CIP2A及c-Myc在宫颈癌组织中的表达及相关性分析

胡 茜，刘 昆

(1.四川省成都市妇女儿童中心医院产科 610081；2.四川省抗生素研究所，成都 610052)

论著·临床研究

CIP2A及c-Myc在宫颈癌组织中的表达及相关性分析

胡 茜1，刘 昆2

(1.四川省成都市妇女儿童中心医院产科 610081；2.四川省抗生素研究所，成都 610052)

目的 检测蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(CIP2A)和c-Myc蛋白在宫颈癌组织中的表达水平并分析二者表达的相关性。方法 运用免疫组织化学染色技术检测CIP2A和c-Myc蛋白在72例宫颈癌和12例正常宫颈组织中的表达水平，分析CIP2A和c-Myc与宫颈临床病理特征的相关性以及二者表达的相关性。结果 CIP2A和c-Myc蛋白在宫颈癌组织中的阳性率分别为52.8%(38/72)和56.9%(41/72)，而二者在正常宫颈组织中的阳性率分别为8.3%(1/12)和25.0%(3/12)，差异有统计学意义(χ2=8.169,P=0.004；χ2=4.208,P=0.040)。CIP2A和c-Myc蛋白表达与肿瘤组织病理分化和临床分期显著相关(P<0.05)，而与年龄、淋巴结转移和肿瘤病理类型无明显相关性。Pearson相关分析结果显示宫颈癌组织中CIP2A与c-Myc蛋白表达呈显著正相关(r=0.673，P=0.001)。结论 宫颈癌组织中CIP2A高表达与恶性临床病理特征密切相关，并与c-Myc蛋白表达呈显著正相关。

CIP2A；c-Myc；宫颈癌

蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A，CIP2A)最近新发现的一个癌蛋白，CIP2A通过抑制蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A，PP2A)对c-Myc S62的脱磷酸化作用，从而遏制PP2A介导的c-Myc降解，稳定肿瘤细胞中c-Myc蛋白水平[1]。之前报道称CIP2A在胃癌组织中表达升高，干扰其表达导致肿瘤细胞集落生成受损、细胞衰老和肿瘤分化[2]。另外，在人头颈部肿瘤、结肠癌、乳腺癌和口腔鳞状细胞癌中均发现CIP2A高表达[3-6]，但CIP2A在人宫颈癌组织中的表达及其与c-Myc的相关性少有报道。本课题应用免疫组织化学染色技术检测CIP2A和c-Myc在宫颈癌及正常宫颈组织中的表达水平，分析CIP2A和c-Myc与宫颈癌临床病理特征的相关性及二者表达的相关性，初步探讨CIP2A在宫颈癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机收集成都市妇女儿童中心医院病理科2009年1月至2012年12月保存的宫颈癌组织标本，共72例，年龄29～68岁，平均(42.3±3.4)岁。其中，鳞癌60例，腺癌12例；分化程度：高、中分化39例，低分化33例；临床分期(FIGO，2009)：Ⅰ～Ⅱ期35例，Ⅲ～Ⅳ期37例。12例正常宫颈组织标本来源于因慢性宫颈炎或子宫纤维瘤行全子宫切除术的患者，年龄30～65岁，平均(41.7±2.5)岁。两组患者年龄具有可比性。本研究通过本院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 CIP2A和c-Myc蛋白的免疫组织化学染色 采用标准生物素-链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(streptavidin-peroxidase-biotin，SP)法对4 μm石蜡切片进行染色。切片在60 ℃烤箱中烘烤60 min，然后经二甲苯脱蜡和再水化，0.01 mmol/L柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0)抗原热修复，室温冷却20 min，0.3% Trixon-X100处理30 min，3%双氧水-甲醇封闭内源性过氧化物酶活性，正常血清封闭非特异性结合，切片经CIP2A(1∶250，Novus Biologicals公司)和c-Myc(1∶400，Cell Signaling Technology公司)抗体4 ℃孵育过夜。冲洗后滴加生物素标记的二抗(SP试剂盒，北京中杉金桥生物技术有限公司)，室温孵育30 min。滴加辣根酶标记的链霉卵白素工作液，室温孵育30 min。滴加DAB显色，苏木素轻度复染。乙醇梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。PBS代替一抗作为阴性对照。

1.2.2 免疫组织化学染色评估 所有切片由2位研究人员进行评估，染色强度评分：0分，阴性；1分，弱阳性；2分，中度；3分，强阳性。阳性细胞百分比评分：无阳性细胞，0分；≤25%，1分；26%～50%，2分；51%～75%，3分；>75%，4分。染色强度和阳性细胞百分比评分相乘大于或等于1分则认为CIP2A或c-Myc蛋白阳性表达[7]。

1.3 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件进行分析处理，分类资料运用χ2检验，相关性分析采用Pearson相关系数，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈癌及正常宫颈组织中CIP2A和c-Myc的表达水平比较 应用免疫组织化学染色技术检测72例宫颈癌及12例正常宫颈组织中CIP2A和c-Myc表达水平，CIP2A和c-Myc蛋白阳性反应为棕黄色或棕褐色，CIP2A蛋白主要定位在细胞质和细胞膜，而c-Myc蛋白主要定位于细胞质和细胞核(图1)。CIP2A和c-Myc蛋白在宫颈癌组织中的阳性率分别为52.8%(38/72)和56.9%(41/72)，而二者在正常宫颈组织中的阳性率分别为8.3%(1/12)和25.0%(3/12)，差异有统计学意义(χ2=8.169,P=0.004；χ2=4.208,P=0.040)。

