大耳家兔后，动物房中先行适应性饲养1 周，再用随机数字表法于造模前分为6 组： 空白组A 组、模型组B 组、针刺小刺激量组C、D 组、针刺大刺激量组E、F 组。

除空白组正常饲养外，其余5 组均采用放血加适当限食法制备血虚证模型：兔耳常规消毒，用乙醇反复擦拭使耳缘静脉血管扩张，从家兔中央动、静脉及耳缘静脉抽血，隔日1 次，每次10 ml，共计5 次； 自造模之日起改变正常喂养规律，禁食与限量食交替给予。制成的血虚证模型家兔精神萎靡、拱背消瘦、唇色淡白、睑结膜苍白、食欲下降、体重减轻，外周血红细胞计数及血红蛋白含量显著降低。

图1 自制针具

1.4 取穴

足三里：家兔小腿背外侧上1/5 折点处，约当膝骨头下1.2 cm，胫骨嵴后1 cm。

1.5 各组处置方法

治疗前剪去家兔腿上的毛发，将其装入自制的布袋中固定，使治疗穴位充分暴露。造模成功后第2 天开始治疗，隔日1 次，共计10 次。

A 组( 空白组) ：正常同步喂养，不进行任何处理。

B 组( 模型组) ：仅造模，不进行任何治疗，与各实验针刺组同步捆绑固定，每次15 min。

C 组( 针刺小刺激量组) ： 造模后针双侧足三里并做补泻手法，提插幅度2 mm，提插深度范围6 ～8 mm，频率15 次/ min，每做0.5 min 休息4.5 min，共3 次。

D 组( 针刺小刺激量组) ：造模后针双侧足三里并做补泻手法，提插幅度4 mm，提插深度范围5 ～9 mm，频率30 次/min，每做1 min 休息4 min，共3 次。

E 组( 针刺大刺激量组) ： 造模后针双侧足三里并做补泻手法，提插幅度6 mm，提插深度范围4 ～10 mm，频率45 次/min，每做1.5 min 休息3.5 min，共3 次。

F 组( 针刺大刺激量组) ： 造模后针双侧足三里并做补泻手法，提插幅度8 mm，提插深度范围3 ～11 mm，频率60 次/min，每做2 min 休息3 min，共3 次。

针刺的提插幅度由改制成的特制针具控制，提插频率由实验进行前录制的口令控制。

1.6 检测指标

分别于造模前、造模后、针刺处理第3 次、第7 次、第10 次的后一日和针刺处理结束后的第12 日，检测家兔血清中SF 及TIBC 含量。于家兔耳缘静脉取血1 ～1.5 mL，用离心机以3500 r/min 离心15 min。取出上清液置于EP 管中，存于-20℃冰箱中待测，采用放免法检测。

1.7 数据处理方法

使用SPSS17.0 统计软件处理数据，采用均数±标准差(±s) 表示。自身前后比较采用t 检验，组间比较采用ANOVA 方差分析，以P ＜0.05 作为具有显著性差异的标准。

2 结果

2.1 造模前后各组家兔SF、TIBC 比较

根据表1、2 可得知：造模前，各组家兔的血清铁蛋白、总铁结合力二项指标数值组间的比较为P ＞0.05，即各组数值造模前无显著性差异。造模后，B、C、D、E、F 组与造模前数据相比，血清铁蛋白数值明显降低，总铁结合力明显升高，具有显著差异( P ＜0.05) 。造模后各组血清铁蛋白、总铁结合力与同时间点空白组的数值相比亦具显著性差异( P ＜0.05) ，说明血虚证家兔造模成功。

表1 造模前后各组家兔SF 值的比较 ( ±s，ng/mL)

表1 造模前后各组家兔SF 值的比较 ( ±s，ng/mL)

注：与造模前比较，▲P ＜0.05；与空白组比较，* P ＜0.05。

分组 n 造模前 造模后A( 空白组)10 143.32 ±10.67 142.50 ±12.44 B( 模型组) 9 149.05 ±4.86 132.97 ±11.15▲＊C( 小刺激量组) 10 148.83 ±3.99 136.90 ±8.79▲D( 小刺激量组) 9 140.87 ±11.13 126.72 ±11.27▲＊E( 大刺激量组) 9 140.83 ±12.47 125.85 ±10.30▲＊F( 大刺激量组) 10 142.07 ±15.27 127.52 ±15.32▲＊

表2 造模前后各组家兔TIBC 值的比较 ( ±s，umol/L)

表2 造模前后各组家兔TIBC 值的比较 ( ±s，umol/L)

注：与造模前比较，▲P ＜0.05；与空白组比较，* P ＜0.05。

分组 n 造模前 造模后A( 空白组)10 58.14 ±7.34 58.75 ±6.82 B( 模型组) 9 56.03 ±9.99 67.25 ±9.10▲＊C( 小刺激量组) 10 52.78 ±8.57 68.48 ±9.61▲＊D( 小刺激量组) 9 52.60 ±11 63.19 ±11.23▲＊E( 大刺激量组) 9 52.09 ±8.86 62.24 ±9.94▲F( 大刺激量组) 10 50.24 ±9.73 65.78 ±12.45▲＊

表3 治疗前后各组家兔SF 值的比较 ( ±s，ng/mL)

表3 治疗前后各组家兔SF 值的比较 ( ±s，ng/mL)

注：与针刺前比较，▲P ＜0.05；与空白组比较，* P ＜0.05；与模型组比较，◇P ＜0.05；与C 组比较，□P ＜0.05；与D 组比较，☆P ＜0.05。

