胆囊摘除术后患者白介素6、白介素10以及TNF-α水平变化研究

张献毅，杨华，龙胜林，林浩，陈应强

(1.贵阳医学院附属黔东南州人民医院 肝胆外科，贵州 贵阳 556000；2.贵阳医学院附属白云医院 肝病科，贵州 贵阳 550014)



胆囊摘除术后患者白介素6、白介素10以及TNF-α水平变化研究

张献毅1，杨华1，龙胜林1，林浩1，陈应强2Δ

(1.贵阳医学院附属黔东南州人民医院 肝胆外科，贵州 贵阳 556000；2.贵阳医学院附属白云医院 肝病科，贵州 贵阳 550014)

目的 探讨胆囊摘除术后患者白介素6、白介素10以及TNF-α水平变化。方法 收集胆囊结石需行胆囊切除术患者46例，根据手术术式不同分为实验组和对照组，每组各23例。对照组患者行开腹手术，实验组患者给予腹腔镜胆囊切除术。比较2组患者治疗前后IL-6、IL-10、TNF-α水平以及CD4+/CD8+T进行检测。结果 与手术前比较，2组患者IL-6、IL-10、TNF-α及CD4+T与CD4+/CD8+T上升(P<0.05)，与对照组比较，实验组IL-6、IL-10、TNF-α水平较低，CD4+/CD8+T水平较高(P<0.05)。结论 腹腔镜胆囊切除术能够明显减缓IL-6、IL-10以及TNF-α水平的升高，降低机体对手术的应激反应，并且减少手术中血流量，缩短手术时间。

腹腔镜胆囊摘除术；IL-6；IL-10；TNF-α

有文献报道[1]，外科手术应激反应会干扰免疫系统功能，总的来说是术后免疫功能受到抑制造成的免疫缺陷。手术刺激通过交感-肾上腺髓质系统使儿茶酚胺水平发生改变。通过下丘脑-垂体-腺体系统，使机体激素水平发生改变；通过单核-巨噬细胞系统的内皮细胞及中性粒细胞，激活和释放多种细胞因子，从而导致应激反应，激活和释放多种细胞因子如IL-1、IL-6、前列腺素(prostaglandin，PG)等的释放。应激反应是由各种伤害性刺激引起的一系列非特异的定型反应，并伴有众多组织和器官的功能变化[2]。免疫抑制的程度与外科手术应激的严重程度密切相关。创伤和手术刺激通。腹腔镜集诊断和治疗于一体，能够准确的诊断胆囊疾病的发生部位，并能给予治疗。腹腔镜胆囊切除术(laparoscopic cholecystectomy，LC)不同于以往的开腹手术(open operation，OC)，具有患者痛苦少、创伤小、恢复快等优点[3]，本研究通过观察不同术式胆囊摘除术后患者白介素6、白介素10以及TNF-α水平的变化，探究腹腔镜胆囊切除术对于术后并发症的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集贵阳医学院附属黔东南州人民医院肝胆外科2014年5月～2015年5月收治的胆囊结石需行胆囊切除术患者46例，根据就诊顺序随机分为实验组和对照组。其中实验组23例，组内男性12例，女性11例，平均年龄(49.41±5.84)岁；对照组23例，男性11例，女性12例，平均年龄(47.63±6.13)岁。所有患者均符合2011年中国中西医结合学会消化系统疾病专业委员会于苏州制定《胆石症中西医结合诊疗共识》中胆囊结石的诊断标准[4]，并经超声检查确诊，符合胆囊切除术的手术指证。2组患者一般资料相比差异无统计学意义。本实验获得本院伦理协会批准，并全程跟踪随访，监督。

1.2 纳入标准 所有患者符合胆囊结石的诊断标准，有典型的胆结石临床表现：反复发作的右上腹不适，并经B超检查证实胆囊炎伴胆囊结石，肝内胆管及胆总管未见结石。所有患者年龄在18～59岁之间，性别不限。所有患者均同意进行实验措施，并签署知情同意书。

1.3 排除标准 排除不符合诊断标准以及纳入标准的患者；排除妊娠期已经哺乳期妇女；排除伴有黄疸或胆总管结石以及肝内胆管结石的患者；排除合并有心脑血管疾病以及肝肾功能不全的患者；排除有血液疾病；凝血功能障碍的患者；排除合并胆管恶性肿瘤的患者；排除不同意进行治疗措施的患者。

1.4 方法

1.4.1 手术方法：对照组予以常规开腹手术，行胆囊摘除术治疗。实验组患者行腹腔镜胆囊切除术。手术前全麻处理，患者取合适体位，脐下0.5 cm处横行切开皮肤，气腹针穿刺，注入CO2，常规建立气腹，置入腹腔镜，利用腹腔镜探查腹腔内情况，确定胆囊结石位置，分离胆囊周围的粘连组织，解剖胆囊三角，夹闭胆囊动脉以及胆囊管，分离胆囊管和胆囊动脉，剥离胆囊，观察患者是否出血，用电凝刀彻底止血处理，术后常规引流。对照组行常规开腹胆囊切除术：于腹部取10 cm左右手术切口，分离皮下组织，暴露手术视野，切除胆囊。所有患者与入院后1 d及术后1 d取空腹血10 mL，置于20 mL抗凝管中，-4 ℃冰箱中备用。

