外周血白细胞介素32和金属基质蛋白酶-2对HBV相关慢加急性肝衰竭预后的预测价值研究

曹力，汪美华，邹美银，朱勇根

外周血白细胞介素32和金属基质蛋白酶-2对HBV相关慢加急性肝衰竭预后的预测价值研究

曹力，汪美华，邹美银，朱勇根

目的探讨外周血白细胞介素（interleukin,IL）-32和金属蛋白酶（matrixmetalloproteinases,MMP）-2表达水平对HBV相关慢加急性肝衰竭（HBV-associated acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF）预后的预测价值。方法选择34例HBV-ACLF和31例慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）患者作为研究对象，检测外周血IL-32和MMP-2的表达水平，并与ALT、AST、TBIL、ALB及PT等指标进行相关性分析；采用Logisitic回归分析IL-32和MMP-2预测HBV-ACLF预后的价值。结果HBV-ACLF组IL-32与TBIL、PT呈中等程度正相关（rs=0.774、0.686），与ALB呈弱负相关（rs=-0.456）；MMP-2与ALB呈弱负相关（rs=-0.451）；IL-32与MMP-2呈弱正相关（rs=0.580）。CHB组IL-32与TBIL、PT呈弱正相关（rs=0.439、0.555）；MMP-2与AST呈弱正相关（rs=0.417），与ALB呈弱负相关（rs=-0.541），与TBIL、PT呈中等程度正相关（rs=0.647、0.766）；IL-32与MMP-2呈弱正相关（rs=0.590）。HBV-ACLF组、CHB组和对照组外周血IL-32表达水平呈依次升高（P均＜0.05）。HBV-ACLF组MMP-2表达高于CHB组和对照组（P均＜0.05），但CHB组与对照组相比，差异无统计学意义。在合并感染率、外周血IL-32和MMP-2表达水平方面，HBV-ACLF组明显高于CHB组。Logisitic回归分析发现IL-32与HBV-ACLF的预后密切相关。结论外周血IL-32和MMP-2的表达水平可反映肝损伤严重程度；IL-32与HBV-ACLF的预后密切相关。

乙型肝炎，慢性；慢性肝疾病急性衰竭；白细胞介素-32；基质金属蛋白酶-2

目前，我国仍为乙型肝炎（乙肝）大国，HBV感染引起的肝衰竭占到肝衰竭总数的83%，而在慢加急性肝衰竭（acute-on-chronic liver failure,ACLF）患者中，HBV感染引起的则高达90%[1]。虽然随着诊疗技术的发展，ACLF的病死率较前有所下降，但仍达到62.18%～72.30%[2]。因此，及时准确预测HBV相关ACLF（HBV-related ACLF,HBV-ACLF）的预后，以便尽早采取干预措施有着重要的临床意义。目前国内外通用的终末期肝病预测模型（model for end-stage liver diseases,MELD）评分系统和Child-Pugh评分系统，对临床预后的判断有一定的意义，但其计算方式繁琐，不包括肝衰竭的并发症或使用主观指标，缺乏连贯性，限制了它们在临床上的应用。因此，寻求新的能预测ACLF预后的指标有着重要的临床意义。在先前的研究中我们发现，白细胞介素（interleukin,IL）-32、金属蛋白酶（matrixmetalloproteinases,MMP）-2在原发性肝癌患者中表达增多，可预测原发性肝癌的发生及预后[3]，之后我们对二者能否预测HBV-ACLF的预后［生存或死亡（包括病情加重自动出院）］进行了研究，现将相关研究结果报道如下。

