参橘止咳滴丸止咳祛痰作用的药效学研究*

李 娟，李晓东，封士兰，胡芳弟

1甘肃省人民医院，甘肃 兰州 730000；

2中国中医科学院中药研究所；3兰州大学药学院

参橘止咳滴丸止咳祛痰作用的药效学研究*

李 娟1，李晓东2，封士兰3，胡芳弟3

1甘肃省人民医院，甘肃 兰州 730000；

2中国中医科学院中药研究所；3兰州大学药学院

目的：研究参橘止咳滴丸的止咳祛痰作用。方法：采用小鼠氨水引咳、豚鼠枸橼酸引咳和电刺激豚鼠喉上神经引咳、小鼠气管段酚红排出法和大鼠气管毛细玻管排痰法等实验方法评价参橘止咳滴丸的止咳祛痰作用。结果：与正常对照组比较，参橘止咳滴丸各剂量组在延长实验动物的咳嗽潜伏期，减少其咳嗽次数，缩短豚鼠电刺激呼吸恢复时间，增加酚红排出量和排痰量等方面，差异有统计学意义(P＜0.05)。与阳性对照（急支糖浆）组比较，参橘止咳滴丸中、大剂量组在延长实验动物的潜伏期，减少其咳嗽次数，缩短豚鼠电刺激呼吸恢复时间，增加酚红排出量和排痰量等方面，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：参橘止咳滴丸具有明显的止咳祛痰作用，且其中、大剂量组疗效优于急支糖浆组。

参橘止咳滴丸；止咳作用；祛痰作用

参橘止咳滴丸是以甘肃省名中医徐鸿达主任医师的临床经验方为基础，应用现代制剂技术提取研制的中药制剂，具有处方和生产工艺简单、剂型溶出速度快、生物利用度高的特点。该方以玄参和陈皮为主药，具有清热解毒，止咳利咽之功效，临床应用多年，治疗外感咳嗽和慢性支气管炎急性发作引起的咳嗽疗效确切［1］。为了进一步确定其临床疗效，本研究就参橘止咳滴丸的止咳祛痰作用进行了药效学实验研究。

1 材料与方法

1.1 试验药物 参橘止咳滴丸由甘肃陇神戎发制药有限公司生产，批号：20060109；急支糖浆由太极集团涪陵制药厂生产，批号：88050978。

1.2 动物 昆明种小鼠(20±2)g，Wistar大鼠(200±20)g，由兰州大学实验动物中心提供，动物实验合格证：SYXK(甘)2005-0007；豚鼠，体质量(300±10)g，由中国农业科学院兰州兽医研究所提供，动物实验合格证：SCXK（甘）2004-0005。

1.3 试剂 苯酚红 (CP)(北京化学试剂公司生产，批号：020718)；二甲苯(AR)(天津市化学试剂二厂生产，批号：20060521)；大肠杆菌菌体蛋白；干酵母(安琪酵母股份有限公司生产，批号：20060405)；枸橼酸(AR)(中国医药集团上海化学试剂公司生产，批号：20060214)；浓氨水(AR)(白银化学试剂厂生产，批号：061215)；双蒸水(兰州大学第一附属医院药剂科提供)；其他试剂均为分析纯。

1.4 仪器 分析天平(Sartorius 1/万)，UV-9100紫外可见分光光度计(北京瑞利分析仪器厂提供)；RM6420多道生理信号采集处理系统(成都仪器厂提供)；YC-Y800型亚都医用雾化治疗器(北京亚都科技股份有限公司提供)；YSD-4G生理药理实验多用仪(淮北正华生物仪器有限公司提供)。

1.5 方法

1.5.1 止咳实验［2-3］

1.5.1.1 小鼠氨水引咳实验 取小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，每组10只。参橘止咳滴丸大、中、小剂量组给药量分别为1.36 g/kg、0.68g/kg、0.34 g/kg；阳性对照组给予急支糖浆18.0 mL/kg；正常对照组给予等容积的双蒸水。各组均灌胃给药，1次/d，连续7天，末次给药后1小时，将各组小鼠依次置入500 mL钟罩中，用雾化器喷入25%氨水10 s，停留5 s，取出后立即记录小鼠的咳嗽潜伏期(从雾化器喷入氨水开始至发出咳嗽所需要的秒数)和3分钟内小鼠的咳嗽次数(以小鼠腹肌收缩/缩胸同时张大嘴，并有咳嗽表现为观察指标)，并计算潜伏期延长率(%)和镇咳百分率(%)。

