L16(45)正交实验优化黄刺玫花黄酮物质提取工艺

李 强，李庆超，周长征△

1山东中医药大学，山东 济南 250355；2中国石油大学(华东)

L16(45)正交实验优化黄刺玫花黄酮物质提取工艺

李 强1，李庆超2，周长征1△

1山东中医药大学，山东 济南 250355；2中国石油大学(华东)

目的：采用有机溶剂提取法研究不同影响因素对黄刺玫花中黄酮类物质的提取工艺优化。方法：实验室选用芦丁作为标准对照，有机溶剂乙醇提取后紫外分光光度法测定其内部的黄酮含量做评价，实验选取紫外光照射时间、水浴温度、溶剂体积比、提取时间、提取次数等进行正交实验的方法学考察，做出最佳工艺流程。结果：最佳提取工艺为紫外光照射20分钟、水浴温度70℃、乙醇体积分数为80%、料液比1∶20，提取2次。结论：选用该方法操作简便、原理简单、得率较高、药效成分稳定性较好，为黄酮类物质的大规模工业化生产提供必要的相关依据。

正交实验；黄刺玫花；黄酮类；提取工艺

黄刺玫属蔷薇科蔷薇属野生落叶乔木，分布于中国的广大北方地区［1-2］，尤在东北三省、山西、内蒙古等地分布广泛。古代医书上记载黄刺玫的花、叶、皮及其果实等部位都可以作为中药使用，可理气调经，健脾活血，用于治疗腹胀腹痛以及女性月经不调等疾病［3］，也可做观赏。有关文献研究表明，黄刺玫的果实及皮中含有大量的黄酮类、皂苷及其超氧化物歧化酶等物质［4］，经鉴定黄酮类物质主要为芦丁。查找文献发现近10年对黄刺玫各部位的研究较少，本文利用实验研究黄刺玫花中的黄酮类物质的更为高效合理的提取工艺，为其广泛地应用于工业化生产提供必要的理论基础。

1 材料

1.1 材料 黄刺玫花采自山东中医药大学校园内，经山东中医药大学药学院高德民教授鉴定为此类植物的花，分为5组，黑暗条件下分别紫外灯照射0、10、20、30、40分钟，阴干后粉碎过80目筛，低温避光，密封保存。

1.2 仪器 紫外线消毒车(山东新华医疗器械公司提供)；UV-6000型紫外分光光度计(上海元析仪器公司提供)；BS210S型电子天平(北京赛多利斯天平股份有限公司提供)；旋蒸仪(上海亚荣仪器总厂提供)。

1.3 试剂 芦丁标准品(中国药品生物制品检定所提供)；乙醇；亚硝酸钠；硝酸铝；氢氧化钠。

2 黄刺玫花黄酮类物质的测定

2.1 提取条件的选择

2.1.1 提取溶剂的选择 按照2.3中相关数据进行下述方法提取，用乙醇提取总黄酮时含量最高，相对来说采用乙醇效果较好。见表1。

表1 不同提取溶剂的黄酮提取效率

2.1.2 提取方法的选择 按照2.3中的相关数据进行总黄酮的提取，乙醇提取明显优于其他方法，提取效率较高，效果最佳，采用此法可行。见表2。

表2 不同提取方法的黄酮提取效率

2.2 芦丁回归方程的制作

2.2.1 紫外吸收波长的测定 无风封闭条件准确称取干燥的芦丁对照品21.8 mg，以80%乙醇充分溶解振荡混匀并定容于200 mL容量瓶内，此时标准品的浓度为0.109 mg/mL，冷藏备用。以试剂作空白对照，芦丁对照品和黄刺玫花提取液进行200～510 nm的紫外全波长扫描，结果显示在500nm处吸收最大。见表3。

表3 芦丁标准曲线数据

2.2.2 回归方程的制备 用移液管分别精密移取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL于6只10 mL容量瓶中，各加0.3 mL5%亚硝酸钠于容器内，混匀放置5分钟；再加入0.3 mL10%硝酸铝于容器内混匀放置5分钟；加入1 mol/L氢氧化钠3 mL后摇匀放置10分钟定容至刻度。在500 nm波长处测量(见表3)，以吸光度为横坐标X，以标准溶液浓度为纵坐标Y得到回归方程为Y=0.029 5X+0.003 2 (R2=0.999 1)，浓度范围0.00545～0.03264mg/mL。

