高效液相色谱法测定便通胶囊中柚皮苷和新橙皮苷的含量

汪勇良，窦雁

(浙江省舟山市普陀区市场监督管理局 药品医疗器械监管科，浙江 舟山 316100)



高效液相色谱法测定便通胶囊中柚皮苷和新橙皮苷的含量

汪勇良Δ，窦雁

(浙江省舟山市普陀区市场监督管理局 药品医疗器械监管科，浙江 舟山 316100)

目的 建立便通胶囊中柚皮苷和新橙皮苷的含量测定方法。方法 使用C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.1 %磷酸溶液(20:80)为流动相，检测波长为283 nm，流速1.0 mL/min，柱温为30 ℃。结果 液相色谱图中各组分分离度良好，柚皮苷进样量在0.1147～2.867 μg，新橙皮苷进样量在0.0807～2.0169 μg范围内呈良好线性关系。2类成分的加样回收率分别为98.7 %和98.4 %。结论 本方法专属性强，检测灵敏度高，数据重现性好，前处理操作简便，可作为便通胶囊中柚皮苷和新橙皮苷的质量控制方法。

便通胶囊；柚皮苷；新橙皮苷；高效液相色谱法

便通胶囊由白术、肉苁蓉、当归、桑葚、枳实和芦荟共6味中药组成，具有健脾益肾、润肠通便的功效。常用于脾肾不足，肠腑气滞所致的便秘。目前该本品执行的质量标准为国家食品药品监督管理局标准WS3- 245(Z - 026)- 2005(Z)，标准含量测定项下仅考察了芦荟苷一种指标成分，测定指标相对单一，无法全面、有效地反映制剂的内在质量。鉴于便通胶囊中所含枳实药材具有破气消积，化痰散痞的作用，常用于治疗积滞内停，痞满胀痛，大便不通，痰滞气阻等症，是方中君药。因此，本研究使用高效液相色谱法建立便通胶囊中柚皮苷和新橙皮苷的含量测定方法，以期作为本制剂质量控制的分析方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品与试剂：便通胶囊(武汉健民药业集团股份有限公司，批号：141108、150330、150513)。

柚皮苷对照品(批号：110722-201312，纯度94.7 %)，新橙皮苷对照品(批号：111857-201102，纯度99.6 %)均购于中国食品药品检定研究院；乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。

1.1.2 仪器：Agilent1260液相色谱系统 (美国安捷伦公司)；ME204电子天平(梅特勒-托利多仪器公司)；HWS-24电热数显恒温水浴锅(上海一恒)；UC300超声波清洗机(中国科学院声学研究所)。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

① 色谱柱：Agilent Zorbax Extend C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温：30 ℃；检测波长：283 nm；流动相：乙腈-0.1 %磷酸溶液(20:80)；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。

② 对照品溶液的制备：精密称取柚皮苷对照品30.28 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.5735 mg/mL的柚皮苷对照品贮备液；精密称取新橙皮苷对照品20.25 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.4034 mg/mL的新橙皮苷对照品贮备液；分别精密量取前述对照品贮备液各1、2、5、10、25 mL，置50 mL的容量瓶中，加70 %甲醇至刻度，摇匀，作为工作对照品溶液1#～ 5#。

③ 供试品溶液的制备[1-3]：取本品内容物，混匀、研细，取0.5 g，精密称定，置回流瓶中，加入70%甲醇50 mL，称定重量，加热回流30 min，取出，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

1.2.2 空白对照溶液：根据便通胶囊处方工艺制备缺枳实的空白样品，按“1.2.1”项下“③”供试品溶液制备方法制备空白对照溶液。

1.2.3 系统适应性试验：精密吸取“1.2”项下供试品溶液、对照品溶液、空白对照品溶液各10 μL，按“1.2.1”项下“①”色谱条件进行测定。

1.2.4 线性关系考察：精密吸取“1.2.1”项下②对照品溶液1#～ 5#各10 μL，按前述色谱条件，依次注入高效液相色谱仪，以对照品的进样量(μg)为x轴，相应的色谱峰峰面积为y轴，用最小二乘法进行线性回归。