潜伏期延长率=(给药组的咳嗽潜伏期-正常组的咳嗽潜伏期)/正常组的咳嗽潜伏期

镇咳百分率=(正常组的咳嗽次数-给药组的咳嗽次数)/正常组的咳嗽次数

1.5.1.2 豚鼠枸橼酸引咳实验 取豚鼠54只，分别置入连有雾化器的钟罩中，喷入17.5%枸橼酸，喷雾1分钟后，纪录5分钟内豚鼠咳嗽次数，少于10次者弃用。筛选出40只合格豚鼠，雌雄各半，随机分为5组，每组8只。参橘止咳滴丸大、中、小剂量组给药量分别为0.83、0.42、0.21 g/kg；阳性对照组给予急支糖浆11.0 mL/kg；正常对照组给予等容积的双蒸水。各组均灌胃给药，1次/d，连续7天，末次给药后1小时，将各组豚鼠依次置入1 000 mL钟罩中，用雾化器喷入17.5%的枸橼酸溶液5分钟，记录豚鼠咳嗽潜伏期(从喷雾开始到第一次咳嗽的时间为潜伏期)及在5分钟内咳嗽的次数(以听到的豚鼠咳嗽声计数)，并计算潜伏期延长率(%)和镇咳百分率(%)，公式同上。

1.5.1.3 电刺激引咳实验 取豚鼠40只，雌雄各半，分组与给药剂量同“1.5.1.2”，灌胃给药。将豚鼠用25%乌拉坦麻醉，待麻醉后，切开颈部皮肤，分离气管，插入Y型气管套管。一个支管与RM6420多道生理信号采集处理系统相连接的压力换能器连接，记录其呼吸运动，另一个支管连接橡皮管，借助于螺旋夹调节，使生物信号采集与处理系统记录的呼吸运动维持在适当的水平。用一白金的单极电极固定于气管的背面；另一电极插入胸下皮下组织中，采用刺激强度3.5 V，脉冲宽度50 ms，频率10次/s，刺激时间10 s，2次刺激间隔时间为5分钟，5、10、30、45分钟重复给予电刺激，观察刺激后豚鼠恢复正常呼吸所需时间的变化。

1.5.2 祛痰实验［2-3］

1.5.2.1 小鼠酚红法 取小白鼠50只，雌雄各半，分组与给药剂量同“1.5.1.1”，灌胃给药。末次给药30分钟后按每鼠25 mL/kg腹腔注射0.5%酚红溶液，30分钟后将小鼠颈椎脱臼处死，剥去气管周围组织，剪下甲状软骨下端至气管分支下端的一段气管，放入3 mL盛有5%NaHCO3溶液的试管中，振荡2分钟，2 000 r/min离心5分钟，取上清液，以5%碳酸氢钠溶液作为空白对照，用721型紫外可见分光光度计在波长546 nm处测OD值，根据酚红标准曲线计算酚红含量(μg/mL)。

1.5.2.2 大鼠毛细管集痰法 取Wistar大鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，每组10只。参橘止咳滴丸大、中、小剂量组给药量分别为0.94、0.47、0.24 g/kg；阳性对照组给予急支糖浆12.5 mL/kg；正常对照组给予等容积的双蒸水。各组均灌胃给药，1次/d，连续7天。实验前禁食不禁水12小时，用20%乌拉坦1.0 g/kg腹腔注射麻醉大鼠，仰卧固定，剪开颈中部皮肤，分离出气管，在甲状软骨下缘正中处两软骨环之间用针头扎一小孔，插入已称重的直径0.8 mm，长度10 cm的毛细玻璃管一根，使其刚好接触气管底部表面，当毛细管被分泌物充满后，立即再换一根同直径的毛细管，以毛细管内液柱长度值为评价祛痰量的指标，先记录给药前2小时的痰液分泌量；再按各自剂量灌胃给药后，记录2小时后的痰液分泌量。

1.6 统计学方法 采用SPSS 18.0软件进行统计学分析，数据以(±s)表示。组间比较采用单因素方差分析，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 止咳实验

2.1.1 参橘止咳滴丸对小鼠的止咳作用 参橘止咳滴丸各剂量组与正常对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.01)，与阳性对照组比较，参橘止咳滴丸中、大剂量组差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2.1.2 参橘止咳滴丸对豚鼠的止咳作用 参橘止咳滴丸各剂量组与正常对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，与阳性对照组比较，参橘止咳滴丸中、大剂量组差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

2.1.3 参橘止咳滴丸对豚鼠电刺激呼吸恢复正常所需时间的影响 参橘止咳滴丸各剂量组与正常对照组比较，小剂量组在给药后5、10分钟时，差异无统计学意义(P＞0.05)，在30、45分钟时差异有统计学意义(P＜0.05)；中剂量组在给药5、10分钟时差异有统计学意义(P＜0.05)，在30、45分钟时差异有统计学意义(P＜0.01)；大剂量组则从5分钟开始，差异有统计学意义(P＜0.05)。参橘止咳滴丸大剂量组与阳性对照组比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表3。