2.2 CIP2A和c-Myc蛋白表达与宫颈癌临床病理特征的相关性 应用χ2检验分析CIP2A及c-Myc蛋白表达与宫颈癌临床病理特征的相关性，结果见表1。CIP2A和c-Myc蛋白表达与肿瘤组织病理分化和临床分期有关(P<0.05)，而与年龄、淋巴结转移和肿瘤病理类型无显著相关性。

2.3 宫颈癌组织中CIP2A与c-Myc蛋白表达相关性 应用免疫组织化学评分对72例宫颈癌组织中CIP2A和c-Myc蛋白表达行半定量分析，Pearson相关分析结果显示宫颈癌组织中CIP2A与c-Myc蛋白表达呈显著正相关(r=0.673，P=0.001)。

A：宫颈鳞癌组织中CIP2A阳性染色；B：宫颈腺癌组织中CIP2A阳性染色；C：正常宫颈组织中CIP2A阴性染色；D：宫颈鳞癌组织中c-Myc阳性染色；E：宫颈腺癌组织中c-Myc阳性染色；F：正常宫颈组织中c-Myc阴性染色。

图1 CIP2A和c-Myc蛋白在宫颈癌及正常宫颈组织中的免疫组织化学染色(SP，×400)

表1 CIP2A和c-Myc蛋白表达与宫颈癌临床病理特征的相关性(n=72)

续表1 CIP2A和c-Myc蛋白表达与宫颈癌临床病理特征的相关性(n=72)

3 讨论

宫颈癌是导致妇科肿瘤患者死亡的第2位因素，每年全世界约有500 000新确诊病例，超过1/3的患者死亡[8]。人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)在宫颈癌发生、发展中发挥重要作用。目前，HPV疫苗的应用一定程度减少了宫颈癌发病率[9]。CIP2A由于具有转化人永生化细胞的能力而被证实为一种癌蛋白，最近CIP2A过表达在多种人类肿瘤中被报道，更重要的是许多研究发现CIP2A可以充当不同实体肿瘤和血液系统肿瘤的预后分子标志物，如非小细胞肺癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、肾癌、舌癌、食管腺癌、膀胱癌和慢性髓样白血病[10]。本研究发现CIP2A在宫颈癌组织中的阳性表达率显著高于正常宫颈组织，既往有学者也证实了CIP2A在宫颈鳞癌组织中的表达水平高于正常宫颈和CIN Ⅰ～Ⅲ组织[11]，与本研究结果一致。进一步研究发现CIP2A蛋白表达与宫颈癌临床分期和分化程度呈显著相关，而Liu等[11]研究发现CIP2A与宫颈癌临床病理特征无明显相关。本研究纳入了宫颈鳞癌和腺癌2种病理类型，而Liu等[11]只纳入了宫颈鳞癌一种病理类型，不能代表宫颈癌整体，这可能是导致出现不同结论的原因。

c-Myc作为一个经典的促癌蛋白参与许多生物学功能(如细胞增殖、分化、衰老、凋亡和转化)，而在宫颈癌组织中已经证实存在c-Myc蛋白过表达[12-14]。本研究也发现c-Myc蛋白在宫颈癌组织中表达水平显著高于正常宫颈组织。另外，统计学分析发现在高临床分期和低分化的肿瘤组织中c-Myc阳性率更高。CIP2A是一个细胞PP2A抑制因子，通过抑制PP2A介导的c-Myc丝氨酸62号位脱磷酸化作用从而限制c-Myc蛋白水解。进一步评估宫颈癌组织中CIP2A和c-Myc蛋白表达相关性，结果发现CIP2A与c-Myc蛋白表达呈显著正相关。既往研究证实在宫颈癌细胞系中干扰CIP2A表达可以导致c-Myc蛋白表达水平降低和细胞增殖[11]，提示CIP2A可能通过稳定c-Myc蛋白促进宫颈癌恶性生物学行为。

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The expression of CIP2A and c-Myc and their correlation analysis in cervical carcinoma tissues

HuQian1,LiuKun2

(1.Obstetrics,WomenandChildren′sHospitalCenterinChengdu,Chengdu610081,China;2.InstituteofAntibioticsofSichuanProvincial,Chengdu610052,China)

Objective To investigate the expression of CIP2A and c-Myc and their correlation in cervical carcinoma.Methods We detected CIP2A and c-Myc expression using immunohistochemistry in 72 samples of cervical carcinoma and 12 samples of normal cervix tissues.Correlation between proteins and clinicopathologic features and relation between CIP2A and c-Myc expression were analyzed.Results The positive expression of CIP2A and c-Myc in cervical carcinoma tissues were 52.8% and 56.9%,respectively.While their positive expression in normal cervix tissues were 8.3% and 25.0%,respectively.The differences had statistical significance(χ2=8.169,P=0.004;χ2=4.208,P=0.040,respectively).Clinicopathological analysis suggested that CIP2A and c-Myc protein expression were associated with histopathological differentiation and clinical stage(P<0.05) in cervical carcinoma,but the protein expression was not related to age,lymph node metastasis and pathological type.CIP2A was significantly positive correlated with c-Myc protein in cervical carcinoma(r=0.673，P=0.001).Conclusion The high-expression of CIP2A is correlated with malignant clinicopathologic characteristics,and CIP2A is positively associated with c-Myc,suggesting that CIP2A may promote tumor initiation and development through maintaining c-Myc protein in cervical carcinoma.

CIP2A；c-Myc;cervical carcinoma

胡茜(1980-)，主治医师,本科,主要从事临床妇产科工作。

10.3969/j.issn.1671-8348.2015.08.020

R711.74

A

1671-8348(2015)08-1072-03

2014-10-08

2014-12-17)