泽兰醇提物对实验性心肌*缺血大鼠的保护作用研究

耿涛 孟兆珂

(1.泰山医学院附属医院，山东泰安271000;2.泰安市肿瘤医院，山东泰安271000)

泽兰醇提物对实验性心肌*缺血大鼠的保护作用研究

耿涛1孟兆珂2

(1.泰山医学院附属医院，山东泰安271000;2.泰安市肿瘤医院，山东泰安271000)

目的观察泽兰醇提物对实验性心肌缺血大鼠的保护作用。方法给大鼠灌服泽兰醇提物7天后，结扎冠状动脉左前降支(LAD)，造成大鼠心肌缺血性损伤(AMI)模型。术后给药三天，观察心电图(EKG)、心肌梗死面积(MIS)和血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的变化。结果泽兰醇提物能改善AMI大鼠的EKG(P﹤0.01);泽兰醇提物800 mg·kg－1、400 mg·kg－1可缩小AMI大鼠梗塞面积，减少血清LDH漏出量，增强血清SOD活力，减少MDA生成(P﹤0.01，P﹤0.05);泽兰醇提物400 mg·kg－1能降低血清CK漏出量(P﹤0.05)。结论泽兰醇提物对心肌缺血性损伤有一定的保护作用。

泽兰醇提物;心肌缺血性损伤;冠状动脉左前降支

泽兰为唇形科植物毛叶地瓜儿苗(Lycopuslucidus Turcz)的全草，具有活血祛瘀、行水消肿等功效。泽兰全草中主要含挥发油、葡萄糖苷、鞣质、树脂、黄酮苷、酚类、皂苷、氨基酸、半乳糖及果糖等成分［1］。研究发现黄酮类化学成分是泽兰属植物的特征性成分，以黄酮醇、黄酮、二氢黄酮类型为主，主要具有抗肿瘤、杀虫、抗sARS病毒、抗茵等作用［2］。现代药理学研究结果表明，泽兰具有抗血管炎症、抗过敏、抗血小板聚集及血栓形成等多种药用活性。

缺血性心脏病(ischemic heart disease，IHD)是冠状动脉血流供应和心肌氧需求之间不平衡而导致的以心肌缺血、缺氧为主要特征的心脏病。及早恢复冠脉血流量，降低心肌需氧量，尽量挽救濒死心肌细胞是治疗的关键。

泽兰具活血化瘀之功效，但目前尚无抗心肌缺血研究报道，本实验对泽兰醇提物进行大鼠抗心肌缺血研究，以期为深入开发和利用丰富的泽兰药用资源提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验药品

泽兰醇提物的制备［3］:泽兰醇提物:泽兰采集后晾干、切碎，于60%恒温干燥箱中干燥至恒重，用粉碎机粉碎后过40目筛，准确称取1500 g，加约10倍量的甲醇浸提48 h，提取2次，合并2次滤液，过滤后减压浓缩至浸膏，冰箱2－8℃冷藏保存。由本校药学院提供。银杏叶片(YXY):扬子江药业股份有限公司生产，批号:20150107;CK、LDH试剂盒:上海申能－德赛诊断技术有限公司生产，批号分别为2143/9228/14和2228/8537/14;SOD、MDA试剂盒:南京建成生物工程研究所生产，批号分别为20140802和20140618;红四氮唑(TTC):中国医药(集团)上海化学试剂公司生产，批号:F20141008。1.2实验动物及分组

雄性SD大鼠36只，200±20 g，由泰山医学院实验动物中心提供。随机分为6组，每组6只。分为:泽兰醇提物高剂量组(800 mg/kg)、泽兰醇提物中剂量组(400 mg/kg)、泽兰醇提物低剂量组(200mg/Kg)、阳性对照组(75mg/Kg)，各组均经口灌服给药7天;模型组、正常对照组，以生理盐水灌服7天。

1.3 仪器

无损伤带线缝合针，5/0，3/8，10 mm，上海浦东金环医疗有限公司生产;心电图机，103型，日本SUZUKEN公司生产;动物人工呼吸机，SC－2型，上海医疗器械四厂生产;分光光度计721型，上海第三分析仪器厂生产。