1.2.5 精密度试验：取同一份便通胶囊供试品溶液(批号：150330)，按前述色谱条件，重复进样5次，测定供试品溶液中柚皮苷和新橙皮苷的峰面积，并计算各色谱峰的相对标准偏差(RSD)。

1.2.6 稳定性试验：按前述色谱条件，取同一份供试品溶液(批号：150330)，分别于制备后的0、2、4、8、12、24 h时进样，测定柚皮苷和新橙皮苷的峰面积，计算RSD。

1.2.7 重复性试验：称取同一批便通胶囊(批号：150330)内容物0.5 g为1份，共取6份，按供试品制备方法制备，并按要求分别进样，测定柚皮苷和新橙皮苷的峰面积，计算RSD。

1.2.8 加样回收试验：取批号为150330供试品0.25 g为1份，共取9份，精密称定，分别按比例加入工作对照品溶液5#适量，按前述供试品溶液制备方法制备，依次进样测定柚皮苷和新橙皮苷的色谱峰峰面积，计算加样回收率。

1.2.9 样品测定：对所收集到的不同批号供试品进行处理，制备成相应的供试品溶液，精密吸取上述供试品溶液和工作对照品溶液4#各10 μL分别注入高效液相色谱仪，依法测定，计算各批号供试品中柚皮苷和新橙皮苷的含量。

2 结果

2.1 系统适应性试验 供试品色谱图中，在与柚皮苷、新橙皮苷对照品色谱峰相同的位置上，显示相同保留时间的色谱峰，而阴性对照溶液在该保留时间处出无色谱峰出现，说明阴性对照溶液对柚皮苷和新橙皮苷的测定无干扰，供试品色谱中目标色谱峰的分离度均不低于1.5，理论板数按柚皮苷峰计算为4957，说明方法的系统适应性良好。见图1。

图1 便通胶囊的高效液相色谱图 1：柚皮苷；2：新橙皮苷Fig.1 HPLC Chromatograms of Biantong Capsule1：naringin; 2：neonaringin

2.2 线性关系考察 柚皮苷和新橙皮苷的回归方程分别为y = 2.517×103x+3.694(r=0.9994)，y=3.048×103x+2.811(r=0.9997)。结果表明，柚皮苷的进样量在0.1147～ 2.867 μg范围内，新橙皮苷的进样量在0.0807～ 2.0169 μg范围内与其色谱峰峰面积呈一定的线性关系。

2.3 精密度试验 2组分峰面积的RSD分别为1.4 %和0.9 %，表明试验所用仪器的精密度符合要求。

2.4 稳定性试验 供试品溶液中柚皮苷和新橙皮苷色谱峰面积RSD分别为1.7 %和1.3 %。证明处理后的供试品溶液中的目标成分在制备后的24 h内稳定。

2.5 重复性试验 测得柚皮苷和新橙皮苷的平均含量分别为7.75 mg/g和5.41 mg/g，RSD值分别为1.1 %，1.7 %，说明本方法的重复性符合要求。

2.6 加样回收试验 其中，柚皮苷平均加样回收率为 98.7 %(RSD为0.76 %)，新橙皮苷为98.4 %(RSD为0.89 %)，说明本方法准确度较高，测定结果可靠。见表1。

表1 回收率试验(n=9)Tab.1 Results of recovery test (n=9)

2.7 样品测定 各批号供试品中柚皮苷和新橙皮苷的含量。见表2。

表2 样品测定结果(n=3)Tab.2 Results of sample determination(n=3)

3 讨论

3.1 提取溶剂及方法的选择 分别考察了乙醇、50 %乙醇、甲醇、70%甲醇等4种溶剂作为提取溶媒，并考察了加热回流提取[4]和超声提取[5]2种提取方式，发现选用70%甲醇作为提取溶媒时，供试品中柚皮苷和新橙皮苷的含量均较高，表明70%甲醇的提取效率稍高于其他3种溶剂；而加热回流的提取效果要优于超声提取，故选择了以70%甲醇为溶剂，采用加热回流提取对供试品进行处理。同时，对加热回流提取的时间进行了比较，发现供试品中的柚皮苷和新橙皮苷在加热回流0.5，1.0和1.5 h时的含量均较接近，表明2种成分在加热回流0.5 h后即能基本提取完全，故最终确定加热回流处理30 min。

