黄芩苷对帕金森病小鼠模型的影响

吴纪凯，王 琳，张 轶，梁 睿

（苏州卫生职业技术学院，江苏苏州215000）

黄芩苷对帕金森病小鼠模型的影响

吴纪凯，王 琳*，张 轶，梁 睿

（苏州卫生职业技术学院，江苏苏州215000）

目的 研究黄芩苷对帕金森病小鼠模型的影响。方法 60只雄性C57BL小鼠随机分为模型组、黄芩苷组、美多巴组、正常对照组。模型组小鼠腹腔注射30 mg／kg MPTP；黄芩苷组分别给予100 mg／kg黄芩苷灌胃和腹腔注射30 mg／kg MPTP；美多巴组给予31 mg／kg美多巴灌胃，1次／d；正常组给予等量生理盐水，1次／d，15 d。对4组小鼠的运动功能、脑纹状体DA、脑组织GSH、GSH－Px、MDA含量进行测定和统计分析。结果 模型组小鼠的悬挂实验、游泳实验分值均明显比黄芩苷组、美多巴组和正常对照组高（P＜0.05）；黄芩苷组的脑纹状体DA水平、GSH水平均明显比美多巴组和模型组高（P＜0.05）；黄芩苷组小鼠的脑纹状体GSH－Px、MDA水平均显著低于美多巴组和模型组（P＜0.05）。结论 黄芩苷预防给药能够有效保护帕金森病小鼠的神经功能，其作用机制可能与促进脑内抗氧化物质GSH水平的有效提升有相关联系。

黄芩苷；帕金森病小鼠模型；运动功能

帕金森病属于一种神经系统退行性疾病，老年人是多发人群，近年来其发病率呈现逐年上升的趋势。其临床症状能够在左旋多巴类药物的作用下得到显著改善，但是其远期疗效对于大部分患者来说并不理想，通常服药3～5年后就会减退，并引发诸多不良反应，如症状波动、精神症状等，给临床治疗带来极大的困难［1］。黄芩苷是黄酮类中药的有效成分，是由黄芩中提取而来，具有明显的抗氧化性，能够有效清除羟自由基、过氧亚硝基等［2］。相关医学研究［3］表明，氧化引发的DNA单链损伤能够影响到小鼠3T3及细胞上，而黄芩苷的作用可使其有效恢复。给予黄芩苷有助于增强机体抗氧化性，本研究对76只雄性C57BL小鼠的相关资料进行了统计分析，观察了黄芩苷对帕金森病小鼠模型的影响。报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 76只雄性C57BL小鼠（北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证号：BIOON－13287），月龄为11个月，体质量30～34 g。黄芩苷，购自苏州李良济药业有限公司，批号：030812，含生药量99.7%，盐酸多巴胺、1－甲基－4－苯基－1，2，3，6－四氢吡啶（MPTP）（Sigma公司），谷胱苷肽（GSH）、丙二醛（MDA）、谷胱苷肽过氧化酶（GSH－Px）试剂盒（南京建成生物工程研究所）。所有小鼠均分笼饲养，依据随机数字表法将其分为模型组（22只）、黄芩苷组（22只）、美多巴组（16只）、正常对照组（16只）4组。

1.2 方法 给予模型组小鼠腹腔注射MPTP，浓度为30 mg／kg，1次／d，连续注射3 d；给予黄芩苷组小鼠100 mg／kg黄芩苷灌胃，1次／d，连续使用15 d，灌胃后第8天给予小鼠腹腔注射30 mg／kg MPTP，1次／d，连续注射3 d；给予美多巴组小鼠美多巴灌胃治疗，浓度为31 mg／kg，1次／d，给予正常组小鼠等量生理盐水，持续灌注7 d。

