针刺曲池与合谷对发热大鼠下丘脑前列腺素E2 的影响*

周晓英，李世兵，张 林，钟 艳，林星辉

(湖南中医药大学，湖南 长沙410208)

发热是临床常见症状之一，是由于机体体温调节系统异常所致，细菌或其他微生物所产生的外源性致热源或由微生物、抗原-抗体复合物或其他刺激物激发而释放的内源性致热源均可引起［1］。在近年大量的临床观察中，大量的循证医学证据证明针刺退热有起效快、作用持久、无药毒的作用。有研究表明针刺退热的作用机制可能与发热介质白介素-6(IL-6)、前列腺E2(PGE2)、环磷酸腺苷(cAMP)等的释放有关［2］，因此本项目拟观察针刺曲池、合谷穴对发热大鼠体温及下丘脑前列腺素E2(PGE2)含量的影响，以探讨针刺退热的退热效应及其效应机制。

1 材料

1.1 实验动物

实验动物:选用清洁级健康雄性Wistar 大鼠，6 ～8周龄，体质重(200 ±20)g。

1.2 药品与试剂

阿司匹林粉:上海如吉生物科技发展公司。银翘解毒颗粒:组成为金银花、连翘、薄荷、荆芥、淡豆豉、牛蒡子(炒)、桔梗、淡竹叶、甘草，生产企业:广州白云山光华制药厂，批准文号:国药准字Z44020211。干酵母粉:安琪酵母股份有限公司，生产许可证号:420528010005。下丘脑前列腺素E2 酶联试剂盒:长沙丽欣生物技术有限公司。

1.3 实验仪器

苏州医疗用品厂有限公司生产的华佗牌一次性针灸针，规格是φ0.30 ×(25 mm ～50 mm);精密电子天平:GX-200，日本AND;电子体温计:DT001，深圳和丰医疗器械有限公司;高速冷冻离心机:GT10-1 型，北京时代北利离心机有限公司;超低温保存箱:MDF-382E，日本三洋。

2 实验方法

2.1 酵母致热模型制备

先将大鼠在室温为18℃～22℃的实验室内适应3天，每天测体温3 次(方法:将大鼠固定后待其平静几分钟，挤出直肠内粪块，再将体温计探头的末端涂抹凡士林后，缓缓插入大鼠直肠内约2 ～3 cm 处，待显示器上的数字稳定后读数)。实验前10 h 禁食，可自由饮水。实验当天每只大鼠测体温3 次，每次间隔半小时，剔除体温波动超过0.3℃的大鼠，取3 次体温的平均值作为基础体温。将大鼠随机分成6 组，正常组不做处理，模型组背部皮下注射等剂量生理盐水外，其余4组用酵母致热法造模，即将20% 酵母混悬液按10 ml/kg于大鼠背部皮下注射，按压注射部位1 min 以防液体外渗［3］。

2.2 实验分组

注射酵母8 h 后选择体温上升0.8℃以上者，随机分为正常组(灌服蒸馏水)、模型组(灌服蒸馏水)、中药组(灌服银翘解毒颗粒)、阿司匹林组(灌服阿司匹林)、针刺组(针刺曲池、合谷)、非经非穴组(针刺曲池、合谷穴旁开0.5 cm)，共6 组，每组10 只。

2.3 处理方法

2.3.1 取穴方法 主要参照《常用动物针灸穴位图谱》，同时结合模拟人体经穴并比较解剖学方法进行。合谷:前肢第1、第2 掌骨间，约当第2 掌骨中点桡侧;曲池:桡骨近端的关节外侧前方凹陷中。

2.3.2 针刺方法 采用0.5 寸、30 号的华佗牌针灸针，以络合碘消毒后分别针刺大鼠双侧曲池直刺0.4 cm，合谷直刺0.1 cm，用捻转泻法:大拇指作用力向后时用力捻转，然后轻力向前退回。捻转幅度为360°，频率60 次/min，持续捻针1 min，每15 min 行针1 次，留针30 min。

