苦橘咳喘合剂的止咳化痰作用与急性毒性

邓恢进，李霞 ，张金美，余永鑫，邹欣，徐丽君

(1.武汉市江夏区中医医院药剂科，武汉 430200； 2.武汉市江夏区中医医院中医内科，武汉 430200；3.华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所，武汉 430030)

苦橘咳喘合剂的止咳化痰作用与急性毒性

邓恢进1，李霞1，张金美1，余永鑫2，邹欣3，徐丽君3

(1.武汉市江夏区中医医院药剂科，武汉 430200； 2.武汉市江夏区中医医院中医内科，武汉 430200；3.华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所，武汉 430030)

目的 观察苦橘咳喘合剂的止咳化痰效果，评价其急性毒性。方法 采用小鼠氨水引咳实验、小鼠酚红实验、二甲苯小鼠耳廓肿胀实验和最大耐受量实验。结果 镇咳实验中苦橘咳喘合剂小、中、大剂量组R值分别为112.26%，143.30%，162.07%，分别呈现为无效、有效和显效；苦橘咳喘合剂大、中剂量组能显著增加小鼠气管酚红排泌量，与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，且呈良好量效关系；苦橘咳喘合剂小 、中、大剂量组均能显著改善二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度(P<0.01)，且呈良好量效关系；其最大耐受量为326.76 g·kg-1。结论 苦橘咳喘合剂中、大剂量具有一定的镇咳祛痰作用和良好的抗炎效果，且安全性较好。

苦橘咳喘合剂；止咳作用；化痰作用；毒理学，急性

苦橘咳喘合剂(原名咳喘安口服液)是武汉市江夏区中医医院临床使用多年的经验方，用于治疗急慢性气管炎、支气管炎等，取得了良好疗效。为确保苦橘咳喘合剂安全、有效，并为进一步申报医院内制剂奠定基础，笔者按照国家食品药品监督管理局颁布实施的《药品注册管理办法》中有关中药、天然药物注册分类第6类的有关项目要求，进行止咳化痰药效学研究和急性毒性研究。

1 材料与方法

1.1 动物 昆明种小鼠，体质量22～28 g，清洁级，雌雄各半，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。动物合格证号：SCXK(鄂)2010-0009，使用许可证号：20081293，饲养环境：温度20～25 ℃，相对湿度40%～70%，光照时间12 h。

1.2 药品与试剂 苦橘咳喘合剂(武汉市江夏区中医医院提供，批号：13032501)；急支糖浆(太极集团重庆涪陵制药厂有限公司提供，批号：z50020615)；阿司匹林肠溶片(神威药业集团有限公司提供，批号：1210201)； 氨水(武汉联碱厂提供，浓度25%～28%，分析纯，批号：130106，使用时浓度稀释至12.5%)；氯化铵(武汉中天化工试剂有限公司提供，分析纯，批号：20120910)；苯酚红(天津市大茂化学试剂厂提供，批号：20100617)；碳酸氢钠(国药集团化学试剂有限公司提供，分析纯，批号：F20100607)。

1.3 仪器 Synergr2全能酶标仪(美国)；AEL-200 型万分之一电子分析天平(日本岛津公司)。

1.4 小鼠氨水引咳实验 昆明种小鼠70只，体质量20～25 g，雌雄各半。将小鼠逐只放入倒置的500 mL烧杯中，立即将棉球(棉球中注入12.5%氨水2.5 mL)塞入烧杯中，从塞入棉球时开始计时，记录3 min内小鼠的咳嗽次数和咳嗽潜伏期[1-2]。将以下几种情况的小鼠剔除：①3 min内咳嗽次数<10次或>80次；②潜伏期<15 s或>50 s；③动物死亡、状态不佳、反应异常剧烈等。经剔除后选取小鼠60只，称质量标记后随机分为5组，每组12只，即正常对照组，急支糖浆组(13.33 mL·kg-1)，苦橘咳喘合剂小剂量组(6.67 mL·kg-1)、中剂量组(13.33 mL·kg-1)、大剂量组(26.67 mL·kg-1)，连续灌胃7 d。正常对照组给予等体积纯化水。末次给药前小鼠禁食不禁水12 h，给药后1 h，将小鼠放入自制引咳装置中，根据序贯法原则给予小鼠预定时间氨水喷雾刺激，立即取出小鼠，观察1 min内小鼠咳嗽次数，若1 min内出现3次以上典型咳嗽动作，即腹肌或胸腔收缩同时张大嘴，有时可有咳嗽声，算作有咳嗽，记作“+”；否则算作无咳嗽，记作“-”。计算引起半数小鼠咳嗽所需的喷雾时间(EDT50)，计算R值，若130%

