不同厂家归脾丸（浓缩丸）中阿魏酸和甘草酸含量考察

赵群涛方永凯杨俊杰盚罡李丹（信阳市食品药品检验所，河南 信阳 464000；信阳农林学院生物技术系）

不同厂家归脾丸（浓缩丸）中阿魏酸和甘草酸含量考察

赵群涛1方永凯1杨俊杰2盚罡1李丹1（1信阳市食品药品检验所，河南 信阳 464000；2信阳农林学院生物技术系）

目的：建立以高效液相色谱法同时测定归脾丸（浓缩丸）中阿魏酸和甘草酸含量的方法，并考察不同厂家归脾丸（浓缩丸）的质量情况。方法：色谱柱为A gi l ent H C-C18（250 m m× 4.6 m m，5 μm）；以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，梯度洗脱；检测波长在320 nm和248 nm间切换；流速1.0 m L/m i n；柱温30℃。结果：阿魏酸进样量在0.066～ 1.989 μg，甘草酸进样量在0.123～ 3.690 μg范围内呈良好线性关系，回收率分别为98.8%和98.5%。结论：该方法灵敏、重复性好，可用于归脾丸（浓缩丸）的质量控制。测得的阿魏酸和甘草酸含量结果反映出不同厂家生产的归脾丸（浓缩丸）质量存在差异。

归脾丸（浓缩丸）；阿魏酸；甘草酸；含量测定

归脾丸（浓缩丸）由党参、白术、黄芪、当归、远志、酸枣仁、甘草等13味中药组成，现收载于《卫生部药品标准(中药成方制剂第七册)》，有益气健脾、养血安神的功效，用于心脾两虚，失眠多梦，头昏头晕，崩漏便血等症。原标准没有含量测定项，近年来同时测定其中当归和甘草的文献未见报道。该药中当归是补血养血的主要药物，甘草用于调和诸药、纠正各药的偏性，其主要有效成分分别是阿魏酸和甘草酸。目前当归和甘草野生资源枯竭，多为人工种植，不同地区药材的质量参差不齐，不同生产厂家采用的药材产地不同会影响归脾丸（浓缩丸）的质量，该药又是常用中成药，有必要对市场上不同厂家归脾丸（浓缩丸）的质量情况进行考察。

1 仪器与试药

A gi l ent 1260系列高效液相色谱仪；Preci sa 92SM-D R电子天平，基因型 1850摩尔超纯水机（重庆摩尔水处理设备有限公司）。阿魏酸（批号：110773-201012）购自中国食品药品检定研究院，甘草酸（批号：H Y 0037）购自上海华壹生物科技有限公司（纯度大于 98%）；甲醇、乙腈购于 D i km a Technol ogi es.IN C公司，均为色谱纯，水为I级超纯水，其他试剂均为分析纯。归脾丸（浓缩丸）均为市售，见表 2。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

A gi l ent H C-C18色谱柱（250 m m × 4.6 m m，5 μm）；流动相A为0.1%磷酸溶液，B为乙腈，梯度洗脱 0～ 18 m i n为15% B，18～ 19 m i n为15%→35%B，19～40 m i n为35%B，40～42 m i n为15%B；检测波长0～ 25 m i n为320 nm，25～40 m i n为248 nm；柱温30℃；流速1.0 m L/m i n；进样量10 μL。

2.2 试液的制备

2.2.1 混合对照品溶液精密称取两种对照品适量，加甲醇-冰醋酸（95∶5）制成含阿魏酸66.3 μg/m L、甘草酸0.123 m g/m L的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液将本品研碎，取6.0 g置棕色量瓶中，精密称定，精密加甲醇-冰醋酸（95∶5）25 m L，称定质量，超声30分钟，放冷，用甲醇-冰醋酸（95∶5）补足减失的质量，过滤，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2.3 阴性样品溶液根据归脾丸（浓缩丸）的处方，制备不含当归和甘草的阴性样品粉末，按上述方法操作制成阴性样品溶液。