1 对象与方法

1.1 对象选择2008年5月—2012年6月在南通市第三人民医院感染科住院的慢性乙肝（chronic hepatitis B,CHB）和HBV-ACLF共65例作为研究对象。CHB组31例，男18例，女13例，年龄（43.5± 6.7）岁；HBV-ACLF组34例，男19例，女15例，年龄（44.1±5.7）岁。入选HBV-ACLF病例中，经内科、人工肝等综合治疗后病情好转16例，死亡或病情加重自动出院18例。入选病例的诊断标准均符合2010年版《慢性乙型肝炎防治指南》[4]和2012年版《肝衰竭诊治指南》[5]；ACLF的诊断标准是在慢性肝病的基础上，短期内发生急性肝功能失代偿的临床症候群，表现为：①极度乏力，有明显的消化道症状；②黄疸迅速加深，血清TBIL大于正常上限10倍或每日上升≥17.1μmol/L；③出血倾向，PTA≤40%或国际标准化比值≥1.5，并排除其他原因者；④失代偿性腹水；⑤伴或不伴肝性脑病。同时排除合并甲、丙、丁、戊型肝炎病毒、HIV、真菌、细菌等其他病原体感染以及自身免疫性肝病、酒精性肝病和原发性肝癌；排除已经使用抗病毒药物者。随机抽取21名健康体检者作为对照组，其中男14例，女7例，年龄（40.7±9.1）岁。

1.2 方法于入选病例入院后第2天清晨从其肘静脉采取空腹血标本约5ml，分离血清保存在-70℃冰箱内，集中用于检测IL-32和MMP-2。同步留取血清标本检测ALT、AST、TBIL、ALB、PT等肝功能指标及HBV标志物。用上海精美科技有限公司提供的试剂盒，以ELISA法检测IL-32和MMP-2，操作严格按试剂盒使用说明进行。ALT、AST、TBIL、ALB、PT及HBV标志物由本院检验科常规检测。本研究经过南通市第三人民医院伦理委员会同意。

1.3 统计学处理应用SPSS 16.0软件进行统计分析。计量资料如呈正态分布或近似正态分布，以x±s表示，2组均数比较用成组t检验，多组均数比较用方差分析，组间两两比较采用LSD法；计量资料如呈偏态分布，以中位数（四分位数间距）［M(Q)］表示，多组比较采用秩和检验，组间两两比较采用Kruskal-Wallis检验。IL-32和MMP-2均为偏态资料，与肝功指标的相关性分析用Spearman相关分析。2组计数资料比较使用Fisher确切概率法。用Logisitic回归分析预测HBV-ACLF预后相关因素。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

表1 HBV-ACLF组和CHB组患者肝功能指标Table 1 Com parison of liver function indicators between HBV-ACLF group and CHB group

2.1 HBV-ACLF组和CHB组患者一般情况HBVACLF组和CHB组患者肝功能情况见表1。预后情况：HBV-ACLF组好转16例，死亡18例；CHB组好转31例，死亡0例。

2.2 外周血IL-32、MMP-2与ALT、AST、TBIL、ALB、PT相关性分析

2.2.1 HBV-ACLF组IL-32与TBIL、PT呈中等程度正相关，与ALB呈弱负相关。MMP-2与ALB呈弱负相关。见表2。另外，IL-32与MMP-2呈弱正相关（rs=0.580，P=0.001）。

2.2.2 CHB组IL-32与TBIL、PT呈弱正相关。MMP-2与AST呈弱正相关，与ALB呈弱负相关，与TBIL、PT呈中等程度正相关。见表3。另外，IL-32与MMP-2呈弱正相关（rs=0.590，P=0.000）。

2.3 HBV-ACLF组、CHB组和对照组IL-32和 MMP-2表达水平比较HBV-ACLF组、CHB组和对照组IL-32表达水平依次降低（P＜0.05）。HBVACLF组MMP-2表达水平高于CHB组和对照组（P＜0.05），但CHB组与对照组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表4。

2.4 HBV-ACLF预后影响因素分析以HBVACLF组患者年龄、病程、入院时HBV DNA载量、是否合并感染、外周血IL-32和MMP-2表达水平以及MELD评分作为自变量X，住院期间的预后［生存或死亡（包括病情加重自动出院患者）］为结果变量Y，用向前引入法引入法筛选出有统计学意义的自变量进行Logistic回归分析。变量赋值情况见表5。结果显示，仅有外周血IL-32和MELD评分值能影响HBV-ACLF的预后，其他因素如年龄、病程、是否合并感染和HBV DNA载量对HBVACLF预后的影响均无统计学意义（表6）。