1.4 造模方法［4］于第7天给药1 h后以4%水合氯醛按1 ml/100 g腹腔注射，麻醉大鼠并固定之;咽部接动物人工呼吸机，控制潮气量20 ml/kg，频率55次/分，正压呼吸;备皮，沿左锁骨中线剪开皮肤，于左胸第4－5肋间打开胸腔，撕开心包膜，暴露心脏，于动脉圆锥和左心耳之间以5/0号无创伤缝针结扎LAD，造成AMI模型，迅速关闭胸腔。术后给药三天后实验结束。

1.5 观测指标

EKG记录结扎前、结扎即刻和结扎3天后肢体II导联EKG，以J点移位ΔST作为心肌缺血程度的指标。MIS于实验结束时摘取心脏，生理盐水洗净残血后称取全心重量，0℃速冻10 min，沿冠状沟将接扎线以下心肌组织平行切成厚约1 mm的薄片，置1%TTC中37℃染色10 min后取出，用生理盐水冲去多余染料，计算梗死区(非染色区)重量占全心重量的百分比，即为心肌梗死面积(MIS)。血清CK、LDH、SOD、MDA于实验结束时腹主动脉取血，分离血清后按试剂盒说明进行测定。

1.6 统计学处理

2 结果

2.1 泽兰醇提物对AMI大鼠EKG的影响

结扎大鼠LAD后，发生急性缺血，引起J点移位。泽兰醇提物(mg·kg－1、400 mg·kg－1、200 mg ·kg－1)能改善AMI大鼠的EKG(P﹤0.01)，分别使AMI大鼠EKG的J点位移减少了42.2%、45.8%和35.7%。结果见表1。

Tab 1Effect of alcohol extraction ofeupatorium on EKG of rats with MRI

2.2 泽兰醇提物对MIS的影响

LAD完全闭塞后引起局部心肌梗死。与模型组相比，泽兰醇提物(800mg.Kg－1、400 mg.Kg－1)分别使AMI大鼠MIS缩小了37.04%、58.4%(P﹤0.01);泽兰醇提物200mg.Kg－1能使MIS缩小15.9%，但无统计学意义(P＞0.05)。结果见表2。

Tab 2Effect of alcohol extraction of eupatoriumon MIS of rats with MRI

2.3 泽兰醇提物对AMI大鼠血清CK和LDH的影响

结扎大鼠LAD后，血清CK和LDH漏出量增加(P﹤0.01)。泽兰醇提物能减少CK的漏出量，其中400mg·kg－1与模型组比较有显著差异(P﹤0.05);泽兰醇提物(800 mg·kg－1、400 mg·kg－1)能降低血清LDH漏出量(P﹤0.01);泽兰醇提物200 mg·kg－1也能减少CK、LDH漏出量，但无统计学意义(P＞0.05)。结果见Tab 3。

Tab 3Effect of NBT on CK and LDH in serum of rats with MRI

2.4 泽兰醇提物对AMI大鼠血清SOD和MDA的影响

结扎LAD后，心肌组织发生缺血，氧自由基大量生成，SOD活性下降，MDA生成量增加(P﹤0.01)。泽兰醇提物800 mg·kg－1、400 mg·kg－1能显著提高AMI大鼠血清SOD活性，降低MDA生成量(P﹤0.05，P﹤0.01);泽兰醇提物200 mg· kg－1对大鼠血清SOD活性和MDA生成量无明显影响(P＞0.05)。结果见Tab 4。

Tab 4Effect of alcohol extraction of eupatorium on SOD and MDA in serum of rats with MRI

3 讨论

当心肌发生缺血时，有氧代谢受阻，ATP合成减少而分解增加;糖酵解代偿性增强，但不足以补充有氧代谢产能的减少和ATP的丢失，并使细胞内乳酸堆积;同时由于代谢产物排除障碍，产生细胞内酸中毒。线粒体能量转换障碍使生物膜上的主动转运缺少ATP供能而活性下降，膜上的Na+，K+－ATP酶活性下降，K+入胞障碍，细胞内K+浓度下降，细胞膜极化状态改变，出现EKG的ST段抬高改变，并可激发心律失常［5］。