表1 参橘止咳滴丸对小鼠的止咳作用

表1 参橘止咳滴丸对小鼠的止咳作用

注：与正常对照组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；与阳性对照（急支糖浆）组比较，△表示P＜0.05，△△表示P＜0.01（下同）。

组别 只数 生药量 潜伏期/s 咳嗽/次 潜伏期延长率/% 镇咳/%正常对照组 10 - 30.6±12.1 57.7±24.6 - -急支糖浆组 10 18.00 m L/kg 55.8±15.9*23.4±14.9*82.4 59.5小剂量组 10 0.34 g/kg 66.6±15.4*17.0±4.5**117.6 70.5中剂量组 10 0.68 g/kg 85.3±24.2**△△15.4±5.8**△△178.8 73.3大剂量组 10 1.36 g/kg 104.2±17.7**△△11.2±7.7**△△240.5 80.6

表2 参橘止咳滴丸对豚鼠的止咳作用

表2 参橘止咳滴丸对豚鼠的止咳作用

组别 只数 生药量 潜伏期/s 咳嗽/次 潜伏期延长率/% 镇咳/%正常对照组 10 - 34.6±10.5 26.9±6.2 - -急支糖浆组 10 11.00 m L/kg 69.6±27.3*23.1±4.9 102.0 14.1小剂量组 10 0.21 g/kg 72.8±25.3*21.9±5.5*110.4 18.6中剂量组 10 0.42 g/kg 112.8±23.3**△△15.1±3.7**△△254.9 43.9大剂量组 10 0.83 g/kg 137.8±25.3**△△13.1±3.9**△△298.3 51.3

表3 参橘止咳滴丸对豚鼠电刺激呼吸恢复正常所需时间

表3 参橘止咳滴丸对豚鼠电刺激呼吸恢复正常所需时间

组别 只数 生药量 5 m i n 10 m i n 30 m i n 45 m i n正常对照组 10 - 157.5±16.1 144.3±20.5 142.6±11.4 144.1±11.9急支糖浆组 10 11.00 m L/kg 140.9±19.5 129.3±18.3 112.4±22.7*100.6±25.3**小剂量组 10 0.21 g/kg 132.4±19.1 118.3±23.6 94.1±10.9**82.0±11.2**中剂量组 10 0.42 g/kg 138.3±7.3*123.6±7.3*106.9±15.5**90.5±8.9**大剂量组 10 0.83 g/kg 70.6±37.4*△△71.3±31.6*△△38.6±31.9**△△32.2±27.7**△△

2.2 祛痰实验［4-7］

2.2.1 参橘止咳滴丸对小鼠酚红法酚红排出量的影响 参橘止咳滴丸各剂量组与正常对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，与阳性对照组比较，参橘止咳滴丸中、大剂量组小鼠酚红排出量显著增加(P＜0.05)。见表4。

表4 参橘止咳滴丸对小鼠酚红法酚红排出量的影响

表4 参橘止咳滴丸对小鼠酚红法酚红排出量的影响

组别 只数 剂量 O D值正常对照组 10 - 0.875±0.069急支糖浆组 10 18.00 m L/kg 1.466±0.044**小剂量组 10 0.34 g/kg 1.527±0.027**中剂量组 10 0.68 g/kg 1.749±0.049**△△大剂量组 10 1.36 g/kg 1.840±0.033**△△

2.2.2 参橘止咳滴丸对大鼠毛细管排痰法排痰量的影响 参橘止咳滴丸各剂量组与正常对照组比较，给药前2小时痰液的排出量基本相同，差异无统计学意义(P＞0.05)；给药后2小时大鼠痰液的排出量明显增加，差异有统计学意义(P＜0.05)。给药后2小时，参橘止咳滴丸小、中剂量组与阳性对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，大剂量组与阳性对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表5。

表5 参橘止咳滴丸对大鼠毛细管排痰法排痰量的影响

表5 参橘止咳滴丸对大鼠毛细管排痰法排痰量的影响

参考文献［1］ 刘小花，沈孝丽，梁谨，等.多指标综合评分法优化参橘止咳滴丸提取工艺［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17(14):33-35.［2］ 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学［M］.3版.北京:人民卫生出版社，2003:1359-1365.［3］ 陈奇.中药药理实验方法学［M］.2版.北京:人民卫生出版社，2006:625-631.［4］ 叶广亿，李书渊，陈艳芬，等.枇杷叶不同提取物的止咳化痰平喘作用比较研究［J］.中药药理与临床，2013，29(2):100-102.［5］ 凌珊，易炳学，龚千锋，等.生品和蜜炙款冬花不同提取物的镇咳祛痰作用［J］.中国实验方剂学杂志，2013，19(11): 187-190.［6］ 牛艳芬，孙玲，林华，等.鞘蕊喘咳舒胶囊止咳祛痰平喘作用研究［J］.中药药理与临床，2010，26(3):48-49.［7］ 罗文敏，尹军强，郑先玉，等.桂龙咳喘宁片止咳化痰平喘药效学的研究［J］.时珍国医国药，2011，22(10):2464-2465.［8］ 张刘强，李医明.近10年玄参属植物化学成分和药理作用研究进展［J］.中草药，2011，42(11):2360-2368.［9］ 谢小艳，夏春森.中药玄参的化学成分及药理研究进展［J］.亚太传统医药，2010，6(5):121-125.［10］文高艳，周贤梅.陈皮有效成分在呼吸系统中的作用研究［J］.现代中西医结合杂志，2011，20(3):385-386.