1.5 小鼠酚红祛痰实验 昆明种小鼠72只，体质量20～25 g，雌雄各半，称质量标记后按随机数字表法分为6组，每组12只，即正常对照组，氯化铵组(10.00 mL·kg-1)，急支糖浆组(13.33 mL·kg-1)，苦橘咳喘合剂小剂量组(6.67 mL·kg-1)、中剂量组(13.33 mL·kg-1)、大剂量组(26.67 mL·kg-1)，连续灌胃7 d，正常对照组给予等体积纯化水。末次给药前小鼠禁食不禁水12 h，给药后30 min，腹腔注射0.5%酚红0.9%氯化钠溶液0.5 mL，注射后30 min处死小鼠，剪开颈正中皮肤，分离并剪下自甲状软骨下至支气管分支处的一段气管，将各气管段放入预先盛有5%碳酸氢钠溶液1 mL的 EP管中，超声震荡，使气管段中的酚红完全释放，546 nm处测吸光度(A)值，根据回归方程计算出酚红的含量[3-4]。酚红含量 =(A-0.056 2)/0.044 4，R2=0.989 8。

1.6 小鼠耳廓肿胀实验 雄性昆明种小鼠72只，体质量20～25 g，称质量标记后随机分为6组，每组12只，即正常对照组、阿司匹林组(200 mg·kg-1)、急支糖浆组(13.33 mL·kg-1)、苦橘咳喘合剂小剂量组(6.67 mL·kg-1)、苦橘咳喘合剂中剂量组(13.33 mL·kg-1)、苦橘咳喘合剂大剂量组(26.67 mL·kg-1)，连续灌胃7 d，正常对照组给予等体积纯化水。末次给药前小鼠禁食不禁水12 h，给药后30 min，将致炎剂二甲苯30 μL均匀涂在小鼠右耳前后两面，致炎后30 min颈部脱臼处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用直径8 mm打孔器在两耳同一部位打下圆耳片，电子分析天平称质量[5]。计算肿胀度和肿胀率。肿胀度=右耳片质量-左耳片质量；肿胀率(%)=(右耳片质量-左耳片质量)/左耳片质量×100%。

1.7 苦橘咳喘合剂最大耐受量测定 昆明种小鼠40只，雌雄各半，适应性饲养2 d后，随机分成2组，即正常对照组和苦橘咳喘合剂组，每组20只。实验前禁食12 h，苦橘咳喘合剂组以11.67 g·mL-1苦橘咳喘合剂药液，按最大容积0.7 mL·20 g-1分两次给予小鼠灌胃，给药剂量为326.76 g·kg-1(按生药量计)；正常对照组同法给予同体积对照溶液(0.5%羧甲基纤维素钠溶液)，两次用药时间相隔8 h。观察动物体质量变化、饮食、外观、行为、分泌物、排泄物等，记录所有动物的死亡情况、中毒症状及中毒反应的起始时间、严重程度、持续时间等。对于濒死及死亡动物进行大体解剖，其他动物在观察期结束后进行大体解剖。肉眼观察主要脏器的体积、颜色、质地等情况；若出现异常则对改变器官进行组织病理学检查[6]。 共观察7 d，详细观察给药后4 h内动物的反应情况，每天上、下午各观察1次。

1.8 统计学方法 使用SPSS 20.0版统计软件，采用t检验进行数据分析；并采用χ2检验进行阳性率的比较。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 止咳作用 中、大剂量苦橘咳喘合剂对模型小鼠有较好的止咳作用。结果见表1。

表1 5组小鼠止咳效果比较

Tab.1 Comparison of cough relieving effect among five groups of mice

组别小鼠数剂量/(mL·kg-1)EDT50/sR值/%止咳效果正常对照组12…26.1……急支糖浆组1213.3332.9126.05无效苦橘咳喘合剂 小剂量组116.6729.3112.26无效 中剂量组1113.3337.4143.30有效 大剂量组1226.6742.3162.07显效

2.2 祛痰作用 结果见表2。

结果显示，苦橘咳喘合剂小、中、大剂量组在增加小鼠气管酚红排泌量方面呈现出良好的量效关系，其中，中、大剂量组能显著增加小鼠气管酚红排泌量，与正常对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；而急支糖浆组表现为无效，与正常对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

表2 6组小鼠气管酚红排泌量比较

Tab.2 Comparison of phenolsulfonphthalein excretion in the trachea among six groups of mice±s

与正常对照组比较，t=6.236，*1P<0.01，t=2.031，*2P<0.01，t=0.957，*3P<0.05，t=0.957，*4P<0.05，t=2.140，*5P<0.01，t=4.846，*6P<0.01