表2 HBV-ACLF组IL-32、MMP-2与ALT、AST、TBIL、ALB、PT的相关性分析(n=34)Table 2 Correlation between IL-32,MM P-2 and ALT, AST,TBIL,ALB,PT in HBV-ACLF group(n=34)

表3 CHB组IL-32、MMP-2与ALT、AST、TBIL、ALB、PT的相关性分析(n=31)Table 3 Correlation between IL-32,MMP-2 and ALT, AST,TBIL,ALB,PT in CHB group(n=31)

表4 3组IL-32和MMP-2表达水平比较[M(Q)，ng/m l]Table 4 Comparison of MMP-2 and IL-32 levels among HBV-ACLF group,CHB group and control group[M(Q), ng/m l]

注：a.与对照组相比，P＜0.05；b.与CHB组相比，P=0.000

3 讨论

在本研究中，我们发现HBV-ACLF患者外周血IL-32和MMP-2的表达水平明显升高，高于CHB组和对照组，且二者与反映肝损伤严重程度的传统指标密切相关。IL-32表达水平与HBVACLF预后密切相关。

表5 HBV-ACLF预后影响因素及赋值表Table 5 Prognostic factors for HBV-ACLF and the assignment

IL-32具有促进炎症反应的作用，在肝脏发生炎症反应的情况下，IL-32可通过炎症因子刺激T细胞、自然杀伤细胞和单核细胞产生[6]，通过诱导IL-1、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α、干扰素γ等细胞因子的产生而发挥作用[7]。既往有研究表明，在HCV相关性肝病中，肝组织中IL-32表达程度与炎症和纤维化程度密切相关，在肝癌患者的肿瘤细胞中表达也较多[8]；还有研究认为CHB患者外周血IL-32较健康人群明显升高[9]，IL-32在HBV相关肝衰竭中的研究国内外鲜有报道。本研究发现，HBV-ACLF患者外周血IL-32表达水平明显高于CHB患者，而CHB患者高于健康者，这与先前相关基础和临床研究的结论相一致，再次提示IL-32能反映肝脏炎症损伤严重程度。

表6 Logistic回归分析结果Table 6 Results of logistic regression analysis

MMP是一组以有选择地降解细胞外基质中多种成分为特征的细胞因子，能刺激多种细胞分泌生长因子和细胞因子，发挥主要功能作用的是MMP-2，它主要在肝纤维化形成过程中活化，进入肝组织中，导致肝损伤，同时，还能趋化白细胞至炎症部位，从而加重肝损伤[10]。既往研究发现，MMP-2在慢性丙型肝炎患者中表达水平明显升高，可作为无创预测肝脏炎症发生的指标之一[11]，CHB患者的MMP-2表达水平也明显升高，提示MMP-2可用于判断CHB患者病情严重程度[12]。本研究在既往研究基础上对HBV-ACLF患者MMP-2表达水平的变化进行了相关研究。研究发现，CHB患者与健康人群相比无明显差异，这与先前研究有相悖之处，一方面考虑可能与本组病例数偏少有关，另一方面还可能与入组患者肝脏炎症损伤程度较轻有关。但HBV-ACLF患者外周血MMP-2表达水平明显高于CHB患者和健康者，提示当肝脏炎症损伤程度极度严重、肝细胞发生坏死时，MMP-2仍能反映肝脏的炎症损伤程度。

肝衰竭主要发生在肝组织严重受损，肝细胞的再生能力明显下降，残存的肝细胞不足以维持肝脏正常的功能，导致肝功能失代偿的情况下。ALB和影响PT的主要成分是在肝细胞合成的，外周血中二者表达水平可直接反映肝功能的状态，如ALB表达水平下降，PT明显延长，则提示肝细胞坏死程度极为严重或残存的肝细胞极少，同时，PT亦是临床诊断肝衰竭的重要指标之一[5]。本研究发现，无论是CHB患者还是HBV-ACLF患者外周血IL-32和MMP-2均与传统反映传统肝损伤程度的指标相关，提示二者能较好地反映肝细胞损伤及坏死严重程度。