组别 只数 剂量 给药前2小时痰液量/cm 给药后小时痰液量/cm正常对照组 10 - 2.10±1.43 2.19±1.06急支糖浆组 10 12.50 m L/kg 2.15±1.51 9.56±1.32**小剂量组 10 0.24 g/kg 2.33±1.04 9.10±1.20**中剂量组 10 0.47 g/kg 1.88±0.71 10.70±1.20**大剂量组 10 0.94 g/kg 1.90±0.92 19.55±3.39**△△

3 讨论

参橘止咳滴丸以玄参和陈皮为主药，具有清热解毒，止咳利咽之功效。研究表明［8-10］：玄参的主要有效成分为环烯醚萜类和苯丙素苷类化合物，陈皮的主要有效成分为黄酮类、挥发油、对羟福林、柠檬烯和N-甲基酪胺等化合物，具有广泛的药理活性，如具有神经保护、抗糖尿病、抗脑缺血、抗炎、抗氧化等作用。

咳嗽是喉-气管-支气管系统对机械或化学刺激引起的一种正常生理反应，在实验动物身上，可通过机械、化学或电刺激气管黏膜迷走神经而产生。痰是人体呼吸道的分泌物，由气管和支气管的腺体和杯状细胞所分泌，最后会通过咳嗽被排出体外。本实验采用氨水、枸橼酸喷雾和电极刺激引咳及大小鼠祛痰实验模型，以动物咳嗽潜伏期，咳嗽次数，电刺激呼吸恢复时间、酚红排出量和毛细管集痰量为指标，观察参橘止咳滴丸对实验动物模型的药效学影响，发现参橘止咳滴丸表现出较好的止咳和祛痰作用，疗效优于急支糖浆，且在一定剂量范围内具有量效关系。

参橘止咳滴丸临床应用多年，对外感咳嗽和慢性支气管炎急性发作引起的咳嗽具有确切疗效，为止咳祛痰复方中药制剂，本实验为进一步明确其止咳祛痰作用机制提供科学依据和参考。

Pharmacodynamic Study on Antitussive and Expectorant Effects of ShenJu ZhiKe Drippling Pills

LI Juan1,LI Xiaodong2,FENG Shilan3,HU Fangdi3
1 Gansu Provincial Hospital,Lanzhou 730000,China;
2 Institute of Chinese Materia Medica of China Academy of Chinese Medical Sciences;
3 School of Pharmcy of Lanzhou University

Objective:To study antitussive and expectorant effects of ShenJu ZhiKe dripping pills.Methods: Antitussive and expectorant effects of ShenJu ZhiKe dripping pills were evaluated by the experiments of mice with cough induced by ammonia,guinea pig with cough induced by citric acid,guinea pig with cough induced by electricity stimulated superior laryngeal nerve,tracheal phenol red excretion test of the mice,capillary glass-tube expectoration method of the rats and other methods.Results:The difference indicated statistical meaning in the comparison of prolonging cough incubation period of experimental animals,reducing cough times,shortening breathing recovery time of guinea pig induced by electrical stimulation,increasing phenol red excretion amount and expectoration amount when different doses groups of ShenJu ZhiKe dripping pills were compared with normal control group (P＜0.05).The difference demonstrated statistical meaning in the comparison of prolong incubation period of experimental animals,shortening breathing recovery time of guinea pig induced by electrical stimulation,increasing phenol red excretion amount and expectoration amount when moderate and high doses groups of ShenJu ZhiKe dripping pills were compared with positive control group (JiZhi syrup)(P＜0.05).Conclusion:ShenJu ZhiKe dripping pills showobviousantitussiveandexpectoranteffects,andhighdosegroupissuperiortoJiZhisyrupgroupinclinicaleffects.

ShenJu ZhiKe dripping pills;antitussive effects;expectorant effects

R285.5

A

1004-6852(2015)10-0015-04

2015-02-10

兰州市科技计划项目(编号05-1-48)。

李娟(1981—)，女，主治医师。研究方向：慢性病的中医药康复治疗。