2.3.3 药物灌胃方法 将阿司匹林用生理盐水配置成浓度为10 mg/ml 的阿司匹林混悬液50 ml，银翘解毒颗粒用生理盐水配置成浓度为1.5 g/ml 的银翘解毒颗粒混悬液50 ml，0 ～4℃冰箱放置备用。大鼠灌药容积均为10 ml/kg。空白组及模型组均灌以等量的蒸馏水。

2.4 观测指标

各组进行治疗后的20 min、40 min、1 h、2 h、3 h、4 h分别测量大鼠体温1 次，并记录下来分析统计，比较各时间点各组之间的差异情况。

每组按照处理方法给予处理，按照预定时间进行体温测定后，分别于治疗后2 h、4 h 测量体温后再各取5 只大鼠，腹腔注射麻醉后快速断头(2 min 内取出)，取出下丘脑，干冰速冻，存放于-70℃冰箱内保存备用。检测时取下丘脑35 mg 左右，加入1 ml PBS(PH7.4)。用匀浆机将标本匀浆充分，离心20 min(2000 ～3000 转/min)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。检测方法按照酶联检测说明书进行。

2.5 统计方法

3 结果

3.1 大鼠体温变化情况

表1 各组经处理后体温变化情况 (±s，℃)

表1 各组经处理后体温变化情况 (±s，℃)

注:与正常组比较，＊＊P ＜0.05，* P ＜0.01，○P ＞0.05;与模型组相比，##P ＜0.05，#P ＜0.01;与阿司匹林组比较，◆◆P ＜0.05，◆P ＜0.01，☆P ＞0.05;与针刺组比较，△P ＜0.01，△△P ＜0.05，＆P ＞0.05;与基础体温比较，□□P ＜0.05，□P ＜0.01，▽P ＞0.05。

图1 各组体温变化曲线图

表2 各组下丘脑PGE2含量 (±s，单位:ng/L)

表2 各组下丘脑PGE2含量 (±s，单位:ng/L)

注:与正常组比较，＊＊P ＜0.05，* P ＜0.01，○P ＞0.05;与模型组比较，#P ＜0.01;与阿司匹林组比较，◆◆P ＜0.05，◆P ＜0.01，☆P ＞0.05;与针刺组比较，△P ＜0.01，△△P ＜0.05，＆P ＞0.05。

由表1 及图1 可以看出，大鼠注射酵母后，体温有明显的下降相和上升相，起始时体温先降低，约2 h 后大鼠体温迅速上升，约7、8 h 左右于峰值平台期并能维持数小时。各组经过处理后，除模型组和正常组外，大鼠体温开始下降，其中针刺组下降曲线较陡，中药组和阿司匹林组的曲线相对较接近，非穴组下降曲线较平缓。

在注射酵母悬浊液8 h 后，与正常组相比，模型组、中药组、阿司匹林组、针刺组及非经非穴组大鼠的体温均显著升高(P ＜0.01 或P ＜0.05)，说明造模成功。各组经过处理后，阿司匹林组、中药组、针刺组、非经非穴组各组体温与模型组相比，在1 h、2 h、3 h、4 h时，其差异均有统计学意义(P ＜0.01)，说明均能使酵母致热大鼠的体温下降。经处理1 h 后，针刺组与正常组相比差异有统计学意义，与基础体温相比差异无统计学意义。经处理2 h 后，针刺组与正常组相比差异无统计学意义，与阿司匹林组相比其差异有显著统计学意义(P ＜0.01)。处理4 h 后，中药组和阿司匹林组相比差异无统计学意义，阿司匹林组、中药组与基础体温相比差异无统计学意义。以上说明，针刺曲池、合谷，口服阿司匹林、口服中药均有退热效果，但是针刺曲池、合谷起效解热时间短、作用持久。非经非穴组也有解热作用，但是退热效果较其他几种方式疗效稍差。