2.3 专属性试验

分别吸取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，按2.1色谱条件测定，见图 1。

2.4 线性关系考察

精密吸取混合对照品储备溶液 1，5，10，20，30 μL，按2.1色谱条件进行测定，以进样量X（μg）为横坐标，以峰面积为纵坐标Y，得阿魏酸的线性方程为：

Y=1 622.0X＋ 9.588，

r=0.999 9，线性范围0.066～ 1.989 μg；甘草酸的线性方程为：

Y=902.4X－42.99，

r=0.998 9，线性范围0.123～ 3.690 μg。试验结果表明阿魏酸和甘草酸在各自浓度范围内线性关系良好。

图1 对照品（A）、供试品（B）和阴性样品（C）的HPLC色谱图

2.5 精密度试验

精密吸取样品溶液连续进样6次，以峰面积积分值为指标计算RSD（n=6）。阿魏酸和甘草酸的RSD分别为0.7%，0.9%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一份供试品溶液，分别于0，1，3，6，9，12，24 h测定，记录峰面积，阿魏酸和甘草酸的RSD分别为1.3%，1.5%，结果显示样品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批（140635）样品按 2.2项方法平行制备6份，按2.1色谱条件测定阿魏酸和甘草酸的含量，计算RSD。测得阿魏酸的含量分别为0.089， 0.092，0.090，0.090，0.091，0.091 m g/g，RSD 为1.1%；甘草酸的含量分别为0.723，0.705，0.715，0.718，0.703，0.704 m g/g，RSD为1.2%，结果表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密称取两种对照品适量制成含阿魏酸0.421 m g/m L、甘草酸1.660 m g/m L的混合对照品溶液。

取同一批（55140715）样品6份，每份约6.0 g，精密称定，精密加入上述混合对照品溶液2 m L，按2.2项方法制备，再按2.1色谱条件测定阿魏酸和甘草酸的含量并计算回收率。结果见表 1。

表1 加样回收率测定结果

表2 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 测定波长的选择

用D A D检测器在200～ 400 nm扫描对照品的紫外吸收图谱，发现阿魏酸在230 nm和320 nm处有最大吸收，320 nm吸收值大于230 nm吸收值；甘草酸仅在248 nm有最大吸收。测试不同厂家的样品发现阿魏酸的含量均较低，选择230 nm 时样品吸收值较低，测试不灵敏，选择320 nm有较好的响应，此时甘草酸没有吸收，本文采用波长切换的方法使这两种成分都得到较好检测。

3.2 提取方法选择

样品处理比较了冷浸过夜、常温超声30分钟和60分钟、回流1小时和2小时，结果冷浸法提取的含量较低，超声和回流不同时间提取液的阿魏酸和甘草酸含量相差不大，文献报道回流的提取液不稳定[1]，选择超声30分钟即可满足实验要求。又比较了甲醇[2]、70%甲醇[3]、70%乙醇[4]、60%乙醇[4-5]、甲醇-冰醋酸（95∶5）[1]、甲醇-甲酸（95∶5）和甲醇-0.24 m ol/L N aH CO3[6]几种溶剂均超声30分钟的提取效率，结果不加酸时60%乙醇提取液中阿魏酸和甘草酸的含量均略高；加酸后这两种成分的含量都稍微增加，几种加酸溶剂提取液中两种成分的含量差别也不大，与文献报道的不同溶剂提取甘草酸的结果一致[7]。综合各种因素，再考虑到甲醇-冰醋酸（95∶5）更利于提取液的保存[1]，用甲醇-冰醋酸（95∶5）超声30分钟处理样品比较好。

3.3 流动相的选择

试验中比较了不同比例的甲醇（乙腈）-水、甲醇（乙腈）-0.1%磷酸溶液[3]、甲醇-乙腈-0.1%磷酸和乙腈-0.1%磷酸溶液梯度系统，测试结果表明归脾丸（浓缩丸）在几种溶剂系统中成分峰都较多，阿魏酸和甘草酸出峰时间差别很大，本文选定的梯度系统分离效果好，分析用时少，含甲醇的系统样品峰较宽不利于分析。试验中还发现乙腈体积分数的改变对甘草酸的出峰时间影响较大，提示分析过程中流动相比例不应发生较大改变。

