草珊瑚流浸膏对肝纤维化大鼠的保护作用及其机制研究*

★ 熊耀斌傅缨俞红资晓飞杨慧（.江西省医学科学研究院 南昌330006；.南昌大学第二附属医院 南昌330006）

草珊瑚流浸膏对肝纤维化大鼠的保护作用及其机制研究*

★ 熊耀斌1傅缨2俞红1资晓飞2杨慧1（1.江西省医学科学研究院 南昌330006；2.南昌大学第二附属医院 南昌330006）

目的:观察和研究草珊瑚流浸膏对肝纤维化大鼠肝功能及肝纤维化指标的影响。方法：将SD大鼠随机分为空白组、模型组、虫草组、草珊瑚组及联合（草珊瑚+虫草）组，采用40%四氯化碳（CCl4）每周2次、皮下注射6周制作的大鼠肝纤维化模型，各治疗组经灌胃给药6周后，在麻醉状态下采血，检测血清肝功能和肝纤维化指标及金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1），以发酵虫草菌粉作为阳性对照。结果：与模型组比较，虫草及草珊瑚组肝纤维化程度明显减轻，谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）降低、白蛋白（ALB）升高极为明显（P<0.01）；同时非常显著降低肝纤维化指标及TIMP-1（P<0.01）。结论：提示草珊瑚流浸膏对肝纤维化大鼠肝损伤及肝纤维化具有一定的保护作用。

草珊瑚；肝纤维化；大鼠

现代药理学研究表明，草珊瑚（Sarcandra glabra）具有抗菌消炎、抗肿瘤、调节机体免疫等多种生物活性[1-2]，目前临床上主要用于治疗肿瘤、胃溃疡、细菌性痢疾及各种口腔疾病[3-5]。本实验通过四氯化碳大鼠模型观察草珊瑚流浸膏抗肝纤维化的作用及其机制，为其临床应用提供实验依据和参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD大鼠S P F级，体重（175±25g），雄性，分笼饲养，自由摄食和水。上海西普尔-必凯实验动物有限公司购买，质量合格许可证号SI X K（沪）2008-0016。

1.2 实验药物及试剂 发酵虫草菌粉（金水宝胶囊）由江西济民可信金水宝制药有限公司生产（110616）；草珊瑚流浸膏（相对密度1.24g/m L）由江西江中制药有限公司提供；四氯化碳（CC l4）、分析纯（A R），购自天津市恒兴化学试剂制造有限公司，批号20080908，用纯橄榄油配成40%（V/V）的应用液，纯橄榄油购自上海嘉里食品工业有限公司，批号20080707。

2 实验动物分组与用药

50只SD大鼠按体重随机分成5组，每组10只，自由进食和水。先普通饲养5天，第1周除正常组10只大鼠外，其余大鼠参照文献并有所改进，均用四氯化碳开始造模[6]，每只大鼠每次皮下注射40%四氯化碳橄榄油0.3m L/100g体重，每周2次，连续10周；第11、12周，每周给药1次。正常组大鼠给予等剂量纯橄榄油。从第7周开始，正常及模型组同等条件下喂养，不给药，每天每只大鼠灌服1m L/100g体重蒸馏水；虫草对照组：以发酵虫草菌粉按172mg/100g体重灌胃；草珊瑚组：草珊瑚流浸膏按856mg/100g体重灌胃；联合治疗组：以发酵虫草菌粉86mg/100g体重及草珊瑚流浸膏428mg/100g体重灌胃，每天1次，连续6周。末次灌胃24h后，在麻醉状态下通过下腔静脉取血，取小块肝左叶做病理检测。

3 观察内容

3.1 一般情况 每周称体重1次，以调整用药剂量；逐日观察大鼠活动、进食量、毛色等情况，并记录死亡数。

3.2 肝功能指标 采用全自动生化分析仪测定血清ALT、AST、ALB水平。

3.3 HA、PC-Ⅲ、C-IV及LN采用放射免疫分析法测定，测定盒由上海海军医学研究所提供，严格按照测定盒说明书中的方法操作。

3.4 TIMP-I采用酶联免疫分析（ELISA）方法测定，试剂盒由上海西唐生物科技有限公司提供，严格按照测定盒说明书中的方法操作。

3.5 检测肝脏纤维化程度 取小块肝脏，甲醛固定，石蜡包埋，HE染色并观察，参照2006年修订的肝纤维化中西医结合诊疗指南评价肝组织纤维化程度[7]。

4 统计学分析

采用SPSS17.0统计分析软件，One way ANOVA方差分析，LSD多重比较，计量资料以均数±标准差表示。

5 实验结果

5.1 各实验组大鼠肝组织纤维化程度 正常组10只大鼠均成活。肝组织病理检测，肝细胞未见变性与坏死,肝内未见纤维组织增生,汇管区不扩大,小叶结构清晰,肝组织正常。40只大鼠造模过程中死亡10只，其中2只为操作失误，成活率为75%。死亡大鼠常见精神及活动度差，进食少，毛发稀疏，解剖发现多有肝肿大伴腹水；模型组可见大片肝细胞坏死和炎性浸润,部分为脂肪变性,汇管区纤维组织增生,被分隔的肝细胞团呈不同程度的再生及假小叶形成；虫草和草珊瑚组则以汇管区周围纤维化，纤维间隔形成伴小叶结构改变为主。