1.3 观察指标

1.3.1 小鼠肢体运动功能检测 悬挂实验：将小鼠悬挂在一水平电线上，1分＝小鼠两前爪均无法将电线抓住，2分＝小鼠用一前爪将电线抓住，3分＝小鼠用两前爪将电线抓住，4分＝小鼠躯体上举；游泳实验：在水箱中放置小鼠，水箱规格和水温分别为20 cm×30 cm×20 cm和22～25℃，10分＝小鼠偶尔用后肢游动并在一边漂浮，15分＝小鼠偶尔游泳，20分＝小鼠漂浮至少50%，25分＝小鼠大部分时间游泳偶尔漂浮，30分＝小鼠10 min内连续不断游泳。将4组小鼠的悬挂实验和游泳实验得分计算出来，然后将其详细记录［4］。

1.3.2 小鼠脑纹状体多巴胺（DA）含量测定 运用HPLC法对小鼠脑纹状体多巴胺（DA）含量进行测量。对小鼠的运动功能进行有效检测后将其处死，在冰上放置，称重取出来的脑纹状体，并将其和5倍量0.1 mol／L高氯酸混匀，在低温离心机中放置并进行离心运动，在4℃条件下，以10 000 r／min离心20 min，分析上清液色谱。色谱柱Luna C－18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相甲醇为0.05 mol／L，磷酸氢二钠为0.02 mol／L，柠檬酸为5%∶72%∶23%，流速为1.0 mL／min，检测波长为280 nm，柱温为25℃［5］。

1.3.3 小鼠脑组织MDA、GSH、GSH－Px含量测定将小鼠脑组织纹状体取出后严格依据试剂盒说明书中的方法测定其余脑组织的MDA、GSH、GSH－Px含量［6］。

1.4 统计学处理 对本研究中所有数据进行统计学处理的过程中运用统计学软件SPSS 20.0，用均数±标准差（¯x±s）表示计量资料，用t检验组间比较，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 4组小鼠的运动功能测定结果比较 模型组小鼠的悬挂试验分值均明显比黄芩苷、美多巴组和正常对照组高（P＜0.05），悬挂实验分值越高，小鼠抓住电线越牢固；说明小鼠肢体运动协调情况越好，反之，则说明小鼠震颤、肌强直等情况严重；模型组小鼠的游泳实验分值明显比美多巴组、正常对照组以及黄芩苷组低（P＜0.05），游泳分值越高小鼠游泳的时间越多；说明小鼠肢体运动协调情况越好，反之，则说明小鼠震颤、肌强直等情况严重，见表1。

表1 4组小鼠的运动功能测定结果比较（¯x±s）

2.2 4组小鼠的脑纹状体DA、脑组织MDA、GSH、GSH－Px含量测定结果比较 黄芩苷组的脑纹状体DA水平、GSH水平均明显比美多巴组和模型组高（P＜0.05）；黄芩苷组小鼠的脑纹状体GSH－Px、MDA水平均显著低于美多巴组和模型组（P＜0.05），见表2。

表2 4组小鼠的脑纹状体DA、脑组织GSH－Px、GSH、MDA含量测定结果比较（¯x±s）

3 讨论

相关医学研究［7－9］表明，帕金森的发病受到氧自由基的直接影响，帕金森患者处于氧化应激状态，脑黑质中和正常人相比具有明显较多的固醇类过氧化物，增加了血清MDA，同时显著增加8－羟基脱氧鸟苷（DNA氧化标志物），降低黑质纹状体中GSH水平及脑中水解酶、GSH－Px的活性，同时血中自由基（由多形核白细胞产生）的数量也显著增多。临床普遍认为，给予C57BL小鼠腹腔注射神经毒素MPTP制备的帕金森模型较为理想［10］。本研究［11］结果表明，黄芩苷组小鼠的悬挂实验分值、游泳实验分值均明显比模型组、美多巴组和正常对照组高（P＜0.05）和相关医学研究结果一致。治疗后的结果提示说明了模型动物的神经能够在黄芩苷预防及治疗给药的作用下得到切实有效的保护，其作用机制与促进脑内抗氧化物质GSH水平的有效提升有相关联系。具体来说是GSH属于抗氧化保护性物质，在体内发挥着极为重要的作用。以往研究［12－13］表明，疾病和部位选择性是帕金森患者黑质GSH含量降低的主要性质。但是促进神经细胞凋亡的减少、促进DA释放等是否是其作用机制还需要相关实验进行进一步验证。本研究将初步的实验依据提供给临床黄芩苷抗帕金森病的治疗工作，更为深入的探讨还需要进一步的深入研究和分析。