组别 针刺处理前 针刺处理过程中 针刺处理结束后第3 次 第7 次 第2 天 第12 天A 组 142.50 ±12.44 143.84 ±8.08 139.26 ±12.92 140.07 ±12.33 139.16 ±6.50 B 组 132.97 ±11.15 140.80 ±13.26 136.99 ±13.23 130.78 ±15.09 146.78 ±8.22▲C 组 136.90 ±8.79 144.13 ±11.25 142.74 ±16.03 146.56 ±9.94▲◇ 146.34 ±9.76▲＊D 组 126.72 ±11.27* 138.59 ±16.79 139.28 ±12.22▲ 48.97 ±8.34▲◇ 144.84 ±8.56▲E 组 125.85 ±10.30* 138.07 ±16.28□ 138.76 ±17.54 135.18 ±17.56 140.71 ±14.91＊□F 组 127.52 ±15.32* 131.42 ±17.46＊◇□☆ 133.67 ±14.28 134.94 ±15.41□☆ 132.61 ±14.89□☆◇

表4 治疗前后各组家兔TIBC 值的比较 ( ±s，umol/L)

表4 治疗前后各组家兔TIBC 值的比较 ( ±s，umol/L)

注：与针刺前比较，▲P ＜0.05；与空白组比较，* P ＜0.05；与模型组比较，◇P ＜0.05。

组别 针刺处理前 针刺处理过程中 针刺处理结束后第3 次 第7 次 第2 天 第12 天A 组 58.75 ±6.82 57.62 ±7.54 64.65 ±8.47 63.77 ±8.3158.69 ±6.73 B 组 67.25 ±9.10* 64.79 ±12.74 66.19 ±9.05 65.87 ±10.93 62.94 ±11.93 C 组 68.48 ±9.61* 69.98 ±7.26* 66.53 ±8.49 67.94 ±13.45 58.84 ±6.61▲D 组 63.19 ±11.23* 63.60 ±10.61* 64.36 ±8.82 61.38 ±5.41 51.34 ±8.82▲◇E 组 62.24 ±9.94* 71.92 ±9.61* 63.36 ±10.07 56.58 ±7.03 51.96 ±10.58▲◇F 组 65.78 ±12.45 71.94 ±5.9*59.85 ±8.07 59.24 ±9.45 59.05 ±12.07

2.2 治疗前后各组家兔SF、TIBC 的分析比较

SF：根据表3 可知，与模型组比较，针刺处理结束后第2 天，C、D 组的SF 值明显增高( P ＜0.05) ； 针刺处理第3 次和针刺处理结束后第12 天，F 组的SF 值明显降低( P ＜0.05) 。与C 组比较，针刺处理第3 次和针刺处理结束后第12 天，E、F 组的SF 值有显著性差异( P ＜0.05) ； 针刺处理结束后第2 天，F 组的SF值有显著性差异( P ＜0.05) 。与D 组比较： 针刺处理第3 次，针刺处理结束后第2 天、第12 天，F 组有显著性差异( P ＜0.05) 。

TIBC：根据表4 可知，与模型组比较，针刺处理结束后第12 天，D、E 组的TIBC 值明显降低( P ＜0.05) ；在各时间点，C、D、E、F 之间的TIBC 值均无显著性差异( P ＞0.05) 。

3 讨论

3.1 指标选取

SF 是血液去铁蛋白和铁核心Fe3+形成的复合物，是检查体内铁缺乏的最灵敏的指标；TIBC 是指血清中转铁蛋白与铁结合的总量，反映了转铁蛋白与铁结合的能力。在失血的情况下，体内血细胞和铁大量丢失，SF 降低；当体内贮存铁减少到不足以补偿功能状态铁时，铁蛋白、血清铁和转铁蛋白饱和度减低，此时TIBC升高。本实验采用放血加适当限食的方法来制备血虚证模型，可引起体内贮存铁缺乏［7-9］，导致SF 值降低，TIBC 值代偿性升高［10-11］。

3.2 针刺补泻效应

与模型组比较，针刺处理结束后第2 天，C、D 组的SF 值明显增高( P ＜0.05) ，说明小刺激量提插法的SF值恢复较好，呈现补的效应，但未必是提插补法的效应，因为针刺足三里穴本身就有补的作用。与模型组比较，针刺处理第3 次和针刺处理结束后第12 天，F组的SF 值明显降低( P ＜0.05) 。说明大刺激量提插法的SF 值恢复较差，呈现泻的效应。

与C 组比较，针刺处理第3 次和针刺处理结束后第12 天，E、F 组的SF 值明显较低( P ＜0.05) ；针刺处理结束后第2 天，F 组的SF 值明显较低( P ＜0.05) ，说明大刺激量提插法的SF 值恢复明显不如小刺激量提插法，二者有显著差别。

与D 组比较，针刺处理第3 次，针刺处理结束后第2 天、第12 天，F 组的SF 值明显较低( P ＜0.05) 。说明大刺激量提插法的SF 值恢复明显不如小刺激量提插法，二者有显著差别。

与模型组比较，针刺处理结束后第12 天，D、E 组的TIBC 值明显降低( P ＜0.05) ，说明D、E 组的TIBC值恢复较好，这也说明大刺激量提插法E 组未必一定呈现泻的效应，有时也可能是补，刺激量的大小也是相对的。

3.3 结论

对血虚证家兔的血清铁蛋白的影响方面，以提插幅度、频率、时间决定的小刺激量组和大刺激量组之间具有不同效应，小刺激量组恢复速度较快。针刺提插补泻法的刺激量大小与补泻效应有一定相关性，提插幅度小、频率低、操作时间短的小刺激量手法呈现补法效应；提插幅度大、频率高、操作时间长的大刺激量手法呈现泻法效应。

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