胰岛素抵抗对卵巢癌细胞生物学功能及顺铂敏感性的影响

曹 卉 刘 颖

胰岛素抵抗对卵巢癌细胞生物学功能及顺铂敏感性的影响

曹 卉 刘 颖

目的探讨胰岛素抵抗对卵巢癌细胞生物学功能及顺铂敏感性的影响。方法选取卵巢癌患者200例，根据是否患有2型糖尿病分为两组，胰岛素抵抗组83例、非胰岛素抵抗组127例。穿刺获取肿瘤组织和正常组织作为实验对象，采用免疫组化法测定IGF-1蛋白表达量，流式细胞术法测定IGF-1R蛋白表达量，MTT法测定不同浓度顺铂作用于肿瘤细胞的IC50(半数抑制浓度)值。结果①胰岛素抵抗组IGF-1蛋白表达的HIS值为10.1±1.68，与非胰岛素抵抗组(6.5±2.14)比较，明显较高，差异有统计学意义(P<0.05)；②胰岛素抵抗组IGF-1R蛋白表达量为(281.1±1.78)，与非胰岛素抵抗组(264.6±5.32)比较，明显较高，差异有统计学意义(P<0.05)；③胰岛素抵抗组不同浓度顺铂作用于肿瘤细胞的IC50值为(14.93±0.15)，与非胰岛素抵抗组(2.41±0.08)比较，明显较高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论胰岛素抵抗能够促进卵巢癌细胞增殖，降低卵巢癌细胞对顺铂的敏感性，对临床用药具有指导意义，值得临床推广。

卵巢癌；胰岛素抵抗；细胞生物学；顺铂敏感性

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:1606～1608)

卵巢癌(oophoroma)是由于卵巢上皮细胞或生殖细胞恶性增生而引起的1种恶性肿瘤性疾病，发病率仅次于子宫颈和子宫体癌，是常见的女性生殖系统恶性肿瘤[1-2]。本病多发于35岁以上的中青年女性，据调查统计[3]，我国卵巢癌患者的发病率为6.31/10万，并且以每年1.83%的速度逐年上升。卵巢癌早期症状不明显，一经发现多已诊断为晚期[4]，无法采用手术治疗，现代医学多采取以铂类药物等为主的化疗疗法，由于获得性耐药等原因，效果并不理想。研究发现[5]，糖尿病患者体内存在胰岛素抵抗，患子宫内膜癌、大肠癌、乳腺癌等肿瘤的几率明显高于正常人，二甲双胍等胰岛素增敏剂可以明显抑制肿瘤生长[6]。但目前关于胰岛素抵抗对卵巢癌细胞生物学功能及耐药性影响的研究较少，为了增强疗效，改善其预后，为卵巢癌的治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2011年1月至2014年1月于我院以卵巢上皮细胞癌为诊断而收入院患者200例，根据是否患有2型糖尿病分为胰岛素抵抗组和非胰岛素抵抗组。胰岛素抵抗组83例，平均年龄(42.3±5.7)岁；非胰岛素抵抗组127例，平均年龄(43.6±6.1)岁。患者病程<1年。两组患者的一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。患者自愿参与本实验，并签署知情同意书。方案获得我院伦理委员会批准并全过程跟踪。

1.2 纳入标准

经病理学检查确诊为卵巢上皮细胞癌；病理学分期为Ⅰ～Ⅱ期[7]；年龄为35～50岁；患有糖尿病的患者确诊为2型糖尿病，病程>3年；患者均为首次治疗。

1.3 排除标准

经过手术、放疗、化疗等治疗的患者；心、脑、肝、胆严重疾病；其他恶性肿瘤；神志异常以及近2个月来服用二甲双胍等胰岛素增敏剂；由于各种原因不能完成实验的患者。

1.4 观察指标及检测方法

穿刺获取所有患者的肿瘤组织作为实验组，正常组织作为正常对照组，制成细胞悬浮液，常规培养。

1.4.1 IGF-1蛋白表达的测定 采用免疫组化法测定[8]。取生长良好的对数生长期细胞，经胰酶消化后放入培养基中，接种在6孔板上，密度为4×105个/cm2，48 h后经4%甲醛固定、3%双氧水氧化，按说明书分别加入IGF-1一抗、二抗工作液，孵育，PBS清洗后，采用DAB显色，经苏木精复染后冲洗，封片。

由两名高年资的病理医师在高倍镜下对切片进行观察，随机选取3个高倍视野，统计阳性细胞数及染色强度并评分，经核对得出结果。阳性细胞计数评分标准：阳性细胞是指细胞内出现黄色或棕黄色颗粒的细胞，无阳性细胞数为0分，1%～10%为1分,11%～50%为2分，51%～80%为3分，81%～100%为4分；染色强度评分标准：0分为无染色，1分为浅黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。总评分(HIS值)=阳性细胞计数评分×染色强度评分。

1.4.2 IGF-1R蛋白表达的测定 应用流式细胞术法测定[9]。取生长良好的对数生长期细胞，经胰酶消化、PBS冲洗后，用离心机离心5 min，弃上清，加入PBS液，使其密度为每100 μl 11×106，将IGF-1R用FITC标记后加入细胞液中，应用流式细胞仪检测IGF-1R蛋白表达含量。

1.4.3 不同浓度顺铂对肿瘤细胞的抑制作用 取生长良好的对数生长期细胞，经胰酶消化，稀释成每ml含5×103细胞的细胞液，接种在96孔板，培养1 d，分别加入0.25 μg/ml、2.5 μg/ml、25 μg/ml的顺铂，培养48 h，加入20 μl噻唑蓝(5 mg/ml)，4 h后弃去上清，加入150 μl的0.2%二甲基亚砜，振荡后应用酶标仪[10]测定孔A490 nm值并计算存活率和IC50(半数抑制浓度)。