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［2］吴正治，ANDREW C H，朱庆伟，等．安颤灵对泛素－蛋白酶体通路损伤细胞模型的保护作用［J］．中华神经医学杂志，2009，8（9）：877－880．

［3］段冷昕，李瑞芳，金瑾，等．黄连解毒汤对MPTP所致帕金森病小鼠的防治作用［J］．中国老年学杂志，2010，30（14）：2004－2006．

［4］段凯，唐瑛．半夏总生物碱对帕金森病大鼠的学习记忆及氧化应激反应的影响［J］．中国实验动物学报，2012，20（2）：49－53．

［5］金泽，王玉琳，姜珊珊，等．洋金花对帕金森病大鼠脑纹状体组织SOD、GSH－Px影响的研究［J］．中医药信息，2013，30（2）：87－90．

［6］宋扬文，陈忻，张楠，等．黄芩苷抑制鱼藤酮帕金森病大鼠黑质铁积聚及作用机制［J］．中国药理学通报，2011，27（12）：1740－1744．

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［8］王亚丽，刘燕．疏筋解毒方对PD大鼠中脑DA及其代谢产物含量的影响［J］．现代中医药，2010，30（1）：41－42．

［9］王亚丽，刘燕．疏筋解毒方对PD大鼠黑质纹状体Bcl－2／BaxmRNA表达的影响［J］．陕西中医学院学报，2010，33（1）：42－43．

［10］杨海东，林碧莲．人参皂苷Rg1拮抗MPTP诱导小鼠黑质中铁增高的作用［J］．山西医科大学学报，2011，42（1）：10－14．

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［12］DEVOS D，DEFEBVRE L，BORDET R．Dopaminergic and nondopaminergic pharmacological hypotheses for gait disorders in Parkinson's disease［J］．Fundamental&Clinical Pharmacology，2010，24（4）：407－421．

［13］赖道旭，郭宝剑，程俊辉，等．司来吉兰对帕金森病小鼠运动能力的影响［J］．中南药学，2013，11（6）：421－424．

Effects of Baicalin on mouse model with Parkinson's disease

WU Jikai，WANG Lin*，ZHANG Yi，LIANG Rui
（Suzhou Health College，Suzhou 215000，Jiangsu Province，China）

Objective To study the effects of baicalin on mouse model with Parkinson's disease．Methods The 60 male C57BL mice were were randomly divided into model group，baicalin group，the US－dopa group and normal control group，the model group were given intraperitoneal injection 30 mg／kgMPTP，the baicalin group were given 100 mg／kg baicalin gavage 30 mg／kgMPTP，the US－dopa group to 31 mg／kg lavage treatment，1 times a day，the normal group was given equal saline，1 times a day，15 d．Then the motor function，brain striatal DA，brain tissue GSH，GSH－Px，MDA content and nigra TH immunohistochemical staining of the three groups of mice were measured and statistically analyzed．Results Model mice suspension test，swimming test scores were significantly higher than the baicalin group，US－dopa group and normal control group（P＜0．05）；brain striatal DA levels baicalin group，GSH levels were significantly Bimei dopa and model groups of high（P＜0．05）；striatum baicalin group of mice GSH－Px，MDA levels were significantly lower than madopar group and model group（P＜0．05）．Conclusion Baicalin prophylaxis can effectively protect mice with Parkinson's disease．

Baicalin；mouse model of Parkinson's disease；exercise function

R285.5

A

2095－6258（2015）03－0454－03

2014－12－17）

10．13463／j．cnki．cczyy．2015．03．006

苏州市吴门医学发展中心基金项目“吴门民间验方的现代制剂研究”（201412）。作者简介：吴纪凯（1970－），男，大学本科，讲师，主要从事中药药理学研究。

*通信作者：王 琳，硕士，讲师，电子信箱－wujik70＠163．com