Compared with normal control group，t=6.236，*1P<0.01，t=2.031，*2P<0.01，t=0.957，*3P<0.05，t=0.957，*4P<0.05，t=2.140，*5P<0.01，t=4.846，*6P<0.01

2.3 抗炎作用 与正常对照组比较，苦橘咳喘合剂小、中、大剂量组小鼠耳肿胀均明显改善(均P<0.01)。结果见表3。

表3 6组小鼠耳廓肿胀情况比较

Tab.3 Comparison of auricle swelling among six groups of mice±s

与正常对照组比较，5.175≤t≤14.581，*1P<0.01

Compared with normal control group，5.175≤t≤14.581，*1P<0.01

2.4 苦橘咳喘合剂最大耐受量 苦橘咳喘合剂组动物于给药后4 h内，用药组活动减少。1周内，两组小鼠的摄食、饮水、粪便、肤色、黏膜、皮毛、呼吸等均未发生异常，且各组小鼠均无死亡。两组小鼠体质量及其体质量增加百分率均差异无统计学意义(均P>0.05)，结果见表4；7 d后，动物处死，作系统尸检，结果各主要脏器均未发现异常变化。提示苦橘咳喘合剂口服给药的最大耐受量为326.76 g·kg-1(按生药量计)，按千克体质量计算相当于每日临床剂量的333.4倍；按动物系数折算相当于每日临床剂量的33.3倍。见表4。

表4 小鼠最大耐受量实验中体质量变化

Tab.4 Changes of body weight of mice in maximum tolerance dose experiment±s

3 讨论

苦橘咳喘合剂由苦杏仁、橘红、生石膏、蒲公英等中药组成，具有宣肺平喘、化痰止咳的功效。该药在多年临床应用中治疗急慢性气管炎、支气管炎等疗效确切。本实验通过小鼠氨水引咳实验、小鼠酚红祛痰实验和小鼠耳廓肿胀实验，证实了该制剂具有较好的抗炎止咳化痰作用。由于在多年临床应用中，未有发现患者反馈其不良反应，实验中无法测得半数致死量，故只能进行最大耐受量测定，结果表明其最大耐受量是能够达到的最大口服给药量，观察期内未见任何毒性反应及死亡情况，说明该制剂急性毒性较小，可以推广应用于临床。

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[2] 徐叔云，卞如濂，陈修，等.药理实验方法学[M].2版.北京：人民卫生出版社，2001：886.

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[4] 国家食品药品监督管理局药品评审中心.药物研究技术指导原则(征求意见稿)-中药、天然药物分册[M].北京：中国医药科技出版社，2003：23-25.

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[6] 中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学) [M].北京：人民卫生出版社，1993：203-204.

DOI 10.3870/yydb.2015.05.009

Eliminating Phlegm and Stopping Cough byKujyukekuanMixtures and Its Acute Toxicity

DENG Huijin1, LI Xia1,ZHANG Jinmei1,YU Yongxin1, ZOU Xin2, XU Lijun2

(1.DepartmentofPharmacy,2.ChineseInternalMedicine,HospitalofTraditionalChineseMedicine,JiangxiaDistrict,Wuhan430200,China;3.InstituteofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine,TongjiHospital,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430030,China)

Objective To study the relieving cough and reducing phlegm effects and acute toxicity of theKujyukekuanmixtures. Methods The method used in our study is a cough model induced by the ammonia water , the phenol red test in mice，the mouse pinna swelling model induced by xylene and the maximum tolerant dose test. Results In antitussive experiments, R value ofKujyukekuanmixtures at low, medium and high dose of was 112.26%, 143.30%, 162.07%, respectively regarding as ineffective, effective and marked effective;Kujyukekuanmixtures at medium and high doses increased the excretion of phenolsulfonphthalein in the trachea of mice (compared with the normal control group,P<0.05 orP<0.01)，the results showed good concentration-response relationship；Kujyukekuanmixtures at low, medium and high dose significantly reduced mouse auricle swelling caused by xylene (compared with normal control group,P<0.01), the results presented a good concentration-response relationship; the MTD ofKujyukekuanmixture was 326.76 g·kg-1. ConclusionKujyukekuanmixtures at medium and high doses exert significant eliminating cough and phlegm effects and strong anti-inflammatory property, and are safe.

Kujyukekuanmixtures；Relieving cough effects; Reducing phlegm effects； Toxicity,acute

2013-09-02

2013-11-27

邓恢进(1967-)，男，湖北武汉人，副主任药师，学士，研究方向：中药制剂。电话：027-87013947，E-mail：dhjmm@163.com。

徐丽君(1966-)，女，湖北武汉人，副主任药师，研究方向：中药化学及中药药理。电话：027-83663660，E-mail：xli0904@tjh.tjmu.edu.com。

R286；R285.5

A

1004-0781(2015)05-0603-03