猪繁殖与呼吸综合征未免疫猪群的抗体消长规律研究

郑 金，黄婕峰，朱 娜，方 超，葛 猛，黎满香

（湖南农业大学动物医学院预防兽医学实验室，湖南 长沙410128）

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由PRRSV 引起的传染病， 其特征为母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病。PRRSV 属于动脉炎病毒科，动脉炎病毒属。 PRRSV为有囊膜、单股正链RNA 病毒[1]。本病只感染猪，各种日龄、品种、性别的猪均易感，传播迅速，主要经呼吸道传播，在世界养猪业发达的国家和地区均有发现，并造成巨大的损失[2-4]。

PRRSV 的基因组包含10 个开放阅读框（Open reading frames，ORFs）。 其中ORF1a 和ORF1b 约占整个基因组的80%， 负责RNA 的复制和编码该病毒的 非结 构蛋白[5]，8 个ORFs（2，2b, 3～7 以 及5a）编码该病毒的结构蛋白[6]。 ORF7 编码核衣壳蛋白（N 蛋白）。 PRRSV 中含量最多的结构蛋白为N 蛋白，并且其抗原性较好，因此常用于免疫诊断抗原[7]。

本试验采用IDEXX 公司生产的PRRSV 抗体检测试剂盒检测未免疫PRRS 疫苗的猪的PRRSV抗体水平， 研究PRRSV 抗体在未免疫PRRS 疫苗的猪体内的消长规律，为制定猪场的PRRS 疫苗免疫程序提供指导。

1 材料与方法

1.1 血清。 血清主要来自A、B、C 三个规模化猪场，均未免疫PRRS 疫苗， 共147 份， 其中A 猪场48

份， 包括2，4，7，10，13，16，20 周龄血清，2 周龄血清12 份，其余周龄血清各6 份，B 猪场53 份，包括2，4，7，10，13，16，20，24 周龄血清，2 周龄血清12份，24 周龄血清5 份，其余周龄血清各6 份。C 猪场46 份，包括2，4，8，10，12 周龄血清，10 周龄血清9份，12 周龄血清7 份，其余周龄血清各10 份。

1.2 PRRSV 抗 体 试 剂 盒。 IDEXX 公 司 生 产 的PRRSV 抗体试剂盒，包被抗原为N 蛋白。

1.3 血清的检测。 IDEXX 公司生产的PRRSV 抗体试剂盒检测A、B、C 三个规模化猪场的不同阶段的猪血清，具体操作步骤为（所有的试剂、血清使用前恢复到室温）： ①加样： 被测样品用样品稀释液作40 倍稀释（阴性对照和阳性对照不稀释），在包被孔内加入稀释好的样品和未稀释的阴阳性对照100μL，18～25℃孵育30±2min；②洗涤：弃去孔内液体， 每孔加入250～280μL 1* 洗涤液洗涤3～5次，最后一次洗涤后拍干；③加酶标二抗：每孔加入100μL 的辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG 抗体，18～25℃孵育30±2min；④洗涤：同②；⑤显色：每孔 加 入100μL 的 底 物TMB，18～25℃孵 育15±1min；⑥终止反应：每孔加入100μL 的终止液，测量并记录样品和阴阳性对照的吸光值A(650nm)。

1.4 检测结果的判断及规律总结

结果判断： 阳性对照OD650- 阴性对照OD650≥0.15，阴性对照OD650＜0.15,则实验存立；S/P 值=（样品OD650- 阴性对照平均OD650）/（阳性对照平均OD650- 阴性对照平均OD650）；当S/P值≥0.4 时为阳性（+），当S/P 值＜0.4 时为阴性(-)。计算每个样品的S/P 值， 并统计各阶段猪PRRSV抗体的平均S/P 值和阳性率， 分析未免疫PRRS 猪体内的PRRSV 抗体消长规律。

2 结果

IDEXX PRRSV 抗体试剂盒检测A、B、C 三个猪场（均未免疫PRRS 疫苗）共147 份血清中的PRRSV 抗体，检测结果见图1～3。 3 个猪场的检测的结果整体上体现了相似的PRRSV 抗体消长趋势， 即先降后升的类似“ V” 字形的规律。 猪群的PRRSV 抗体阳性率最低点和平均S/P 值最低点重合，13 周以后和的PRRSV 抗体阳性率均达到100%，与此同时，其平均抗体水平比较高。

图1 A猪场各阶段猪PRRSV抗体的平均S/P值和阳性率

图2 B猪场各阶段猪PRRSV抗体的平均S/P值和阳性率

图3 C猪场各阶段猪PRRSV抗体的平均S/P值和阳性率

3 分析与讨论

本试验通过对未免疫PRRS 疫苗的猪场的各个阶段猪的PRRSV 抗体的检测， 研究在自然感染情况下猪群的PRRSV 抗体消长规律。 结果表明3个猪场PRRSV 抗体消长规律大体相同： 在未免疫PRRS 疫苗的猪群中， 哺乳仔猪体内一定水平的PRRSV 母源抗体， 随着猪周龄的增长， 其体内的PRRSV 母源抗体水平降低，至8～10 周龄时抗体水平下降到最低，2～3 周之后抗体开始转阳， 并且抗体水平迅速上升， 说明感染了PRRSV， 高水平的PRRSV 抗体能在猪体内持续存在较长的时间。 由此表明PRRSV 的感染一般在母源抗体处于较低水平时，本研究的3 个猪场的母源抗体水平最低时间在8～10 周龄（不同猪群的情况可能不一样），所以疫苗接种应该在此之前，考虑到疫苗免疫后产生保护效果的所需的时间， 免疫应该在4 周龄左右为宜，过早免疫，可能受母源抗体的影响导致免疫效果差。 总之， 通过对未免疫猪群的PRRSV 抗体检测，了解PRRSV 抗体消长规律，对猪场制定合理的PRRS 免疫程序具有重要意义。□

[1]Spilman M S，Welbon C，Nelson E，et al. Cryo-electron tomography of porcine reproductive and respiratory syndrome virus: organization of the nucleocapsid[J]. J Gel Virol，2009，90(3)：527-535.

[2]Edwards S，Robertson I B，Wilesmith J，et al. PRRS “( blueeared pig disease”) in Great Britain[J]. American Association of Swine Practitioners Newsletter，1992,4(4):32-36.

[3]Keffaber K K. Reproductive failure of unknown etiology[J].AmAsso Swine Pract News Letter，1989,1(2)：1-9.

[4]姜 平，简中友，马志勇，等. 中国某地区猪繁殖和呼吸综合征流行病学调查及病毒分离[J]. 南京农业大学学报，1996，19(3)：118.

[5]Van Der Meer Y，van Tol H，Locker J K，et al. ORF1a-encoded replicase subunits are involved in the membrane association of the arterivirus replication complex[J]. J Virol，1998，72(8)：6689-6698.

[6]Johnson C R，Griggs T F，Gnanandarajah J，et al. Novel structural protein in porcine reproductive and respiratory syndrome virus encoded by an alternative ORF5 present in all arteriviruses[J]. J Gen Virol，2011,92(5)：1107-1116.

[7]Snijder E J，Meulenberg J J. The molecular biology of arteriviruses[J]. J Gen Virol，1998,79(5)：961-980.