VEGF及其受体KDR在老年宫颈癌组织中的表达及临床意义

杨文静 王璐

VEGF及其受体KDR在老年宫颈癌组织中的表达及临床意义

杨文静 王璐

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其激酶插入区受体(KDR)在老年宫颈癌组织中的表达情况及其对该疾病诊断的临床意义。 方法 采用免疫组化SP法检测并比较宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasm, CIN)组织、早期宫颈癌(invasive carcinoma of cervix, ICC)组织及正常宫颈上皮(normal cervical epithelium, NCE)组织的VEGF和KDR的表达水平;同时采用CD34进行标记,检测组织的微血管密度(microvessel density, MVD),观察其与VEGF、KDR的关系。 结果 (1)从NCE到CIN再到ICC,VEGF及KDR的表达阳性率逐渐升高,组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05);(2)与NCE组比较,采用CD34标记的ICC组和CIN组的MVD值均明显升高(P<0.05);(3)在CIN和ICC 2组中,MVD随着VEGF、KDR表达强度的增加而升高(P<0.05)。 结论 VEGF及其受体KDR在老年宫颈癌组织中均有高表达,同时与组织的MVD呈正相关,为宫颈癌靶向治疗药物的筛查及临床辅助诊断与治疗提供了参考。

宫颈癌; 血管内皮生长因子; 激酶插入区受体; 微血管密度; 老年人

血管内皮生长因子(VEGF)是一种具有高度生物活性的功能性蛋白,具有很强的促进血管内皮细胞分裂繁殖以及增强毛细血管通透性的能力;新生血管为肿瘤发展的必要条件,而VEGF又是血管生成的最有效刺激因子,因此VEGF与肿瘤的发展(生长、浸润和转移)有着密切的联系[1-2]。VEGF发挥上述作用主要是通过刺激细胞上2种特异性受体,分别为VEGFR-1[又称激酶插入区受体(KDR)或Flk-1]和VEGFR-2(又称Flt-1)。近年来研究发现,VEGF与KDR联合表达时,在实体肿瘤发展中起着重要作用,然而关于2种因子在老年宫颈癌疾病组织中的表达研究却鲜有报道。本研究参照相关报道[3-5],收集了2010年1月至2014年1月来本院就诊的65例老年宫颈癌患者,采用免疫组化SP法检测老年宫颈癌患者组织中VEGF及KDR的表达情况,同时采用高度糖基化的Ⅰ型跨膜糖蛋白(CD34)进行标记,检测组织中的微血管密度(microvessel density, MVD),为了解三者之间的关系,以及宫颈癌的形成原因及进一步的治疗提供指导。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选择2010年1月至2014年1月本院收集的宫颈上皮瘤样病变患者15例(CIN组)和早期宫颈浸润癌患者50例(ICC组)作为研究对象,以上患者在入院术前均未经放疗、化疗及免疫等手段治疗,并且均进行病理检查确诊。CIN组患者15例，年龄61～69岁,平均(67.1±5.5)岁,根据病理组织学分级Ⅰ级1例、Ⅱ级5例、Ⅲ级9例。ICC组患者50例，年龄60～67岁,平均(65.3±5.1)岁,根据病理组织学分级Ⅰ级2例、Ⅱ级16例、Ⅲ级32例;根据 《妇科恶性肿瘤分期及临床实践指南》 FIGO分期确定Ⅰa期5例、Ⅰb期25例、Ⅱa期19例、Ⅱb期1例;其中包括腺癌8例,鳞癌42例;镜下早期浸润3例,浅肌层浸润15例,深肌层浸润22例,全浸润10例。此外同期选取12例癌旁正常宫颈上皮(NCE组)作为对照组。所有研究对象均按HE病理切片诊断标准进行确诊,且3组患者的基本资料(年龄、性别、体质量)经统计学处理后均无统计学差异(P>0.05),具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 试剂:兔抗人VEGF多克隆抗体(美国Santa Cruz Biotechnology,工作浓度1∶50),兔抗人KDR多克隆抗体(美国Santa Cruz Biotechnology,工作浓度1∶40),即用型CD34单克隆抗体,SP免疫组化染色试剂盒由美国R&D公司生产。

