消癌解毒方对胆囊癌患者细胞增殖及凋亡的影响

李广林，张 勇

户县中医医院普外科，陕西 户县 710300

消癌解毒方对胆囊癌患者细胞增殖及凋亡的影响

李广林，张 勇

户县中医医院普外科，陕西 户县 710300

目的：探讨消癌解毒方治疗胆囊癌与K i 67基因、Fas基因表达的关系。方法：将46例原发性胆囊癌患者随机分为对照组23例和治疗组23例。治疗组口服消癌解毒方和化疗药物，2次/d；对照组入院后仅使用化疗药物，剂量与治疗组一致。2组患者均连续治疗6周，治疗后进行手术，术中均取瘤体。用免疫组化SP法检测肿瘤组织中K i 67、Fas基因的表达水平。结果：治疗组胆囊癌患者组织Fas阳性率明显高于对照组(P＜0.05)；治疗组K i 67的阳性表达率明显低于对照组(P＜0.05)。结论：消癌解毒方可抑制胆囊癌细胞的增殖，促进癌细胞凋亡，这可能是消癌解毒方治疗原发性胆囊癌的作用机制。

消癌解毒方；胆囊癌；K i 67；Fas

消癌解毒方是在国医大师周仲瑛教授“癌毒”理论指导下经长期临床总结而成的有效抗癌方药。周红光等［1-2］研究表明，消癌解毒能提高中晚期恶性肿瘤近期临床疗效，明显提高患者的生活质量，减少化疗药物的毒副反应。Ki67是增殖细胞核抗原，是可靠而全面的反应细胞群体增殖活性的客观指标，Fas是细胞凋亡的信号分子，以二聚体与Caspase-8结合形成死亡诱导信号复合体，最终激活Caspase-3而导致表达Fas的靶细胞凋亡［3-8］。为进一步探讨消癌解毒方治疗胆囊癌的机理，近年来，笔者就消癌解毒方对原发性胆囊癌组织中细胞核增殖抗原Ki67及促细胞凋亡因子Fas表达的影响进行了观察，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 临床资料 将2011年5月至2014年5月在户县中医医院就诊的46例胆囊癌患者随机分为2组。治疗组23例，其中男13例，女10例；年龄32～74岁，平均(58.7±13.1)岁；胆囊结石13例，胆管结石3例，急性胆囊炎3例，胆囊息肉6例，均有不同程度的食欲降低、肝功能异常、腹水。对照组23例，其中男12例，女11例；年龄35～78岁，平均(59.3±12.7)岁；胆囊结石8例，急性胆囊炎3例，胆管结石2例，胆囊息肉8例，均有不同程度的食欲降低、肝功能异常、腹水。2组患者年龄、性别、合并症等临床资料比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 纳入标准 纳入：1)符合胆囊癌诊断标准者；2)符合知情同意原则。

1.3 排除标准 排除：1)不符合上述纳入标准者；2)对受试药物过敏者；3)中途退出治疗者。

1.4 治疗方法 对照组仅给予化疗药物治疗，方案为：培他滨片(上海罗氏制药有限公司生产，批号：20110117)1 500 mg/m2，每日分2次口服，21天为1个周期，共观察2个周期。治疗组在对照组的基础上加服消癌解毒方(消癌解毒方是根据我国著名中医药专家周仲瑛教授的“癌毒”理论，在辨证与辨病相结合的基础上组方，主要由半枝莲、白花蛇舌草、蜈蚣、漏芦、僵蚕、太子参等药物组成［9］)，1剂/d，水煎300 mL，分早晚2次服用，21天为1周期，连续服用2个周期。2组患者末次服用后第2天行胆囊癌切除手术。

1.5 免疫组化及结果判定 采用SP法二步操作，具体实验步骤按照试剂说明书进行，用PBS替代一抗作为阴性对照。采用双盲法观察阳性反应。以细胞被染成黄色或棕色为阳性细胞，随机选择6个高倍视野，每个视野计数400个细胞，计算阳性细胞数所占的百分比均值，当此均值＞10%即为阳性表达［10］。

1.6 统计学方法 采用SPSS 17.0统计软件进行相关统计学处理，组间比较采用χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

Ki67阳性率治疗组为30.4%，对照组为86.9%，2组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；Fas阳性率治疗组为91.3%，对照组为34.8%，2组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。Ki67和Fas免疫组化蛋白表达情况见图1—2。