3.2 色谱条件的选择和优化 考察了甲醇-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.1 %磷酸溶液2种液相色谱洗脱系统，发现乙腈- 0.1%磷酸溶液系统可有效缩短供试品中柚皮苷和新橙皮苷的出峰时间，且各色谱峰分离效果理想，色谱峰峰形对称，故采用乙腈- 0.1 %磷酸溶液作为试验所使用流动相系统。鉴于柚皮苷和新橙皮苷同属二氢黄酮类化合物，其化学结构相似，通过二极管阵列检测器在190～400 nm范围内进行全波长扫描，发现柚皮苷和新橙皮苷在283 nm附近均有最大吸收，而目标色谱峰周围其他杂质色谱峰较小，故选用283 nm作为试验测定波长。

3.3 检测指标的选择 《中国药典》将芸香科植物酸橙和其栽培变种，以及甜橙的干燥幼果统称为枳实[6]，张越颖通过比较发现采用酸橙枳实配制的制剂在治疗功能性消化不良脾虚气滞症的疗效优于甜橙枳实[7]，这可能与2者所含化学成分不同有关，其中新橙皮苷在酸橙中含量丰富，在甜橙中却无该成分[8]。而其他研究发现，枳实中以柚皮苷、新橙皮苷为代表的黄酮类成分均可改善功能性消化不良大鼠的胃排空和小肠推进[9]，且药代动力学研究结果也证实了枳实黄酮提取物中柚皮苷与新橙皮苷在吸收环节存在相互促进的作用[10]，在本次试验中所收集的3批便通胶囊样品中也均检出新橙皮苷成分，表明制剂中所使用的是酸橙枳实。因此，选择以柚皮苷和新橙皮苷作为检测指标，可保证相关制剂在临床使用过程中的效果。

综上本方法专属性强，检测灵敏度高，数据重现性好，前处理操作简便，可作为便通胶囊中柚皮苷和新橙皮苷的质量控制方法。

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[3] 刘源，沈好文. 高效液相色谱法同时测定枳实导滞丸中柚皮苷与橙皮苷含量[J].中国药业，2010，19 (20)：43 - 44.

[4] 黄爱华，曹骋，曾元儿，等．HPLC法测定不同规格酸橙枳实中新橙皮苷和柚皮苷的含量[J].药物分析杂志，2009，29(9)：1448-1450.

[5] 谢贞建，焦士蓉，李恺，等．RP-HPLC法测定不同产地枳实中的柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷[J].西华大学学报，2009，28(2)：65-67.

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[9] 黄爱华，迟玉广，曾元儿，等. 枳实黄酮对功能性消化不良大鼠胃肠动力的影响[J].中药新药与临床药理，2012，23(6)：612.

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(编校：王冬梅)

Determining the content of naringin and neonaringin in Biantong Capsule by HPLC

WANG Yong-liangΔ, DOU Yan

(Department of Medical Device Supervision, Zhejiang Zhoushan Putuo Market Supervisory Authority, Zhoushan 316100, China)

ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of naringin and neonaringin in Biantong Capsule.MethodsThe HPLC analysis was performed on a Zorbax Extend C18Column(250 mm×4.6 mm，5 μm), Acetonitrile-0.1 % phosphoric acid (20:80)as mobile phase, the detective wavelength was at 283 nm, flow rate was 1.0 mL/min, the column temperature was 30 ℃.ResultsNaringin and neohes peridin showed a good linear relationship with range in 0.1147-2.867 μg, 0.0807-2.0169 μg, respectively. The recovery were 98.7 % and 98.4 %. ConclusionThe method is simple, rapid, accurate and reliable. And it can be applied to control the quality of Biantong Capsule.

Biantong Capsule; naringin; neonaringin; HPLC

汪勇良，通信作者，男，大专，主管药师，研究方向：药品检测鉴定，E-mail：wangyongliang0606@163.com 。

R927.2

A

1005-1678(2015)12-0174-03