1.2.2 染色方法:所有标本均经10%福尔马林固定,石蜡包埋后,连续4～5 μm厚度切片。应用梯度乙醇进行水化并采用二甲苯进行脱蜡,采用免疫组化法SP显微镜下检测宫颈癌组织VEGF、KDR和CD34的表达情况,具体步骤按照说明书进行操作,VEGF、KDR采用乙二胺四乙酸(EDTA)缓冲液微波修复抗原,CD34免去抗原修复步骤,采用AEC显色,3组的操作方法均相同。用已知的宫颈癌切片作为阳性对照,磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline, PBS)代替一抗作为阴性对照[3]。

1.2.3 结果判断:由2位病理科医生在对患者的临床资料未知的情况下,独立对每张切片进行病理观察。VEGF和KDR主要位于细胞浆中,阳性表达后主要表现为细胞膜或细胞质中出现棕黄色颗粒。选择具有代表性的10个高倍视野(×400)下阳性细胞数量进行计数,取平均值。判定标准如下:(1)染色面积评分:>50%计3分,11%～50%计2分,5%～10%计1分,<5%计0分;(2)染色强度评分:棕褐色计3分,棕黄色计2分,淡黄色计1分,不着色计0分。免疫组化染色评分=染色强度评分×阳性细胞百分数评分;将VEGF和KDR的检测的免疫组化染色评分结果分为3个等级:0分为阴性(-)、1～5分为阳性(+)、≥6分为强阳性(≥++)[6]。 MVD(CD34标记)记数判断标准主要参考江忠清[6]方法。

2 结果

2.1 CIN、ICC、NCE 3组中VEGF及KDR的表达情况 从NCE到CIN再到ICC,VEGF及KDR的表达阳性率均显著升高,组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。在CIN和ICC中,VEGF、KDR主要表达于癌细胞膜和细胞浆中。结果见表1。

表1 3组中VEGF及KDR的表达情况比较(n,%)

注:与ICC组比较,*P<0.05

2.2 3组MVD的比较 与NCE组比较,采用CD34标记的ICC组和CIN组的MVD值均明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。见表2。

表2 3组MVD的表达比较

2.3 CIN、ICC组VEGF、KDR的表达与MVD的关系 2组MVD均随着VEGF、KDR表达强度的增加而升高(P<0.05),并且2组之间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 不同VEGF、KDR表达组中MVD的水平比较条)

注:与ICC组比较,*P<0.05;与阴性组比较,△P<0.05;与阳性组比较,#P<0.05

3 讨论

VEGF是由亚基内及亚基间二硫键交联形成的同型二聚体糖蛋白,分子量在34000～45000之间,是一种能增加小静脉血管及微血管通透性的新型生长因子,同时具有特异性地作用于血管内皮细胞、促进血管内皮细胞增殖的作用。近年来,关于VEGF相关应用的研究非常活跃[1-2,7]。以Avastin为代表的肿瘤的靶向治疗药物就是以VEGF或VEGF受体为靶点[8]。其主要作用机制为血管内皮细胞上存在着2种特异性与VEGF的结合位点,其特异性受体分别为KDR和酪氨酸激酶-1受体(Flt-1),2种受体只存在于血管内皮细胞中,当其与配体结合后会引发一系列链式的生化反应。KDR被激活后会引起内皮细胞的分裂、增殖及迁移,是新生血管大量形成的主要基础。在正常生理情况下,血管的新生是处于静止状态;当组织发生炎症病变时,血管会出现病理性新生的现象,而这种现象将被制约,直至达到机体所需程度而终止,属于机体有效的防御反应。但肿瘤血管的新生一旦被激活,便会无休止的增生,且不再受体机体的控制,致使血管增生的平衡状态被打乱[1,9]。