1.4.2 术中出血量及手术时间：采用秒表，对照组从下第一刀开始计时，直至缝合结束，实验组从造气腹结束，置入腹腔镜开始计时，直至缝合操作孔。记录2组患者的术中出血量及手术时间。

1.4.3 IL-6、IL-10以及TNF-α水平检测：取血液样品1 mL离心10 min，3000 r/min，采用放射免疫分析法对患者IL-6、IL-10以及TNF-α水平进行检测，参考IL-6、IL-10以及TNF-α放射免疫试剂盒说明书严格操作。试剂盒购于武汉博士的生物技术有限公司，放射免疫γ计数器(SH-682，上海日环仪器厂)。

1.4.4 CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+T水平：采用双抗体夹心酶联免疫吸附法，检测患者血清CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+T水平，取血液样品1 mL，置于离心机中3000 r/min进行离心，取上清置于SpectraMax i3x多功能酶标仪[美谷分子仪器(上海)有限公司]中进行检测，试剂盒购于上海鑫乐生物科技有限公司，严格按照说明书进行操作检测。

2 结果

2.1 患者术中出血量及手术时间比较 与对照组相比，实验组患者的术中出血量明显减少，手术时间明显缩短，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组患者术中出血量及手术时间比较±s)Tab.1 Comparison of bleeding volume and operation ±s)

#P<0.05，与对照组相比，compared with control group

2.2 患者血清TNF-α、IL-10及IL-6水平比较 与手术前相比，手术后2组患者的TNF-α、IL-10及IL-6水平升高(P<0.05)；手术后与对照组相比，实验组患者TNF-α、IL-10及IL-6水平较低，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 治疗前后患者血清TNF-α、IL-10及IL-6水平比较Tab.

*P<0.05，与治疗前相比，compared with pre-operation；#P<0.05，与对照组相比，compared with control group

2.3 治疗前后患者CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+T水平比较 与治疗前相比，治疗后2组患者的CD4+T与CD4+/CD8+T上升(P<0.05)，实验组CD8+T水平下降(P<0.05)。与对照组相比，实验组治疗后CD4+T与CD4+/CD8+T较高(P<0.05)，CD8+T水平较低(P<0.05)。见表3。

表3 2组患者治疗前后CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T水平比较Tab.5 Comparison of CD4+T，CD8+T and CD4+T/CD8+T levels between two ±s)

*P<0.05，与治疗前相比，compared with pre-operation；#P<0.05，与对照组相比，compared with control group

3 讨论

腹腔镜外科的应用日益广泛，并已取代了部分传统手术。近几年腹腔镜外科临床研究进展非常快，手术种类非常多，腹腔镜手术的微创意义愈加明显。研究表明，腹腔镜胆囊切除术(laparoscopic cholecystectomy，LC)与开腹胆囊切除术(open cholecystectomy，OC)相比不仅具有切口小，对腹腔脏器的干扰小、患者痛苦小、恢复快等优点，而且对机体应激反应、呼吸功能、循环功能、胃肠道功能、代谢功能、免疫功能等影响也较小，在临床已经得到了广泛应用[5]。

本研究提示：开腹手术由于手术的切口范围大，暴露组织较大，因此组织损伤程度较为严重，IL-6与IL-10被报道能够几乎与炎症和组织损伤成正比，因此可见采用腹腔镜能够减少对病灶周围组织的损伤，减少机体应激反应，降低炎性水平显著控制组织损伤程度。对于机体免疫机能的影响，本研究发现腹腔镜能够明显增强机体的免疫应答反应，体现了腹腔镜手术对机体的保护作用。IL-6的来源广泛，目前已发现机体的多种淋巴以及非淋巴细胞如T淋巴、巨噬细胞、血管内皮细胞、造血干细胞等均能够产生IL-6。在产生IL-6的过程中，多种因素都对IL-6产生正向和负向的调节作用。IL-6最初被认为是T 细胞来源的淋巴因子，可诱导B细胞最终分化为抗体生成细胞[6]，其与受体结合后，促使B细胞分化，产生分泌抗体，促使T细胞分化为细胞毒性T细胞，促使干细胞增殖和分化。已经有研究表明，IL-6作为一种多效性细胞因子，是参与免疫调节和炎性反应的重要因子之一，是机体对感染和组织损伤所引起应答反应的主要介质，能够和集落刺激因子(colony-stimulating factor，CSF)协同作用，促进骨髓源细胞的生长和分化，增强自然杀伤细胞的裂解功能[7]。在损伤后能够协调防御反应中作用的细胞因子，促进中性粒细胞的活化，白细胞介素-10是新近发现的一种多功能负性调节因子参与免疫细胞、炎症细胞、肿瘤细胞等多种细胞的生物调节，并在自身免疫性疾病，严重感染性疾病 肿瘤及移植免疫等多种疾病中发挥重要作用[8]，在多种疾病中发挥了重要作用。

