AURKA T91A多态性与新疆维、汉民族乳腺癌易感性的关联研究

李 姗 李 妍 赵振慧 杨顺娥

AURKA T91A多态性与新疆维、汉民族乳腺癌易感性的关联研究

李 姗 李 妍 赵振慧 杨顺娥

目的探讨AURKA T91A基因多态性在维、汉民族乳腺癌中的分布的差异与乳腺癌易感性的关系。方法

应用PCR-RFLP检测192例维吾尔族女性乳腺癌患者、200例健康者及254例汉族女性乳腺癌患者及200例健康者AURKA T91A位点多态性，分析该位点多态性与新疆维、汉民族乳腺癌易感性之间的关系。结果在病例组及对照组中，不同基因型及等位基因频率在维、汉两民族中分布的差异均具有统计学意义。维吾尔族组中，携带A等位基因的人群较携带T等位基因的人群患乳腺癌的风险减低(OR=0.740，95% CI=0.558-0.982，P=0.037)。汉族乳腺癌组中，AA vs.TT、AA vs.(TT+TA)、TT vs.(TA+AA)3种遗传模型都没有显示出增加患乳腺癌的风险。结论AURKA T91A位点多态性与新疆维吾尔族乳腺癌易感性相关，T等位基因为易感基因，可作为新疆维吾尔族女性乳腺癌患病风险因子。

乳腺癌；AURKA T91A；维吾尔族；汉族；基因多态性

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:1584～1587)

乳腺癌是女性最常见恶性肿瘤之一，近20年来我国乳腺癌的发病率呈明显上升趋势。日益增多的资料表明，乳腺癌的遗传学易感性及临床预后存在着种族及地域差异，目前产生这种差异的机制尚未明确，而肿瘤增殖相关基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)的研究最有可能揭示肿瘤易感性的本质。AURKA(Aurora-A/STK15/BTAK)基因定位于人类染色体20q13.2，其编码的蛋白属于丝/苏氨酸蛋白激酶家族，主要参与调控细胞中心体及微管的正常功能并调节有丝分裂[1]，AURKA与人类多种恶性肿瘤密切相关，其中与乳腺癌的发生、发展有着密切联系[2]。成芳等[3]研究显示新疆维吾尔族、汉族乳腺癌患者的病理及临床特征不同。这种差异可能是由于遗传所致，而遗传学易感性可能在维吾尔族女性乳腺癌的发病中起着关键作用。因此，本研究针对AURKA编码区91位点T>A的突变，导致Phe→Ile的变化，来探讨该位点基因多态性与新疆维、汉民族女性乳腺癌易感性之间的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象

标本来自我院2012年01月至2014年12月间收治的无异族通婚史的维吾尔族女性乳腺癌患者192例及汉族女性乳腺癌患者254例，所有患者均经组织病理学确诊，术前未行化疗、放疗及内分泌治疗。病例组平均年龄：维吾尔族(44.24±8.78)岁、汉族(46.75±8.47)岁。同期收集在本院体检的健康维吾尔族女性外周血标本200例及汉族健康女性血标本200例，对照组为无乳腺及其他系统恶性肿瘤病史的健康志愿者。对照组平均年龄：维吾尔族(45.32±9.46)岁、汉族(45.15±9.34)岁。维、汉民族两组年龄分布均无统计学差异，P>0.05。所有患者及体检健康者均签署知情同意书，本研究经新疆医科大学附属肿瘤医院研究伦理委员会审查并认可。

1.2 方法

1.2.1 基因组DNA的提取 抽取乳腺癌组和对照组空腹静脉血5 ml，乙二胺四乙酸二钠(EDTA)抗凝，分装后置-80 ℃冰箱保存。采用全血基因组DNA提取系统试剂盒(TIANGEN天根公司),严格按照说明书提取基因组DNA，-20 ℃冰箱保存备用。

1.2.2 引物设计与合成 查阅NCBI网并应用Primer Premier 5.0软件设计引物，由北京奥科鼎盛生物公司合成。引物序列：上游(Forward)：5'-CTT TCA TGA ATG CCA GAA AGT T-3'；下游(Reverse)：5'-CTG GGA AGA ATT TGA AGG ACA-3'，产物大小为153 bp。

