益气固摄丸橙皮苷的含量测定

★ 赖杰仁刘荣华谢二磊（.九江市中医医院 江西 九江000；.江西中医药大学 南昌0004；.江西省药品科技开发部 南昌009）

益气固摄丸橙皮苷的含量测定

★ 赖杰仁1刘荣华2谢二磊3（1.九江市中医医院 江西 九江332000；2.江西中医药大学 南昌330004；3.江西省药品科技开发部 南昌330029）

目的：建立益气固摄丸中橙皮苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，Prontosil 120-5-C18柱（250mm×4.6mm, 5μm），流动相为乙腈-0.2%磷酸（17∶83）；流速1.0m L/min；检测波长283 nm；柱温30℃；进样量10μL。理论板数按芍药苷峰计算应不得低于2000。结果：橙皮苷对照品进样量在0.0424 g～1.0597 g范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999），平均回收率为98.73%，RSD值1.9%（n=6）。结论：本方法操作简便，准确可靠，专属性强，重现性好。适宜用于益气固摄丸中橙皮苷的含量测定。

益气固摄丸；橙皮苷；含量测定；高效液相色谱法

益气固摄丸系九江市中医医院自主研发的国家重点专科肾病科特色医院制剂，已取得医疗机构制剂批准文号。本品由党参、陈皮、黄芪、白术等十余味中药组成，具有益气、固摄、降浊的功效，临床应用于证属脾肾气虚型无症状性蛋白尿，疗效显著。本研究将橙皮苷的含量作为益气固摄丸质量控制指标，采用高效液相色谱法测定橙皮苷的含量，旨在为本医院制剂建立内控标准。

1 仪器与药品

W aters高效液相色谱仪（Waters 600 controller, PDA2996型二极管阵列检测器，Empower化学工作站）；SHIMADZULC-2010AHT高效液相色谱仪（紫外可变波长检测器，LC-solution色谱工作站）；KQ5200B型超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）。

益气固摄浓缩丸（批号：20110501、20110502、20110503、20110504、20110601、20110602、20110603、20110701、20110702、201100703，九江市中医院研制）；橙皮苷对照品（含量测定用，95.3%；批号：110721-200512，中国药品生物制品检定所）；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：P rontosil 120-5-C18柱（250 mm×4.6mm,5μm）；流动相：乙腈-0.2%磷酸（17∶83）；流速：1.0m L/m in；检测波长：283 n m；柱温：30℃；进样量：10μL。理论板数按芍药苷峰计算应不得低于2000。

2.2 检测波长的确定 用PDA检测器对橙皮苷对照品与样品溶液中与橙皮苷对照品相应位置上色谱峰在400～210 nm波长范围内进行光谱扫描，结果均在283 nm波长附近处有最大吸收，故确定检测波长为283 nm。

2.3 样品溶液的制备

2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品11.12 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得橙皮苷对照品母液。精密量取橙皮苷对照品母液5mL，用甲醇定容到50 mL量瓶中，即得橙皮苷对照品溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品适量，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率300W，频率25kHz）60min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液25mL，蒸干，残渣加水20 mL使溶解，水液用水饱和正丁醇提取4次，每次20mL，合并正丁醇液，正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20 mL，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇适量分次使溶解，置5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.3.3 阴性对照样品溶液的制备 除陈皮以外，其余各药材按益气固摄浓缩丸处方量制备阴性对照样品，同供试品溶液制备方法，制得缺陈皮的阴性对照样品溶液。

2.4 方法的专属性试验 分别精密吸取供试品溶液、阴性对照样品溶液与对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定。结果显示橙皮苷峰行良好且无杂质干扰，基线平稳，对照品、供试品在相同时间有一色谱峰，且阴性对照样品无干扰，见图1。

2.5 线性关系考察 分别吸取上述对照品溶液2，5，10，20μL，对照品母液5μL，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定对照品峰面积，以进样量与峰面积进行回归处理，回归方程为：Y=1.82×106X-2.23×103（n=5），橙皮苷对照品进样量在0.042 4μg～1.059 7μg范围内样品进样量与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999）。

2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL，按上述色谱条件，重复进样6次，测定橙皮苷峰面积值，计算对照品峰面积值的相对标准差为0.4%，精密度良好。

2.7 稳定性试验 精密吸取“2.3.2”项下制备供试品溶液10μL，按上述色谱条件，分别在0，1，3，5，7，9，12，24 h，测定供试品溶液中橙皮苷峰面积值，计算供试品橙皮苷峰面积值的相对标准差为1.95%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。