大量研究结果表明,VEGF在许多肿瘤组织中都存在着高表达,其中报道较多的有宫颈癌、子宫内膜癌、鼻咽癌、卵巢癌、乳腺癌等[10-12],这些研究结果提示说明VEGF直接参与了血管的形成过程,对肿瘤的生长、侵袭及转移起到重要作用。宫颈癌作为世界范围内女性的三大肿瘤之一,在中国的发病率仍是居高不下,并且随着人口老龄化现象的出现,老年宫颈癌的发病率也相应增加,并且由于老年人自身免疫降低,各脏器功能减弱,病程晚,导致其预后困难,死亡率增高。Dobbs等[13]发现,从正常宫颈组织→CINⅠ→CIN Ⅲ→宫颈鳞癌,VEGF和MVD显著升高,二者呈显著正相关,且均与CIN组织学分级有关,认为血管生成是宫颈癌前病变的早期事件,异常宫颈上皮可促进VEGF表达,宫颈癌血管生成的增加预示着VEGF及其受体KDR在宫颈癌组织中的高表达,此外还与宫颈癌的病变发展有关。

本研究发现，从正常的宫颈组织到CIN再到宫颈发生癌变,VEGF及KDR的表达水平均显著升高;与NCE组比较,采用CD34标记的ICC组和CIN组的MVD值均明显升高,这与国内外现阶段的报道结果均相符;此外对MVD与VEGF、KDR的关系进行探讨,结果发现在CIN和ICC 2组中,MVD随着VEGF、KDR表达强度的增加而升高(P<0.05),呈正相关。说明KDR作为VEGF的高亲和力的特异性受体,在血管生成过程中起着重要作用,即随着宫颈癌疾病的发展,肿瘤血管的增生性增多可能是由于VEGF及受体KDR的高度表达的结果。

目前对于VEGF及受体KDR在宫颈癌疾病的表达以及与该病的发生、迁移及预后等研究尚处于初级阶段,本研究为老年宫颈癌防治、抑制肿瘤血管的无限制形成和寻求干预新靶点提供实验依据,以期使VEGF在肿瘤临床的广谱筛查和辅助诊断等中应用尽快成为现实。

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Expression and clinical significance of VEGF and KDR in elderly patients with cervical cancer

YANGWen-jing,WANGLu.DepartmentofObstetrics,WuhanSixthHospital,HospitalAffiliatedtoJianghanUniversity,Wuhan430015,China

Objective To investigate the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF) and its receptors, kinase insert domain containing receptor(KDR) and to discover clinical diagnostic significance in elderly patients with cervical cancer. Methods Expression of VEGF and KDR of cancer cells in tumor stroma by immunohistochemistry SP method and micro vessel density(MVD) labeled by CD34 were detected and compared in the tissue of cervical intraepithelial neoplasm(CIN), early invasive carcinoma of cervix(ICC) and normal cervical epithelium(NCE). Results (1)The positive rate of VEGF and KDR increased remarkably from NCE to CIN, and then to ICC, and the differences were statistically significant(P<0.05); (2)The value of MVD labeled by CD34 in the CIN and ICC was significantly higher than that in the NCE(P<0.05); (3)The value of MVD was positively associated with the expression intensity of VEGF and KDR in both CIN and ICC group (P<0.05). Conclusions VEGF and its receptors KDR in elderly patients with cervical cancer are highly expressed. MVD is positively related to the expression of VEGF and KDR. This provides a reliable reference in cervical cancer for targeted drug screening, clinical diagnosis and treatment.

cervical cancer; vascular endothelial growth factor; kinase insert domain containing receptor; micro vessel density; aged

430015湖北省武汉市，江汉大学附属医院(武汉市第六医院)妇产科

R 737.33

A

10.3969/j.issn.1003-9198.2015.11.015

2015-02-15)