3.2 大鼠下丘脑PGE2变化情况

图2 各组下丘脑PGE2含量比较

由图2 可见，经治疗2 h 后，阿司匹林组、中药组、针刺组、非经非穴组与模型组相比差异均有显著意义(P ＜0.01);阿司匹林组、中药组及非经非穴组与正常组相比差异均有显著意义(P ＜0.01);针刺组与正常组相比有统计学意义(P ＜0.05);针刺组与中药组、阿司匹林组相比差异均有显著意义(P ＜0.01);中药组与阿司匹林组相比差异无统计学意义(P ＞0.05);非经非穴组与阿司匹林组相比差异有显著意义(P ＜0.01)。处理4 h后，针刺组与正常组差异无统计学意义(P ＞0.05)。经治疗后2 h、4 h 各组的体温值分别与相应PGE2含量进行相关分析，经统计学处理二者之间均存在明显正相关关系(r 分别为0.762，0.864，P ＜0.01)。以上说明针刺组在2 h、4 h 时PGE2含量均明显低于阿司匹林组、中药组、非经非穴组;阿司匹林组和中药组在4 h 时大鼠丘脑PGE2含量相差不大，非经非穴组丘脑PGE2含量较其他组均较高。可推断针刺曲池、合谷可降低大鼠下丘脑PGE2含量。

4 讨论

发热为临床上常见的症状，许多学者也一直致力于发热机制的研究，对于发热主要是在外源性致热原的作用下，激活体内免疫细胞，产生内源性致热原(EP)，即大量致热性细胞因子，这些因子直接或间接的作用于体温调节中枢，引起调节性体温升高［4］。致热因子很多，近年来也有一些新的递质被发现。在目前已知的神经递质中，PGE2是最重要的中枢发热介质之一，已得到大量的实验证实［5］，给脑室或视前区/下丘脑前部(PO/AH)注射PGE2，动物均有发热反应，且发热程度与注射量成正比［5-6］。因此，本项目通过测定下丘脑PGE2含量的变化，探讨退热的作用机理。现在临床上的退热药仅以支持对症治疗为主，且随着耐药性、毒副作用等问题的日益严重，针灸疗法退热越来越受到人们的欢迎，因此本实验通过研究针刺退热的疗效及机理，为临床提供一定的客观依据。本实验选取的合谷穴为手阳明大肠经原穴，可疏风解表、调和营卫，对热病无汗者可发，多汗者可敛。曲池穴，为手阳明大肠经合穴，可调节全身功能，具有清热祛风、调和营卫等作用，可助阳气、祛火，治外感发热。两穴相配为治疗高热的经验穴，主治头面、五官咽喉病，有退热之功效，是治疗目赤、流涕、咽喉肿痛及发热的要穴，且两穴均在上肢处，体表定位容易，取穴方便，操作快捷方便，技术实用，适合临床推广。本研究的结果表明，针刺曲池、合谷穴的解热时间短、作用持久，可以通过降低下丘脑中的PGE2水平从而达到退热的效果。

［1］ 缪媛媛，孟庆义. 解析发热与不明原因发热［J］. 临床误诊误治，2013，26(4):5

［2］ 吴晓岚，赵书芬. IL-1β 致热机制的研究进展［J］. 解剖科学进展，2004，10(3):267-270

［3］ 唐晓峰，薛漫清，王晖，等. 大鼠发热模型及发热机制的研究进展［J］.广东药学院学报，2009，25(3):327-330

［4］ 张林，钟艳，贺香嫦，等.针刺退热的临床研究进展［J］.针灸临床杂志，2013，29(7):95-96

［5］ 杨金蓉，宋军，胡荣，等.川芍挥发油的解热作用及对下丘脑PGE2含量的影响［J］.中药药理与临床，2008，24(4):34-36

［6］ 周晓英，钟艳，李世兵，等.针刺退热的实验研究进展［J］.湖南中医杂志，2014，30(6):183-184