5.2 各实验组大鼠血清ALT、AST及ALB的含量变化与空白组相比，模型组ALT、AST及ALB都有明显的改变（P<0.01）；与模型组相比，治疗组降低ALT、AST和升高ALB作用较为明显（P<0.01或0.05），但草珊瑚与虫草组之间没有统计学差异（P>0.05）；联合组显著升高A L B水平，且与虫草组相比有显著差异（P< 0.05），结果见表1。

表1 各实验组大鼠肝功能的变化（±s）

表1 各实验组大鼠肝功能的变化（±s）

注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与虫草组比较，□P＜0.05（下同）。

组别 ALB /mg·mL-1n ALT /U·L-1AST /U·L-1空白组 36.9±1.8 10 57±7.6 220.5±36.6模型组 8 134.6±36.2**314.1±41.8**29.9±1.9**虫草组 8 110.6±21.3**△256.6±22.3△△33±2.1**△△草珊瑚组 8 93.6±13.1**△△228.5±48.5△△33.9±1.5**△△联合组 35.3±1.6△△□6 97.2±9.5**△△229.5±38.6△△

5.3 各实验组大鼠血清肝纤维化四项指标含量的变化 与空白组相比，模型组肝纤维化指标HA、PC-Ⅲ、C-Ⅳ和LN非常明显升高（P<0.01）；与模型组比较，虫草、草珊瑚及联合组肝纤维化四项指标都非常显著的降低（P<0.01），但各治疗组之间的作用无明显差异（P>0.05），结果见表2。

5.4 各实验组大鼠血清TIMP-1含量的变化 与空白组相比，模型组TIMP-1含量有明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，各治疗组都有非常明显的降低（P＜0.01），但联合组TIMP-1含量与虫草及草珊瑚组比较均有显著性差异（P＜0.05），结果见表3。

表2 各实验组大鼠血清肝纤维化指标含量的变化（±s） ng·mL-1

表2 各实验组大鼠血清肝纤维化指标含量的变化（±s） ng·mL-1

组别LN n HA PC-Ⅲ空白组137.6±25.9**虫草组 8 129.3±28.5△△69.8±18.7△△草珊瑚组 8 144.9±30.1△△75±17.7△△10 128.3±18.5模型组 8 322.9±62.8**22.6±1.8 32.5±2.7**25.5±3.7*△△27.2±1.6**△△69.7±11.8联合组 78.1±21.1△△6 140.4±18.2△△26±2.7*△△C-IV 52.6±9.3 81.8±8.5**56.7±7.4△△62±10.7△△56.4±14.3△△

表3 各实验组大鼠血清TIMP-1含量的变化（±s） ng·mL-1

表3 各实验组大鼠血清TIMP-1含量的变化（±s） ng·mL-1

注：与草珊瑚组比较，◇P＜0.05。

组别 n TIMP-1空白组 10 25.7±4.5模型组 8 38.9±4.2**虫草组 8 25±4.7△△草珊瑚组 8 24.6±5.3△△联合组 6 30.8±5.9*△△□◇

6 讨论

肝纤维化的逆转是当今医学的难题及世界范围内一个主要的健康问题。许多研究都不同程度地证实虫草菌丝抗肝纤维化的有效性[8-9]，其机制与减少肝内胶原的沉积，抑制I、III型前胶原基因的表达，促进胶原降解有关[10-11]。

草珊瑚又名肿节风，入药历史悠久，其化学成分复杂，生物活性多样，毒性小，具有清热凉血、活血消斑、祛风通络等功效，其提取物具有较好的安全性[2，12]。与模型组相比，本实验发现，虫草对照及草珊瑚组降低大鼠血清ALT、AST和升高ALB作用较为明显（P<0.01或0.05），且后者的作用似乎更强，但两者之间没有明显差异（P>0.05），表明发酵虫草菌粉及草珊瑚流浸膏均具有保肝降酶的作用；联合治疗组却能明显升高ALB水平且与虫草组有显著性差异（P <0.05），而血清ALB含量的升高与促进早期肝细胞的再生有关[13]，提示两者配伍在这方面的作用可能会加强。已知血清纤维化指标对肝纤维化的发生发展密切相关[14]，抑制肝细胞外基质生成与沉积，促进其降解是抗肝纤维化治疗的关键所在。本实验结果显示：各治疗组大鼠血清HA、PC-Ⅲ、C-Ⅳ和LN与模型组比较有非常显著的降低（P<0.01），但各治疗组之间无明显差异（P>0.05），提示虫草、草珊瑚及联合组均具有一定的抗肝纤维化的作用。与模型组比较，各治疗组TIMP-1含量都有非常明显的降低（P< 0.01），表明其抗肝纤维化作用与降低TIMP-1的表达有关。因为TIMP-1表达降低，胶原酶活性增强，有助于肝纤维化的降解[15]；但联合组TIMP-1含量与虫草及草珊瑚组比较均有显著性差异（P<0.05），提示中药配伍的效果不是简单地叠加。当然，联合组数量不多亦有可能受到影响，由此可见草珊瑚流浸膏具有一定的抗肝纤维化作用，且与降低TIMP-1的表达有关。

