肾康灵干预小儿原发性肾病综合征的CXCL16、解聚素金属蛋白酶10变化

郑健， 艾斯， 杨帆， 邱彩霞， 卢小露

临床论著

肾康灵干预小儿原发性肾病综合征的CXCL16、解聚素金属蛋白酶10变化

郑健， 艾斯， 杨帆， 邱彩霞， 卢小露

目的 通过观察原发性肾病综合征(PNS)患儿中药肾康灵干预治疗前后血清趋化因子CXCL16和解聚素金属蛋白酶(ADAM10)水平的变化。方法 将60例PNS患儿随机分为中西医结合组和西药对照组各30例。另同期选取健康儿童30例作为正常对照组。西药对照组予以单纯西药治疗，中西医结合组在西药对照组治疗基础上加用中药清解肾康灵煎剂，检测两组治疗前后的血清CXCL16和ADAM10水平，同时检测血清白蛋白、胆固醇和尿蛋白定量，观察治疗前后检测指标的变化。结果 (1)治疗前中西医结合组和西药对照组的CXCL16、ADAM10水平明显高于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；中西医结合组和西药对照组的CXCL16、ADAM10水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗3个月后中西医结合组和西药对照组的CXCL16、ADAM10水平高于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；中西医结合组的CXCL16、ADAM10水平明显低于西药对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。中西医结合组和西药对照组治疗3个月后血清CXCL16、ADAM10水平均明显低于治疗前，差异有统计学意义(P<0.01)，说明两组病情均有改善但未痊愈，中西医结合组较西药对照组改善更明显。(2)与治疗前比较，两组血清胆固醇和尿蛋白定量均显著降低，血清白蛋白明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。与西药对照组比较，中西医结合组血清胆固醇明显降低，血清白蛋白明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)，24 h尿蛋白定量两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CXCL16、ADAM10参与了小儿PNS的发病机制，中药肾康灵干预治疗能显著降低血清PNS患儿的CXCL16、ADAM10水平，降低尿蛋白、血胆固醇，升高血白蛋白，从而改善患儿病情，这可能与清除吞噬ox-LDL的血清CXCL16而发挥整体作用有关。

原发性肾病综合征； 趋化因子； 解聚素金属蛋白酶； 肾康灵； 儿童

原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome，PNS)是儿科常见的肾小球疾病，且病程中常表现为频繁复发，严重影响患儿身心健康。笔者应用益肾活血中药肾康灵干预治疗小儿PNS，从分子生物学水平阐明趋化因子CXCL16、解聚素金属蛋白酶(ADAM10)与小儿PNS的相关性及中药肾康灵干预治疗的作用机制。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2011-01/2012-12福建中医药大学附属人民医院收治门诊和住院的PNS患儿60例，按随机数字表法分为中西医结合组和西药对照组各30例。中西医结合组中男19例，女11例；年龄2～13岁，平均(6.2±2.2)岁，其中2～5岁13例，6～9岁10例，10～13岁7例。西药对照组中男18例，女12例；年龄2～13岁，平均(5.6±1.2)岁，其中2～5岁12例，6～9岁10例，10～13岁8例。同期在健康体检中心选取健康儿童30例作为正常对照组，其中男16例，女14例；年龄2～13岁，平均(7.2±1.8)岁，其中2～5岁2例，6～9岁18例，10～13岁10例。3组患儿在年龄、性别方面比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 诊断标准

1.2.1 西医诊断标准 符合中华医学会儿科分会肾病学组2009年制定的诊断标准[1]。(1)大量蛋白尿：1周内3次尿蛋白定性(+++)～(++++)，或随机或晨尿尿蛋白/肌酐≥2.0；24 h尿蛋白定量≥50 mg/kg；(2)低蛋白血症：血浆白蛋白<25 g/L；(3)高脂血症：血浆胆固醇>5.7 mmol/L；(4)不同程度的水肿。以上4项中(1)和(2)为诊断的必要条件。

1.2.2 中医诊断标准 符合“肾虚血瘀证”诊断标准[2]。以腰膝酸软，腰脊刺痛、拒按，耳鸣，舌淡紫，脉细涩等为常见症的证候。

1.3 纳入标准 (1)符合PNS诊断标准和肾虚血瘀证诊断标准；(2)年龄2～14岁；(3)经家长或监护人同意纳入研究并签署知情同意书。

1.4 排除标准 (1)先天性肾病综合征、遗传性肾病综合征者；(2)继发于系统性红斑狼疮、过敏性紫癜、乙肝或丙肝等继发性肾病综合征者；(3)合并有心血管、肝脏及造血系统严重疾病和精神病者；(4)未按规定用药，或无法判断疗效，或临床资料不全者。