1.5 统计学方法

应用统计学软件SPSS 19.0进行统计学分析，计量资料采用t检验，计数资料采用卡方检验处理，以P<0.05为有显著性差异。

2 结果

2.1 IGF-1蛋白表达比较

采用免疫组化法测得胰岛素抵抗组IGF-1蛋白表达的HIS值为(10.1±1.68)，与非胰岛素抵抗组(6.5±2.14)比较，明显较高，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 IGF-1R蛋白表达

通过流式细胞法测得胰岛素抵抗组IGF-1R蛋白表达量为(281.1±1.78)，与非胰岛素抵抗组(264.6±5.32)比较，明显较高，差异有统计学意义(P<0.05)，见图1。

A为胰岛素抵抗组，B为非胰岛素抵抗组。

2.3 不同浓度顺铂作用于肿瘤细胞的IC50值比较

通过MTT法测得胰岛素抵抗组不同浓度顺铂作用于肿瘤细胞的IC50值为(14.93±0.15)μg/ml，与非胰岛素抵抗组(2.41±0.08)μg/ml比较，明显较高，差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

卵巢癌与宫颈癌、子宫体癌称为女性生殖系统的三大杀手，严重危害女性的生命健康。研究发现，其发病可能与内分泌功能、精神因素、免疫、遗传、不良生活习惯、营养不调、以及外界的化学、生物等致癌因素有关，具有较高的发病率和死亡率[11]。由于诊断手段有限加之临床症状不典型，发现时多为晚期，化疗效果不如人意，尤其是2型糖尿病患者，由于对目前常用的顺铂具有耐药性[12]，效果更不理想。有资料显示[13]，2型糖尿病患者体内存在胰岛素抵抗，能够代偿性的促进IGF-1含量增加，与IGF-1R受体结合，发挥与胰岛素相似的功能。IGF-1属于1种生长因子，具有促进细胞有丝分裂的作用，可以促进细胞增殖，但需要与IGF-1R受体结合才能发挥作用，很多研究发现[14]，IGF-1及IGF-1R在多数恶性肿瘤组织中表达量明显增多。另外，资料显示[15]，IGF-1R在介导信号传导的过程中，可以影响PI3K/AKT通路，阻碍AMP蛋白酶 (AMPK)的表达，抑制细胞凋亡，这可能与肿瘤细胞对顺铂的耐药性增强有关。目前关于卵巢中IGF-1及IGF-1R表达情况研究较少，笔者做了相关研究，以探究胰岛素抵抗对卵巢癌细胞生物学功能及耐药性影响。

研究结果显示，胰岛素抵抗组IGF-1蛋白表达的HIS值为10.1±1.68，与非胰岛素抵抗组(6.5±2.14)比较，明显较高，差异有统计学意义(P<0.05)，提示胰岛素抵抗可以使卵巢癌组织中IGF-1含量升高；胰岛素抵抗组IGF-1R蛋白表达量为281.1±1.78，与非胰岛素抵抗组(264.6±5.32)比较，明显较高，差异有统计学意义(P<0.05)，提示胰岛素抵抗可以促进IGF-1R表达，使IGF-1充分发挥作用，促进肿瘤细胞增殖；胰岛素抵抗组不同浓度顺铂作用于肿瘤细胞的IC50值为(14.93±0.15)，与非胰岛素抵抗组(2.41±0.08)比较，明显较高，差异有统计学意义(P<0.05)，提示胰岛素抵抗可以增加卵巢癌细胞对顺铂的耐药性，影响化疗效果。

总之，胰岛素抵抗能够促进卵巢癌细胞增殖，降低卵巢癌细胞对顺铂的敏感性，对临床用药具有指导意义，值得临床推广。

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(编辑：吴小红)

Effect of Insulin Resistance on the Biological Function of Ovarian Cancer Cell and Sensitivity to Cisplatin

CAOHui,LIUYing.

Objective To study the effect of insulin resistance on the biological function of ovarian cancer cell and sensitivity to cisplatin.Methods 200 patients with ovarian cancer were selected,according to whether the patients had type 2 diabetes,were divided into 2 groups,the insulin resistant group 83 cases,and insulin non-resistant group 127 cases.Puncture for tumor and normal tissues was the experimental object,using immunohistochemical determination of IGF-1 protein expression,and IGF-1R protein expression was determined by flow cytometry method，MTT method for the determination of different concentrations of cisplatin on tumor cell IC50(half inhibitory concentration) values.Results ①The IGF-1 protein expression value of HIS of the insulin resistant group was 10.1±1.68,which was significantly higher compared to insulin non-resistant group (6.5±2.14)， the difference was statistically significant (P<0.05);②The expression of IGF-1R protein in insulin resistant group was 281.1±1.78,which was significantly higher compared to insulin non-resistant group (264.6±5.32),the difference was statistically significant (P<0.05);③The insulin resistant groups of different concentration of cisplatin to tumor cells IC50values was 14.93±0.15,which were significantly higher compared to insulin non-resistant group (2.41±0.08),the difference was statistically significant (P<0.05).Conclusion Insulin resistance can promote the proliferation of ovarian cancer cells,decrease the sensitivity of ovarian cancer cells to cisplatin,has guiding significance for clinical medication,and it is worthy of clinical promotion.

Ovarian cancer;Insulin resistance;Cell biology;Sensitivity to cisplatin

221004 中国人民解放军第97医院

刘 颖

10.3969/j.issn.1001-5930.2015.11.007

R737.31

A

1001-5930(2015)11-1606-03

2015-01-09

2015-05-21)

The97thHospitalofPLA,Xuzhou,221004