［1］Zhang Y，Lv GY，Yu JJ．Studies on pharmacology of Sarcandra glabra [J]．Chin JPrac Chin Mod Med，2006，19（15）：1 839-1 841．

［2］Guo XL，Cao XT．Pharmaceutical action and clinical application of zhong jie feng praeparatum[J]．Chin Pharm，2006，15（1）：73-75．

［3］李微．肿节风注射液治疗小儿急性上呼吸道感染l20例疗效观察[J]．辽宁医学杂志，2003，17（4）：186.

［4］Hong LY，Liu TH，Chen YX，et a1．The study on effect of Sarcandra glabra on prevention and treatment of thrombocytopenia by chemotherapy[J]．JChin Medic Mater，2005，28（1）：35-38．

［5］凌翔，金燕，陈卫民，等．草珊瑚口腔膏治疗复发性口腔溃疡52例[J]．医药导报，2002，2l（12）：778-779.

［6］杨开选,程薇波,王文冬,等.40%四氯化碳大鼠慢性肝损伤模型的研究[J].现代预防医学，2005，32（1）：20-21，40.

［7］中国中西医结合学会肝病专业委员会.肝纤维化中西医结合诊疗指南[J].中西医结合肝病杂志，2006，16（5）：316-320.

［8］刘玉侃，沈薇，张霞．虫草菌丝对实验性肝纤维化的防治作用及其机制研究[J]．中国新药与临床杂志，2004，23（3）：139-143.

［9］曹正柳，资晓飞，熊耀斌，等.金水宝胶囊对肝纤维化大鼠模型TIMP-1及HA等的影响[J].中成药，2011，33（9）：1 497-1 499.

［10］金博，廖丹，孙涛，等.人工虫草菌丝及锌减少肝纤维化大鼠肝脏胶原的沉积[J].天津医药,2007，35（10）：761-763.

［11］李风华，刘平，熊卫国，等.冬虫夏草菌丝对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化的作用[J].中西医结合学报，2006，4（5）:514-517.

［12］Luo YM，Liu AH，Yu BW，et a1．Studies on chemical constituents of Sarcandra glabra．Chin Pharm J，2005，40（17）：1 296-1 298．

［13］方铁,李龙,张金哲,等.人工冬虫夏草菌粉提高大鼠肝脏保存质量的实验研究 [J].西安交通大学学报（医学版），2005，26（2）: 135-138.

［14］潘爱萍，林英辉，潘元平，等.肝纤维化血清学标志物与肝脏病理相关性研究[J].南方医科大学学报，2007，27（12）：1 935-1 938.

［15］Nie QH，Zhang YF，Xie YM，et a1．Correlation between TIMP-l expression and liver fibrosis in two rat liver fibrosismodels．World J Gastroenterol，2006，12（19）：3 044-3 049．

Effects of Liquid Extract of Sarcandra G labra to Anti-hepatic Fibrosis in Rats

XIONG Yao-bin1,FU Ying2,YU Hong1,ZIXiao-fei2,YANG Hui1
1.Jiangxi Academy ofMedical Sciences,Nanchang 330006,China;
2.The Second Affiliated Hospital of Nanchang University,Nanchang 330006,China.

Objective:To study the effects of sarcandra glabra liquid extract（SG）on hepatic fibrosis rats in liver function and fibrosis index.Methods：Fifty male Sprague Dawley（SD）rats were divided into blank group（BG）,model group（MG）,fermented cordyceps sinensis powder（CS）,SG and joint groups（JG）randomly.Except the rats in the BG，others were induced to hepatic fibrosis by the subcutaneous injection of 40%carbon tetrachloride（CCl4）twice a week for 6 weeks．Then，those rats in treating groupswere administered with CSand SG via stomach-tube-pouting for 6 weeks．At the end of experiments，all ratswere drew blood under anesthesia,the serum indexes of hepatic function and fibrosis andmetalloproteinase tissue inhibiting factor-1（TIMP-1）weremeasured,CSas positive control.Results：Compared with MG,CS,SG and JG groups significantly reduced hepatic fibrosis degree and alanine aminotransferase（ALT）and aspertate aminotransferase（AST）,the albumin（ALB）were significantly increased（P<0.01）,at the same time hepatic fibrosis indexes and TIMP-1 reduced significantly（P<0.01）.Conclusion：The results demonstrated that SG had certain protected effects on ratswith hepatic injure and fibrosis.

sarcandra glabra；hepatic fibrosis；rat

R285.5

A

2014-06-09）编辑：万崇毅

江西省卫生厅中医药科研计划项目（2011A150）；南昌市科技局社会发展支撑计划项目。

**第一作者：熊耀斌，硕士，研究员。研究方向：中西医结合肝病、肿瘤。E-mail:xiongybt@163.com。