1.5 治疗方法 PNS患儿均用泼尼松1.5～2.0 mg/(kg·d)，用至尿蛋白转阴后2周改为隔日顿服疗法，即泼尼松2 mg/kg，继用4周后开始逐渐减量，每2～4周减2.5～5.0 mg，疗程达1年以上。泼尼松无效应或部分效应者，加用环磷酰胺8～12 mg/(kg·d)静脉冲击疗法，每2周连用2 d，总剂量≤200 mg/kg，共6次；或用口服环孢素A 5 mg/(kg·d)，疗程1年以上。中西医结合组在治疗开始即加用肾康灵煎剂(自拟方：黄芪、生地黄各15 g，山茱萸、山药、茯苓、牡丹皮各10 g，三七5 g等)，水煎服，日一剂，用至泼尼松停药后2个月为止。

1.6 指标检测方法 受试者均在初次就诊时，于清晨8时空腹抽取肘静脉血3 mL，常规离心(15 min，3 000 r/min)，分离上清冻存于-20 ℃低温冰箱待测。两组患儿均在不间断治疗3个月后再次抽血冻存待测(方法同上)。采用ELISA法检测患儿血清中的CXCL16、ADAM10的分泌水平。同时采用全自动生化分析仪检测受试者治疗前及治疗后3个月血清白蛋白、血胆固醇以及24 h尿蛋白定量的变化。收集受试者晨尿，采用领苯三酚红-钼酸钠比色法测定尿蛋白定量。

2 结果

2.1 两组治疗前后血清CXCL16、ADAM10的变化 见表1。

表1 各组血清CXCL16、ADAM10比较

注：与治疗前比较，at=33.53，33.66，16.36，15.05，P<0.01。

表1结果表明，治疗前CXCL16、ADAM10水平3组比较，差异有统计学意义(P<0.01)，进一步进行两两比较，中西医结合组和西药对照组的CXCL16、ADAM10水平明显高于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；中西医结合组和西药对照组的CXCL16、ADAM10水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗3个月后CXCL16、ADAM10水平3组比较差异差异有统计学意义(P<0.01)，进一步进行两两比较，中西医结合组和西药对照组的CXCL16、ADAM10水平高于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；中西医结合组的CXCL16、ADAM10水平明显低于西药对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。中西医结合组和西药对照组治疗3个月后血清CXCL16、ADAM10水平均明显低于治疗前，差异有统计学意义(P<0.01)，说明两组病情均有改善但未痊愈，中西医结合组较西药对照组改善更明显。

2.2 两组治疗前后血清白蛋白、胆固醇、尿蛋白定量比较 见表2。

表2 两组治疗前后血清白蛋白、胆固醇、尿蛋白定量比较±s，n=30)

注：与治疗前比较，at=-2.27，2.06，P<0.05；bt=-6.05，4.45，5.50,4.02，P<0.01；与西药对照组比较，ct=-2.70，P<0.05，dt=3.18，P<0.01。

表2结果表明，与治疗前比较，两组血清胆固醇和尿蛋白定量均显著降低，血清白蛋白明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。与西药对照组比较，中西医结合组血清胆固醇明显降低，血清白蛋白明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)，24 h尿蛋白定量两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨论

PNS属于中医学的“水肿”“水气”“虚证”范畴，与血、气、水三者的相互作用密切相关。水停气阻，气滞血瘀；气不摄血，血溢脉外而成瘀；脾肾阳虚，失于温煦，日久寒凝血滞；久病入络，脉络瘀阻；阴虚火旺，热盛血耗，血液浓稠流行不畅而致瘀；因虚或长期应用激素使卫外不固，外邪入侵脉络不通易于成瘀。中药清解肾康灵是本院于多年治疗肾病经验中所得出的自拟方，经过多年研究，已认证了其在肾病方面辅助治疗的有效性。笔者既往的临床研究表明，在临床中以肾康灵为主的中西医结合治疗小儿肾病综合征有效率达88.89%，使其缓解率较二者单独治疗有明显提高[3]。其主要成分为黄芪、生地、山茱萸、山药、茯苓、牡丹皮、三七。方中黄芪补气升阳、利水消肿、益气行血，生地清热凉血、益肾活血，二药共为君药，主益肾活血；山茱萸补益肝肾、收敛固涩，山药益气养阴、补脾肾、固肾精，茯苓利水渗湿，牡丹皮活血凉血，三七活血化瘀止血。全方共奏益肾气、行气血、化其瘀之功效。相关研究表明，中药清解肾康灵能减轻免疫/炎症硬化介质对机体和肾脏的损害，纠正紊乱的免疫功能状态，改善频繁复发性肾病综合征患儿高凝状态，减少患儿复发率，提高激素的临床疗效[3]。