1.2.3 PCR扩增 PCR反应体系总体积为25 μL，包括PCR Master Mix12.5 μL，DNA模板2.0 μL，上、下游引物各0.5 μL，ddH20 9.5 μL。扩增条件：94 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 s，57 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，35次循环后，72 ℃最终延伸7 min，4 ℃保存。

1.2.4 PCR产物鉴定及测序 用XapI(ApoI)限制性内切酶1 μL酶切，将酶切产物置于3.5%琼脂糖凝胶中电泳60 min后将其置于凝胶成像系统中观察产物片段大小。未被酶切开的长度153的一条亮带为TT型，出现89bp和64bp两个条带的为AA型，出现153 bp、89 bp、64 bp 3个条带的为TA型(图1)。将PCR产物送至测序公司(北京奥科鼎盛)测序验证。

M为Marker、2、4为TT纯合子；1、3为TA杂合子；5为AA纯合子。

1.3 统计学处理

应用SPSS 19.0软件包进行统计学处理。基因频率和基因型频率采用Hardy-Weinberg平衡检验，各组间比较采用χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。采用非条件逻辑回归危险度比值比(OR) 和95%可信区间(CI)评估单核苷酸多态性与乳腺癌危险性关系。

2 结果

2.1 Hardy-Weinberg平衡检测

维吾尔族及汉族病例组和对照组的基因型均符合Hardy-Weinberg平衡定律，其P值分别为0.333、0.980、0.846、0.922。P值均大于0.05，提示纳入的试验对象能较好的代表本地区两民族乳腺癌及正常人群。

2.2 基因型分布及等位基因频率

汉族人群以携带A等位基因为主，而维吾尔族人群以携带T等位基因为主。在病例组及对照组中，不同基因型及等位基因频率在维、汉两民族中分布的差异均具有统计学意义，χ2值分别为47.176、52.691、24.922、26.366，P<0.01。在维吾尔族亚组中，病例组与对照组基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)，等位基因频率的差异具有统计学意义(χ2=4.352，P<0.05)；在汉族亚组中，病例组与对照组基因型分布及等位基因频率的差异均无统计学意义(P>0.05)(表1、表2)。

2.3 AURKA T91A 多态性与乳腺癌危险性的关系

在维吾尔族组中，与TT基因型相比，携带TA基因型者的OR值为0.586(95% CI=0.372～0.925，P=0.022)，有统计学意义。与TA+AA基因型相比，携带TT基因型者患乳腺癌的风险为1.685，95% CI=1.104～2.572，P=0.016，有统计学意义。携带A等位基因的人群患乳腺癌的风险减低(OR=0.740，95% CI=0.558～0.982，P=0.037)；在汉族人群中，TA vs.TT与(TT+TA) vs.AA及TT vs.(TA+AA)3种模型均未显示出与乳腺癌易感性的关系，见表3。

3 讨论

AURKA目前已经被认定为1种癌基因，当该基因表达过量时，细胞内的中心体异常增多，进而产生细胞多极分裂及异倍体形成，导致细胞的恶性转化，从而促进多种恶性肿瘤的发生发展。该基因可在约12%～18%的原发性乳腺癌及60%的同时存在BRCA2突变的乳腺癌中出现碱基的重复或扩增[4]，该基因T91A位点的多态性与多种肿瘤的易感性相关，如乳腺癌、结肠癌、食管癌等，这种相关性在种族中存在着差异[5]。

表1 病例组及对照组维、汉民族基因型分布及等位基因频率的比较(例，%)

表2 维、汉民族中各基因型分布及等位基因频率的比较(例，%)

表3 AURKA T91A各基因型及等位基因与乳腺癌危险性关系

注：a为P=0.022，b为P=0.016，c为P=0.037 。

鲜有研究报道AURKA T91A位点多态性在维吾尔族人群中的分布情况。本研究显示，维、汉两民族病例组及对照组基因型分布及等位基因频率均具有显著差异(P<0.01)，这一结果更好的解释了AURKA T91A位点多态性在不同种族间具有显著差异。维吾尔族含有高加索人种血统，其主要携带T等位基因，而汉族作为亚洲人种，其主要携带A等位基因，这与既往国内外研究结果一致[6-8]。但不同的是，几项针对高加索人种的研究显示病例组及对照组中TT基因型占主导[8]，而本研究中维吾尔族病例组以TA基因型为主，这一结果与其他高加索人种的结论有偏倚，今后需加大样本量进一步验证其结论的可靠性。