表1 2组中K i 67、Fas抗原检测阳性结果

图1 2组中K i 67的细胞核表达情况(左：阴性表达；右：阳性表达)

图2 2组中Fas的细胞浆表达情况(左：阴性表达；右：阳性表达)

3 讨论

近年来，胆囊癌的发病率有逐年上升趋势，是常见的消化道恶性肿瘤［11］。该病发病机制复杂，病因尚不清楚，与饮食、细菌感染等有一定的关系。胆囊癌属于中医“胁痛”“腹痛”“黄疸”等范畴，肝气郁结，脾气虚弱，水湿不化，疏泄不利，湿热交蒸，瘀毒内阻，日久而形成为其主要病因病机。中医治疗以辨证施治为主，也有一些单方、验方，并可配合使用针刺疗法［2］。西医对胆囊癌以手术根治切除为主，术后采用化疗，或放射疗法及免疫疗法。研究表明，消癌解毒方配合化疗使肿瘤患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+数量及NK活性明显提高，对提高机体抗肿瘤免疫能力也具有一定的疗效［12］。有学者以H22荷瘤小鼠为研究对象，消癌解毒方能显著影响多个与肿瘤生长凋亡和免疫相关的信号通路，并能下调趋化因子信号通路中CCL3、CXCL2等基因的表达，发挥抗肿瘤生长和侵袭的作用［13］。

消癌解毒方能够明显抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖，抑制核转录因子NF-κB的异常持续活化，促进肿瘤细胞凋亡［4，14-15］。本研究与其结果一致，本研究用消癌解毒方治疗人原发性胆囊癌，可显著下调细胞增殖抗原Ki67的阳性表达(P＜0.05)，表明消癌解毒方抑制胆囊癌细胞增殖，这可能是消癌解毒方治疗胆囊癌的作用机理。此外，本文还研究了消癌解毒方治疗胆囊癌与促细胞凋亡因子Fas的表达关系，结果表明，Fas在胆囊癌组织中的阳性表达率明显增大(P＜0.05)，说明消癌解毒方可能对胆囊癌细胞的凋亡具有一定的促进作用。还有研究报道［16］认为，消癌解毒方能促进肝癌细胞株H22细胞凋亡，抑制Survivin蛋白的表达，这可能是其抗癌机制之一。

综上所述，消癌解毒方通过抑制原发性胆囊癌组织Ki67基因的表达可降低人胆囊癌细胞的增殖能力，通过上调肿瘤组织Fas基因的表达促进人胆囊癌细胞的凋亡。然而，消癌解毒方治疗胆囊癌机制的研究还需要进一步通过大量的临床试验进行验证，以加深对消癌解毒方治疗原发性胆囊癌机理的认识。

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Influence of XiaoAi JieDu Prescription on Cellular Proliferation and Apoptosis of the Patients Suffering from Gallbladder Carcinoma

LI Guanglin,ZHANG Yong
Surgery Department of Huxian County TCM Hospital,Huxian 710300,China

Objective:To investigate the correlation between XiaoAi JieDu prescription in treating gallbladder carcinoma and the expressions of Ki67 gene and Fas gene.Methods:All 46 patients were randomly divided into the control group and the treatment group.The treatment group took XiaoAi JieDu prescription and chemotherapy drugs, twice per day;the control group took chemotherapy drugs after hospitalized,and the doses were identical with the treatment group.Both groups were treated for six consective weeks,and accepted the surgery to remove the tumor, the expressions of Ki67 gene and Fas gene in the tissue of the tumor were detected by immunohistochemical SP method.Results:The treatment group was higher than the control group significantly in Fas positive rate(P＜0.05); lower than the control group in Ki67 positive expression rate (P＜0.05).Conclusion:XiaoAi JieDu prescription could inhibit the proliferation of gallbladder carcinoma cells and promote the apoptosis of cancer cells,which might be the mechanism of XiaoAi JieDu prescription in treating gallbladder carcinoma.

XiaoAi JieDu prescription;gallbladder carcinoma;Ki67;Fas

R735.8

B

1004-6852(2015)10-0101-03

2014-12-27

李广林(1961—)，男，副主任医师。研究方向：肝胆及肠道肿瘤病的中医治疗。