PNS患儿存在着血清CXCL16、ADAM10异常升高的表现，CXCL16、ADAM10作为吞噬肾脏损伤关键因子ox-LDL的重要成分，能促进肾脏炎症因子的黏附、聚集。趋化因子CXCL16对ox-LDL有较强的结合和内吞摄取能力，CXCL16对T淋巴细胞执行趋化激活作用，并与受体CXCR6一起参与树突状细胞与免疫T淋巴细胞间的相互作用。CXCL16既具有趋化因子的功能，又执行清道夫受体功能，成为疾病治疗中具有十分重要意义的靶分子，在免疫调节中可能具有双重作用[4]。解聚素与ADAM10可直接或间接参与炎症反应中粒细胞和T细胞的聚集。本研究结果表明，PNS患儿存在着血清CXCL16、ADAM10异常升高的表现，这可能与CXCL16、ADAM10作为吞噬肾脏损伤关键因子ox-LDL的重要成分，通过调控的方式直接或间接参与炎症反应中粒细胞和T细胞的聚集，从而起到促进肾脏炎症因子的黏附、聚集的作用，直接或间接参与了肾脏的损伤。益肾活血中药肾康灵干预治疗能显著降低PNS患儿血清CXCL16、ADAM10的水平，降低异常升高的尿蛋白、血脂，升高血白蛋白，从而改善患儿病情，这可能与中药肾康灵能清除吞噬ox-LDL的血清CXCL16而发挥整体作用有关。

[1] 中华医学会儿科学分会肾脏病学组.儿童常见肾脏疾病诊治循证指南(一)：激素敏感、复发/依赖肾病综合征诊治循证指南(试行)[J].中华儿科杂志,2009,47(3):167-170.

[2] GB/T 16751.1-3-1997中医临床诊疗术语疾病部分[S].1997.

[3] 郑健,褚克丹,林青,等.肾康灵治疗小儿频复发性肾病30例临床研究[J].福建中医学院学报,2009,19(2):1-3.

[4] McKimmie CS,Graham GJ.Astrocytes modulate the chemokine network in a pathogen-specific manner[J].Biochem Biophys Res Commun，2010,394(4):1006-1011.

(本文编辑：刘颖)

The changed of CXCL16 and ADAM10 in children with primary nephrotic syndrome interfered by Shenkangling decoction

ZHENGJian，AISi，YANGFan，etal.

FujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122，China.

Objective To observe the levels of CXCL16,a disintegrin and metalloprotease 10(ADAM10) in children with primary nephrotic syndrome(PNS) before and after intervention of traditional Chinese medicine Shenkangling,and to clarify the mechanism of PNS and the action of Shenkangling by molecular biology.Methods PNS children were randomly divided into the Shenkangling + western medicine group(n=30) and the western medicine group(n=30),and healthy children as normal control group were selected in the examination center(n=30).Serum CXCL16,ADAM10 were detected by ELISA in children with PNS before and after treatment, and at the same time, serum albumin(ALB), cholesterol(CH) and 24-hour urinary protein excretion efficacy evaluation were detected.Results In PNS children urinary protein excretion was elevated, serum ALB reduced,CH increased,CXCL16 and ADAM10 content increased(P<0.01).Compared to western medicine group, in Shenkangling + western medicine group CH and serum CXCL16 and ADAM10 content was reduced, serum ALB increased more significantly(P<0.01 orP<0.05).Both in Shenkangling + western medicine group and in western medicine group urine protein was decreased, but there was no difference between them.Conclusion CXCL16 and ADAM10 are involved in the pathogenesis of PNS,and traditional Chinese medicine Shenkangling can significantly reduce the levels of serum CXCL16 and ADAM10,reduce the urine protein and CH and elevate ALB, thus improving symptoms in children, which may be related to removal of serum CXCL16 by clearing up ox-LDL.

primary nephrotic syndrome； CXCL16； disintegrin and metalloprotease； Shenkangling； children

福建省科技计划项目资助(2008KJB-09)

350122 福州，福建中医药大学(郑健)；福建中医药大学研究生院(杨帆，邱彩霞，卢小露)；350004 福州，福建中医药大学附属人民医院儿科(艾斯)；350004 福州，福建省中西医结合肾脏病重点实验室(郑健，艾斯) 作者简介：郑健(1958-)，男，教授、主任医师。研究方向：小儿肾病的诊断与治疗，E-mail：13705056837@126.com。

10.3969/j.issn.1674-3865.2015.02.005

R692

A

1674-3865(2015)02-0112-04

2014-05-09)