目前AURKA T91A(Phe31Ile)基因多态性与乳腺癌易感性的相关性研究未取得一致的结论，大部分研究并未取得阳性的结果，尤其是针对高加索人群的研究。本研究比较了3种不同遗传模型下维、汉两民族人群患癌的危险性，TA vs.TT为共显性模型，AA vs.(TT+TA)为隐性模型，TT vs.(TA+AA)为主导模型。在维吾尔族人群中，共显性模型及主导模型显示出统计学意义，与TT基因型相比，携带TA基因型的人群患乳腺癌的风险减低(OR=0.586，95% CI=0.372～0.925)，携带TT基因型的人群患乳腺癌的风险是TA或AA基因型携带者的1.685倍(95%CI=1.104～2.572)。A等位基因为保护性因素，与T等位基因相比，携带A等位基因的人群患乳腺癌的风险减低(OR=0.740，95% CI=0.558～0.982)，这与Olivia Fletcher等[9]的结论相似。但Qin Jun等[10]发表的荟萃分析指出在高加索人种中AA基因型与增加乳腺癌患病风险有关(隐性模型：OR=1.16,95 % CI =1.02～1.33;AA vs.TT:OR=1.16,95 % CI=1.01～1.33)，与本研究结论不一致，这种异质性可能与样本量的大小及维吾尔族人群独特的遗传背景有关。

AURKA T91A位点多态性与乳腺癌的易感性在不同种族间具有显著差异，一宗大样本量的荟萃分析[11]指出在亚洲人群中携带AA基因型的人群患乳腺癌的风险是TA或TT基因型携带者的1.27倍(95%CI=1.10～1.47)，A等位基因携带者患乳腺癌的风险是T等位基因携带者的1.14倍(95%CI=1.02～1.28)，而在高加索人群中并没有显示危险性关系。本研究显示，在新疆汉族人群中，该基因多态性与乳腺癌易感性之间并没有显示出关联。本研究仅对AURKA基因上的1个位点的核苷酸多态性与乳腺癌易感性进行分析，尚不能确定是该位点本身或与其他位点交互作用增加乳腺癌易感性，仍需进一步扩大样本量及进行多位点的基因多态性联合检测。

本研究显示AURKA T91A多态性与新疆维吾尔族乳腺癌易感性之间有一定关联，为今后新疆地区维吾尔族女性乳腺癌这一特定人群建立用于大范围高危人群筛查和早期发现的分子标志提供了遗传学证据。

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(编辑：吴小红)

Correlation Study of AURKA T91A Gene Polymorphism and Breast Cancer Susceptibility of Xinjiang Uygur and Han women

LIShan,LIYan,ZHAOZhenhui,etal.

Objective To investigate the distribution of single nucleotide polymorphism(SNP) at T91A position of AURKA gene and its relationship with susceptibility to breast cancer of Uyghur and Han patients.Methods AURKA T91A polymorphism was detected in 192 Uyghur female cases,200 Uyghur controls,254 Han female cases and 200 Han controls using PCR-RFLP method,its relationship with breast cancer susceptibility was analyzed.Results In the 2 groups,the difference in different genotypes and allele frequencies between the Uygur and Han ethnic groups were statistically significant.Carrying A allele reduced the risk of breast cancer in Uygur women (A vs.T：OR=0.740，95% CI=0.558-0.982，P=0.037).In the Han group,AA vs.TT,AA vs.(TT + TA),TT vs.(TA + AA),the 3 genetic models had not increased risk of breast cancer.Conclusion AURKA T91A polymorphism is associated with the susceptibility of breast cancer,especially in Uygur populations,T allele is a susceptibility gene and risk factor of breast cancer.

Breast cancer；AURKA T91A；Uygur；Han；Gene polymorphism

国家自然科学基金(编号：81160320)

830011 新疆医科大学附属肿瘤医院

杨顺娥

10.3969/j.issn.1001-5930.2015.11.002

R737.9

A

1001-5930(2015)11-1584-04

2015-04-20

2015-08-17)

TheAffiliatedTumorHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi,830011