2.8 重复性试验 精密称取重量差异项下的本品（批号20110601）约2.0 g，共6份，照“2.3.2”项下制备供试品溶液供试品溶液，按上述色谱条件测定，测定结果经数据处理，平均含量为0.1543 mg/g，RSD为1.89%，方法重现性良好。

图1 橙皮苷色谱图

表1 不同色谱柱测定结果橙皮苷含量

表2 益气固摄浓缩丸中橙皮苷含量（n=4）

2.9 加样回收率试验 取本品（批号：20110601，橙皮苷含量为0.1543m g/g），研细，取约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入含橙皮苷（浓度3.48μg/m L）对照品的甲醇混合溶液50m L，照“2.3.2”项下制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，计算加样回收率。结果显示：样品中橙皮苷平均回收率为99.68%，R SD值为1.3%（n=6），表明回收率良好。

2.10 耐用性试验 取本品（批号：20110601），照“2.3.2”项下制备供试品溶液供试品溶液，分别用A：P rontosil 120-5-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）、B：A g ilent E clipse X D B-C18（250mm×4.6mm,5μm）、C：D i a m onsil C18（250mm×4.6mm,5μm）三种品牌的色谱柱按正文中的色谱条件测定橙皮苷含量，结果无明显差别，见表1。

2.11 样品测定 取装量差异下的本品，研细，取约2 g，精密称定，照“2.3.2”项下制备供试品溶液供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，计算含量，见表2。

3 讨论

3.1 流动相的选择 方法学实验研究中，比较了使用甲醇-0.1%醋酸溶液、甲醇-0.2%磷酸、乙腈-0.2%磷酸为流动相，考察橙皮苷的分离情况及峰形，结果以乙腈-0.2%磷酸（17∶83）为流动相的分离情况及峰形为佳；故确定流动相为：乙腈-0.2%磷酸（17∶83）。

3.2 供试品溶液制备的方法考察 在供试品溶液的制备实验中，分别考察了加热回流60m in，超声提取（功率300W，频率25k H z）60m in两种提取方式，结果显示，回流和超声提取差异不明显，超声提取更为简便，故采用超声提取。分别选择50%甲醇、70%甲醇、甲醇为提取溶剂，考察提取溶剂的影响，结果以甲醇提取效果较好。分别超声处理（功率300W，频率25k H z）30,60,90m in，结果显示，超声处理超声60m in可得满意结果。同时我们发现，甲醇提取物，用水饱和正丁醇提取4次时可较充分提取标的成分。

［1］国家药典委员会.中国药典·一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：741-742.

［2］张雅军，孙会敏，田颂九.HPLC法测定小儿参术健脾口服液中的橙皮苷含量[J].药物分析杂志，1998，18（5）：342-343.

［3］刘俊有，陈凤秋，胡景莲.HPLC法测定女金胶囊中橙皮苷的含量[J].中国药品标准，2012，13（5）：373-375.

Content Determ ination of Hesperidin in YiqiGushe Pills by HPLC

LAI Jie-ren1,LIU Rong-hua2,XIE Er-lei3

1.Jiangxi Jiujiang Chinese Medicine Hospital,Jiujiang 332000,China；

2.JiangxiUniversity of Traditional Chinese Medicine,Nanchang 330004,China；

3.J iangxi Provincial Engineering Research Center for Drug and Medical Device Quality,Nanchang 330029,China.

Objective:To establish a HPLCmethod for content determination of hesperidin in Yiqi Gushe pills.Methods:Samples were determined by HPLC on the C18column.The column temperature was 30℃.The mobile phase was consisted of 0.2%phosphoricacetonitrile （83∶17）.The flow rate was 1.0 mL/min at UV detection wavelength of 283 nm.Results:The lincear range of Hesperidin was 0.0424～1.0597g,r=0.9999.The average recovery of hesperidin was 98.73%，RSD=1.9%（n=6）.Conclusion:Themethod is convenient，accurate，specificity and reproducibility for quality control of YiqiGushe Pills.

YiqiGushe Pills；Hesperidin；Determination；HPLC

R284.1

A

2014-09-03）编辑：曾文雪

*第一作者：赖杰仁，高级工程师，执业药师。研究方向：中药新制剂与新技术。T el：（0792）8188832，E-m a il：s m z_l a i@163.co m。