有研究认为，肝衰竭患者年龄、是否合并肝性脑病、MELD评分和TBIL可作为预测肝衰竭以及短期死亡的相关因素[13-14]，还有研究发现与传统的SOFA、CTP、MELD等评分模型相比，APACHEⅡ评分系统更有价值[15]，但上述评分系统纳入参数较多，计算复杂，临床应用不方便。IL-32和MMP-2与肝损伤严重程度密切相关，本研究对相关指标进行了分析，结果发现，是否合并感染和MELD评分在CHB和HBV-ACLF患者中表达存在明显差异，但进一步采用Logistic回归分析发现，仅有外周血IL-32和MELD评分与HBV-ACLF的预后密切相关。

总之，外周血IL-32和MMP-2的表达水平可反映肝损伤严重程度；IL-32对HBV-ACLF的预后有较强的预测作用，为临床HBV-ACLF的预后提供了一种新的实验室指标。

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（2015-01-07收稿 2015-03-15修回）

（责任编委 辛绍杰 本文编辑 张云辉）

Predictive value of interleukin-32 and matrix metalloproteinases-2 in peripheral blood for the prognosis of HBV-related acute-on-chronic liver failure

CAO Li,WANG Mei-hua*,ZOU Mei-yin,ZHU Yong-gen
Department of Infectious Diseases,the Third Hospital of Nantong,Nantong,Jiangsu 226006,China
*Corresponding author,E-mail:wmh85834876@163.com

Objective To investigate the predictive value of the levels of interleukin(IL)-32 and matrix metalloproteases (MMP)-2 in peripheralblood for the prognosisofpatientswith HBV-related acute-on-chronic liver failure(HBV-ACLF).M ethods Totally 34 HBV-ACLF patientsand 31 patientswith chronic hepatitis B(CHB)were enrolled in the study.The levels of IL-32 and MMP-2 in peripheralblood were detected by ELISA.The relationshipsbetween IL-32,MMP-2 and ALT,AST,TBIL,ALB,PTwere analyzed. The logistic binary regression was used to analyze the predictive value of the levels of IL-32 and MMP-2 for the prognosis of HBVACLF.Results In HBV-ACLFgroup,IL-32 had amoderately positive correlation with TBIL and PT（rs=0.774,0.686）,and aweakly negative correlation with ALB（rs=-0.456）;MMP-2 and ALBwereweakly negatively correlated（rs=-0.451）;IL-32 and MMP-2 were weakly positively correlated（rs=0.580）.In CHB group,IL-32 wasweakly positively correlated with TBIL and PT（rs=0.439,0.555）; MMP-2wasweakly positively correlated with AST（rs=0.417）,weakly negatively correlated with ALB（rs=-0.541）,andmoderately positively correlated with TBIL and PT（rs=0.647,0.766）;IL-32 and MMP-2 wereweakly positively correlated（rs=0.590）.The level of IL-32 in peripheral blood increased in turn in HBV-ACLF group,CHB group and control group(P＜0.05).The level of MMP-2 in HBV-ACLFgroup was significantly higher than that in CHB group and controlgroup(P＜0.05),but the levelwasnotsignificantly differentbetween CHB group and controlgroup.Compared with CHB group,the occurrence of co-infection wasmore frequent,and the levels ofMMP-2 and IL-32 were higher in HBV-ACLF group.Logisitic regression analysis showed that IL-32 was closely correlated with the prognosis of ACLF.Conclusions The levels of IL-32 and MMP-2 in peripheral blood can reflect the degree of liver injury.IL-32 is closely correlated with the prognosisof HBV-ACLF.

hepatitis B,chronic;acute-on-chronic liver failure;interleukin-32;matrixmetalloproteinase-2

R512.62

A

1007-8134(2015)04-0227-04

10.3969/j.issn.1007-8134.2015.04.010

226006，江苏省南通市第三人民医院感染科（曹力、汪美华、邹美银、朱勇根）

汪美华，E-mail:wmh85834876@163.com