研究表明[9]，肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor factor-alpha，TNF-α)是一个多功能的细胞因子，以可溶型和跨膜型2种形式存在，主要介导免疫及炎症反应。并已经在多种疾病的免疫反应中得到证实。研究发现，TNF-α存在着保护性和有害的双重作用[10]，其过多分泌可对宿主产生有害作用。目前己知的体内有许多细胞均可表达TNF-α受体。本研究表明：手术后，2组患者的TNF-α水平均显著上升，手术后与实验组相比，对照组患者TNF-α水平较高(P<0.05)。有研究表明[11]，血浆TNF-α的水平与sTNFRs正相关。TNF-α除了对肿瘤细胞有特异的杀伤作用外，低浓度TNF-α可通过自分泌和旁分泌发挥作用，激活白细胞和内皮细胞的某些功能，诱发炎症反应；适量TNF-α对机体有免疫调节作用，但过量TNF-α以内分泌方式作用与全身可产生免疫损伤，参与炎症反应;中剂量可进入血循环促进IL-6等的释放，高剂量可引起多器官的功能衰竭甚至死亡。

本研究通过探讨胆囊摘除术后患者白介素6、白介素10以及TNF-α水平变化，证实了腹腔镜胆囊切除术能够明显减缓IL-6、IL-10以及TNF-α水平的升高，并且减少手术中血流量，缩短手术时间，对临床有指导意义。在下一步研究中，将对本实验得出的结论进行进一步的分析和论证，为本实验所得出的结果做出进一步论证。

[1] 夏亚斌，郑成竹.腹腔镜与开腹胃癌根治术的疗效及对患者免疫功能的影响[J].中国普通外科杂志，2013，22(7)：930-933.

[2] 钟慧红.手术患者应激反应对免疫功能的影响及护理干预措施[J].中国实用医药，2008，3(23)：146-148.

[3] 汪新天，刘翔峰.腹腔镜胆囊切除术中转开腹临床分析[J].中国医师杂志，2002，4(4)：413-414.

[4] 中国中西医结合学会消化系统疾病专业委员会.胆石症中西医结合诊疗共识[J].中国中西医结合杂志，2011，31(8)：1041-1043.

[5] 张风华，王海久，杨志奇，等.腹腔镜与开腹胆囊切除术对老年患者术后应激反应和疲劳综合征影响的对比研究[J].腹腔镜外科杂志，2011，16(9)：680-684.

[6] 龚小慧.IL-6与感染性疾病的关系[J].国外医学：儿科学分册，1996，(5)：238-241.

[7] 崔忠林.缺血预适应对大鼠肝移植缺血再灌注损伤的保护性作用研究[D].广州：南方医科大学，2014.

[8] 齐法莲，徐军，陈英剑.白细胞介素-10与临床研究[J].放射免疫学杂志，2004，17(1)：66-69.

[9] 秦永伟.雪旺细胞表达TNF-α在炎症过程中的作用及相关机制[D].南通：南通大学，2007.

[10] 孙尔维，李漓.TNF-α作用的两面性[J].生理科学进展，1997，(3)：18.

[11] 管彩虹.肿瘤坏死因子α在慢性阻塞性肺病发病机制中作用右上肺癌伴阻塞性肺炎被误诊为肺结核1例病例报告[D].杭州：浙江大学，2002.

(编校：谭玲)

Study on changes of IL-6, IL-10 and TNF-α after cholecystectomy

ZHANG Xian-yi1, YANG Hua1, LONG Sheng-lin1, LIN Hao1, CHEN Ying-qiang2Δ

(1.Department of Hepatobiliary Surgery, Qiandongnan people’s Hospital Affiliated to Guiyang Medical University, Guiyang 556000, China; 2.Department of Liver Disease, Baiyun Hospital Affiliated to Guiyang Medical University, Guiyang 550014, China)

ObjectiveTo investigate the changes of IL-6, IL-10 and TNF-α after cholecystectomy.Methods46 cases with cholecystolithiasis were selected and divided into 2 groups.23 in control group were treated with open cholecystectomy, experimental group were treated with laparoscopic cholecystectomy.The levels of IL-6, TNF-α, IL-10 and CD4+/CD8+T were compared in the two groups pre-and post-treatment.ResultsCompared with pre-treatment, two groups of patients with IL-10, TNF-α, IL-6 and CD4+T and CD4+/CD8+T increased (P<0.05), compared with control group, experimental group IL-10, TNF-α, IL-6, CD4+/CD8+T levels were higher (P<0.05).ConclusionLaparoscopic cholecystectomy can significantly reduce the IL-6, TNF-α and IL-10 levels, reduce the body′s stress response to surgery, and reduce blood flow, shorten the operation time.

laparoscopic cholecystectomy; IL-6; IL-10; TNF-α

贵州省高校联合基金(黔科合LH字[2014]7150)

张献毅，男，本科，副主任医师，研究方向：肝胆外科疾病、传染病学，E-mail：zhangxianyiys@163.com；陈应强，通讯作者，男，硕士，副教授，副主任医师，研究方向：传染病学，E-mail：chenyingqiang67@126.com。

R575

A

1005-1678(2015)08-0089-03