3.4 不同厂家产品质量分析

近年来测定归脾丸（浓缩丸）中补血药当归有效成分含量的文章还较少，藁本内酯虽然在当归中含量较高但很不稳定，对照品难以保存[6，8]，本文测定对照品稳定的阿魏酸用以比较当归的质量差异；目前对归脾丸中甘草的控制主要是测定甘草酸形成的盐间接测定甘草酸[2-3，8]，本文直接测定其含量。由于不能搜集尽可能多的不同厂家的药品，仅测定一批药显然不能就武断地说明某厂家药品质量的好坏，但用本文所建立的方法对不同厂家的药品含量测定结果表明，不同厂家归脾丸阿魏酸和甘草酸的含量差别大，提示市场上的归脾丸（浓缩丸）存在一定的质量差异，进而反映出不同厂家在所用中药材质量、生产工艺参数、内部质量控制等方面存在一定的差异。

4 小结

本文采用高效液相色谱法同时测定阿魏酸和甘草酸的含量，方法灵敏、重复性好，可用于归脾丸（浓缩丸）的控制质量。

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[8] 刘勇，韩桂茹，封淑华.H PLC法同时测定归脾丸中甘草酸与藁本内酯[J].中成药，2012，34（4）：667-669.

Content Investigation of Ferulic Acid and Glycyrrhizin in Guipi Pills （Concentrated Pills）from Different Manufacturers

Zhao Q unt ao1，Fang Y ongkai1，Y ang Junj i e2，Q i u G ang1，Li D an1（1 X i nyang Inst i t ut e for Food and D rug Cont rol，H enan X i nyang 464000，Chi na；2 X i nyang Col l ege of A gri cul t ure and Forest ry）

Objective:To est abl i sh a m et hod for t he si m ul t aneous det erm i nat i on of t he cont ent s of ferul i c aci d and gl ycyrrhi zi n i n gui pi pi l l s （concent rat ed pi l l s）and i nvest i gat e t he qual i t y of gui pi pi l l s （concent rat ed pi l l s）produced by di fferent m anufact urers.Methods:RP-H PLC w as perform ed on A gi l ent H C-C18col um n（250 m m × 4.6 m m，5 μm）w i t h a m obi l e phase of acet oni t ri l e-0.1% phosphori c aci d aqueous sol ut i on，gradi ent el ut i on w as carri ed out，det ect i on w avel engt h w as sw i t ched at 320 nm and 248 nm，t he fl ow rat e w as 1.0 m L/m i n and t he col um n t em perat ure w as at 30℃.Results:A good l i near rel at i onshi p w as obt ai ned w i t hi n t he range of 0.066～1.989 μg and 0.123～ 3.690 μg for ferul i c aci d and gl ycyrrhi zi n，and t he recovery rat e w as 98.8% and 98.5% respect i vel y.Conclusion:The m et hod w as sensi t i ve and reproduci bl e for cont ent det erm i nat i on of ferul i c aci d and gl ycyrrhi zi n i n gui pi pi l l s（concent rat ed pi l l s）and i t can be used for t he qual i t y cont rol of gui pi pi l l s（concent rat ed pi l l s）.The resul t s of cont ent det erm i nat i on show ed t hat t he qual i t y of gui pi pi l l s （concent rat ed pi l l s）vari ed from di fferent m anufact urers.

G ui pi Pi l l s（Concent rat ed Pi l l s）；Ferul i c A ci d；G l ycyrrhi zi n；Cont ent D et erm i nat i on

10.3969/j.i ssn.1672-5433.2015.04.004

2015-01-12）

河南省科学技术厅河南省2013年科技发展计划基金（132102310265）

赵群涛，男，主管中药师。研究方向：药物分析。E-m ai l：28843515@qq.com