中药饮片丝瓜络碱溶性多糖提取工艺优选

2015-06-07刘道刚

中国药业 2015年14期

周霜，刘道刚，朱静

(1.重庆市江北区中医院，重庆 400020;2.重庆市中医院，重庆 400021;3.重庆市北碚区中医院，重庆 400700)

丝瓜络是葫芦科植物丝瓜的果实纤维束，含有木聚糖、甘露聚和半乳聚糖等成分[1－2]，具有显著镇痛镇静、抗炎和抗过敏功效[3－6]。近年来，关于中药饮片对丝瓜络碱溶性多糖提取工艺的研究较少，本试验中以中药饮片为研究对象，应用单因素试验与正交试验对中药饮片丝瓜络碱溶性多糖的提取工艺进行了优化，旨在为丝瓜络碱溶性多糖的提取和新药开发提供参考。

1 仪器与试药

植物粉碎机(浙江省瑞安市春海药材器械厂);WFZ800－D3B型紫外光栅分光光度计(北京瑞利分析仪器公司);TDZ5－WS型离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司);CHRIST型真空冷冻干燥机(德国Christ公司);AUY220型电子天平(日本岛津公司)。中药饮片丝瓜络，采摘试验基地中果皮变黄、内部干枯的丝瓜，进行人工去外皮和种子，经60℃烘干至恒重，使用植物粉碎机过40目筛备用;无水乙醇、丙酮、葡萄糖、氢氧化钠、浓硫酸，均为国产分析纯。

2 方法与结果

2.1 提取工艺

丝瓜络干粉→热水浸提→过滤→减压浓缩→调整pH至中性→乙醇沉淀→离心→沉淀物→洗涤→60℃烘干→得碱溶性粗多糖。将50 g丝瓜络干粉按1∶30的蒸馏水在70℃水浴中浸提9 h，过滤，滤液转入旋转蒸发仪内，负压浓缩至250 mL，滤渣加水1 300 mL并进行6 h的第2次提取，滤液浓缩至100 mL，将滤渣加水1 100 mL并进行4 h的第3次提取，滤液浓缩至100 mL;对每次的提取液进行离心，除去水溶性物质，浓缩液置入烧杯内，并加入3倍体积的无水乙醇，充分搅拌后沉淀多糖，置4℃的冰箱内过夜;20℃离心(4 000 r/min)15 min，收集沉淀物;使用无水乙醇、丙酮将沉淀物各洗涤2次，60℃烘干，得粗多糖。

2.2 多糖含量测定(苯酚－硫酸法)

2.2.1 测定方法

吸取2 mL待测液于试管内，加入1 mL的6%苯酚溶液摇匀，并加入5 mL浓硫酸，摇匀后静置5 min，40℃水浴加热15 min，取出，冷却至室温;以蒸馏水为溶剂，于490 nm波长处测定吸光度。

2.2.2 方法学考察

葡萄糖标准曲线绘制:称取100 mg于105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品，置容量瓶中，定容至刻度，即得葡萄糖标准液，分别于 6 个 50 mL 容量瓶中置入 0.25，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50 mL葡萄糖标准液，并加蒸馏水定容，将上述标准液各吸取2 mL置6个试管内，加入1 mL 6%苯酚溶液摇匀，并加入5 mL浓硫酸，摇匀，静置5 min，40℃水浴加热15 min，取出并冷却至室温;以蒸馏水为溶剂，于490 nm波长处测定吸光度值，并带入回归方程，计算多糖含量。

精密度试验:精密吸取标准品溶液1.0 mL，依法操作，测定吸光度，连续测5次。结果的 RSD=1.22%(n=5)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:分别平行取葡萄糖与丝瓜络碱溶性多糖溶液各6份，用苯酚－浓硫酸法显色后测定吸光度。结果的 RSD=0.66%(n=6)，表明该方法重复性较好。

稳定性试验:取葡萄糖与丝瓜络碱溶性多糖的显色溶液，于室温自然光下放置2 h，每间隔20 min测定吸光度。结果的RSD=0.48%(n=6)，表明丝瓜络碱溶性多糖含量在2 h内稳定，吸光度在2 h内略有减小，在1 h内几乎不变。

回收率试验:取丝瓜络碱溶性多糖提取液5份，分别精密加入一定量的葡萄糖标准液，按拟订方法测定，计算回收率。结果见表1。

表1 回收率试验结果(n=5)

2.3 提取工艺优选

因素水平确定:根据单因素试验结果，将丝瓜络碱溶性多糖含量作为考察指标，将提取时间(因素 A)、提取温度(因素B)、料液比(因素C)作为考察因素进行正交试验，确定丝瓜络碱溶性多糖的最佳提取工艺。因素水平表见表2。

正交试验结果与分析:通过单因素考察确定了各因素的较佳范围后，用正交试验进行最优化设计，利用正交试验助手Ⅱ进行统计学分析，正交试验结果见表3，方差分析见表4。可见，因素对提取工艺的影响大小为料液比＞提取时间＞提取温度。综合考虑各因素，得出丝瓜络碱溶性多糖的最佳提取工艺为，料液比1∶30 g/mL，提取时间2 h，提取温度60℃。