心肌在缺血时可产生大量的氧自由基(OFR)，通过攻击细胞膜中多不饱和脂肪酸引发脂质过氧化作用，生成脂质过氧化物丙二醛(MDA)等，使膜的结构和功能受到破坏。氧自由基清除剂包括SOD、CAT、GSH－PX等，缺氧时这些酶的活性降低，清除自由基的能力下降，导致组织细胞内自由基进一步堆积。

心肌细胞的缺血性损伤是一个动态发展过程，若缺血状态持续或恶化，心肌细胞损伤不断加剧，细胞膜破裂，心肌酶(CK、LDH等)漏出，最终导致不可逆损伤，心肌细胞坏死，引起心功能障碍。

传统中药认为，泽兰之功效为活血调经，祛瘀消痈，利水消肿。用于月经不调，经闭，痛经，产后淤血腹痛，疮痈肿毒，水肿腹水。近年来，对泽兰作了许多有益的研究［6］。由于泽兰的化学成分较复杂，其活血化瘀具体作用部位及有效成分仍不太清楚，为了更好地发挥泽兰在临床治疗的应用，充分发挥其疗效，本研究采用了结扎大鼠冠状动脉左前降支造成急性心肌梗死模型，观察了泽兰醇提取物对实验性心肌缺血损伤的保护作用。实验中以大鼠的心电图ST段变化的幅度作为指标，结果发现泽兰醇提物中对结扎大鼠冠状动脉左前降支造成急性心肌梗死引起心电图ST段的升高有明显的降低作用，且可降低血清CPK、LDH和减少心肌梗死面积。这提示泽兰抗心肌缺血的有效部位可能就在其醇提取物中。泽兰醇提物可改善AMI大鼠的EKG、缩小MIS、减少心肌酶漏出量和MDA生成、增强SOD活性，说明泽兰醇提物能改善冠脉循环，增加心肌氧供，可望用于冠心病的预防治疗。

［1］刘君.泽兰的化学成分及药理研究进展［J］.辽宁中医药大学学报，2008，10(1):23.

［2］孙连娜.泽兰的化学成分［J］.第二军医大学学报，2004，25: 1029－1030.

［3］刘永生，李晓坤，王金菊.泽兰醇提物对实验性胃溃疡模型大鼠的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16(15):123－125.

［4］徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学［J］.第2版.北京:人民卫生出版社，1991:921－940.

［5］朱杰，陈兰英，罗园红等.芪附汤对心肌缺血再灌注损伤大鼠心电图和血流动力学变化的影响［J］.江西中医药大学学报，2014，26:49－54.

［6］张涵，吕圭源，陈素红等.中药有效部位抗心肌缺血作用机制研究进展［J］.江西中医学院学报，2007，1:85－88.

Proctective effects of alcohol extraction of eupatorium on experimental myocardial ischemia in rats

GENG Tao，MENG Zhao－Ke
(Affiliated Hospital of Taishan Medical College，Taian 271000，China)

Objective:To study the proctective effects of alcohol extraction of eupatorium on experimental myocardial ischemia in rats.Methods:An animal model of acute myocardial ischemia injury(AMI)was constructed by ligating the left anterior descending coronary artery(LAD)after alcohol extraction of eupatorium was given to the rats for 7 days.Three days later，the changes of Electrokardiogram(EKG)，myocardial infarction size(MIS)and lactic dehydrogenase(LDH)，creatine phosphokinase(CK)，superoxide dismutase(SOD)，malondialdehyde(MDA)in serum of rats were measured.Results:Alcohol extraction of eupatorium could improve the EKG(P﹤0.01);alcohol extraction of eupatorium(800 mg·kg－1、400 mg·kg－1)could minimise the MIS，reduce the leakage of LDH，increase the activity of SOD and decrease the production of MDA(P﹤0.01，P﹤0.05);400 mg·kg－1alcohol extraction of eupatorium could reduce the leakage of CK(P﹤0.05) .Conclusion:Alcohol extraction of eupatorium possesses a proctective effect against myocardial ischemia injury.

alcohol extraction of eupatorium;myocardial ischemia injury;the left anterior descending coronary artery

R961

A

1004-7115(2015)08-0856-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2015.8.005

2015－5－24)

耿涛(1971—)，男，山东泰安人，副主任药师，硕士，主要从事医院药学工作。