2.3 黄刺玫花总黄酮的提取测定 精密称取6份干燥黄刺玫花粉末1 g于100 mL容量瓶，一定温度下加入一定体积分数的乙醇加热1个小时进行提取合并，提取液抽滤，活性炭吸附杂质并减压浓缩至膏状，80%乙醇定容至20 mL作供试品备用。精密量取上述各供试品0.1 mL于10 mL容量瓶中，按“2.1.3”项下的步骤进行，于500 nm处进行紫外吸收测定，可获得该部位总黄酮的含量。

2.4 稳定性实验 常温常压下，分别取6份样品放置5、10、15、20、25、30、40分钟后，测其吸光度A，结果显示，放置20分钟后吸光度开始降低。因此实验数据应在加入显色剂后20分钟内测试。

2.5 精密度实验 取此类相同药材提取物各4份，按照2.3试验方法显色后测定黄酮含量，药物中平均含量为29.37 mg/g，RSD为0.82%，数据表明实验的精密度较好。

2.6 回收率实验 在此药材的已知含量的提取液中，加入一定含量的芦丁标准品，按照测定的方法测定芦丁的含量为94.52%，RSD为1.12%。

2.7 正交实验设计 依据相关文献，选定提取时间1小时为恒定指标，研究紫外光照射时间A、体积分数B、料液比C、水浴温度D、提取次数E等对总黄酮提取效果的影响，每个因素下设4个水平，见表4，进行正交试验设计，以总黄酮的得率作为评价指标，对该部位总黄酮的提取工艺进行优化。

3 结果

按照表4的因素利用正交设计进行上述各因素的提取条件进行筛选，结果见表5。

表4 正交实验单因素水平

表5 L16(45)正交实验结果

［2］ 李萍.野生黄刺玫的开发利用［J］.农产品加工，2010(6): 30-31.

［3］ 杨权勤.正交法在医药学科研中的应用［M］.北京：中国医药科技出版社，1992.

［4］ 叶松华，王晓燕，杨莹莹，等.黄刺玫果中总黄酮的提取工艺研究［J］.山西医科大学学报，2013，44(7):535-538.

4 讨论

根据对表格进行直观的分析，并结合不同因素的多重比较结果，黄刺玫花中总黄酮类物质的最佳提取工艺为A3B2C4D3E2，即最佳的提取工艺为紫外光照射20分钟、水浴温度70℃、乙醇体积分数为80%、料液比1∶20，提取2次。上述各单因素对总黄酮的提取的影响大小依次为C＞A＞D＞B＞E，即乙醇体积分数＞紫外光照射时间＞料液比＞水浴温度＞提取次数。使用本提取工艺，可以减少乙醇的使用量，减低能耗减少成本，提高黄酮的提取效率，对于工业生产有一定的指导意义。

［1］ 山西植物志编纂会.山西植物志［M］.北京：中国科技出版社，1998(4)：335-337.

Flavonoids Extraction Process of Rosa Xanthina Optimized
by L16(45)Orthogonal Experiment

LI Qiang1,LI Qingchao2,ZHOU Changzheng1△
1 Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Jinan 250355,China;
2 China University of Petroleum

Objective:To choose different influencing factors to optimize the extraction process of flavonoids from rosa xanthina by adopting organic solvent extraction method.Methods:Rutin was chosen as standard substance in the experiment,after organic solvent extraction method,the contents of flavonoids in rutin were detected by ultraviolet spectrophotometry and assessed,ultraviolet light,water bath temperature,volume ratio,extracting time and extracting times were selected to design the best extraction process.Results:The optimal extraction processing was: to irradiate 20 minute under the ultraviolet light,70℃as water bath temperature,volume fraction of ethanol as 80%, feed liquid ratio as 1:20,extracting times as two times.Conclusion:The method is easy to operate,simple,with high yield and good stability of active ingredients,it provides necessary reference for mass industrial production of the flavonoids.

orthogonal experiment;rosa xanthina;flavonoids;extraction process

R284.2

A

1004-6852(2015)10-0059-03

2015-05-16

李强(1990—)，男，在读硕士研究生。研究方向：药物新剂型与新技术的研究。

△通讯作者：周长征(1966—)，男，教授。研究方向：药物新剂型与新技术的研究。