生脉膨化胶囊对免疫功能低下小鼠的影响*

王懿萍，尹 晔，王盛民，刘睿颖，熊 雄

1西南交通大学峨眉校区，四川 峨眉 614202；2西南交通大学生命科学与工程学院

生脉膨化胶囊对免疫功能低下小鼠的影响*

王懿萍1，尹 晔2，王盛民2，刘睿颖2，熊 雄1

1西南交通大学峨眉校区，四川 峨眉 614202；2西南交通大学生命科学与工程学院

目的：观察生脉膨化胶囊对免疫功能低下小鼠的影响。方法：采用环磷酰胺造免疫抑制小鼠模型，通过观察小鼠脏器指数、小鼠脾淋巴细胞转化及骨髓D N A含量测定，评价生脉膨化胶囊对免疫功能低下小鼠的影响。结果：各剂量组脏器指数均高于正常组，中剂量组的胸腺、脾脏、肾脏指数明显高于模型组（P＜0.05），肝脏指数高于模型组（P＜0.05）；高、中剂量组相对于模型组能显著提升淋巴细胞增殖反应（P＜0.05）；各剂量组D N A含量明显高于模型组（P＜0.05）。结论：生脉膨化胶囊具有增加小鼠免疫功能的作用，在多方面优于传统生脉胶囊。

生脉膨化胶囊；生脉胶囊；免疫功能

生脉散又名生脉饮，由红参、麦冬、五味子组成，是益气养阴的传统古方。现代药理研究表明其具有镇静、提高心脏对缺氧耐受力、扩张冠状动脉和增强心肌收缩力的作用，广泛用于急性心肌梗死、冠心病、心绞痛、心源性休克及感染性休克的治疗［1］。中药膨化技术借助食品膨化原理，对中药材进行膨化处理，使之结构疏松，有效成分易于溶出。红参膨化前后的化学成分基本一致，其指纹图谱相似度大于0.99［2］。因此，我们将生脉散组方中的红参进行膨化处理后制备了生脉膨化胶囊。已有研究表明：红参膨化处理后得到的生脉膨化胶囊和普通生脉胶囊比较，人参总皂苷含量并无显著性差异，但前者具有释药更快的特点［3］。笔者分析2种生脉胶囊对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的影响，探讨膨化技术在中药加工中应用的可行性。

1 材料与方法

1.1 仪器 m312604型离心机(北京中西远大科技有限公司提供)；TU1901型紫外可见分光光度计 (北京普析通用仪器有限公司提供)；BJHA-PYC30型CO2恒温培养箱(北京中西化玻仪器有限公司提供)；JY10001型电子天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂提供)；精密天平。1.2 试剂 环磷酰胺注射液(江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号：08121021)；刀豆球蛋白A(ConA) Sigma公司生产，批号：11028-71-0)；噻唑蓝(上海伯奥生物科技公司分装，批号：970408)；酸性异丙醇；PBS缓冲液(自制：称取磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾，吐温-20，加水，0.22 μm微孔滤膜过滤除菌，-20℃保存备用)；台盼蓝染色剂(上海创赛科学仪器有限公司生产，批号：B11000468)；RPMI1640培养液 (上海创赛科学仪器有限公司生产，批号：B11000180)。

1.3 试药 生脉胶囊(自制)，生脉膨化胶囊(自制)，制备方法见文献［3］。

1.4 实验动物 昆明种小鼠(22±2)g，雌雄各半，购于四川省实验动物专委会养殖场。

1.5 实验方法 昆明种小鼠90只，随机分为正常组、模型组、生脉胶囊组、生脉膨化胶囊高、中、低剂量组共6组。正常组生理盐水灌胃，1次/d，0.5 mL/次，连续15天；模型组从第1天开始，每天1次腹腔注射环磷酰胺20mg/kg)，共注射5次，每天灌胃生理盐水0.5 mL，连续15天；生脉胶囊及生脉膨化胶囊高、中、低剂量组除每天1次腹腔注射环磷酰胺(剂量同模型组，共5次)外，每天灌胃药物0.5mL(生脉胶囊组：0.82 g/kg，0.1 g/mL；生脉膨化胶囊高剂量组：1.64 g/kg，0.1 g/mL；生脉膨化胶囊中剂量组：0.82 g/kg，0.1 g/mL；生脉膨化胶囊低剂量组：0.41g/kg，0.1g/mL)，连续15天。1.6 脏器指数 给小鼠称重并记录体质量，最后1天断头处死小鼠，取出肝脏、肾脏、脾脏和胸腺，分别用生理盐水漂洗，滤纸吸干，在电子分析天平上称重，计算脏器指数。

1.7 ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化 脾细胞悬液制备：无菌取脾，研磨，过200目筛，PBS液冲洗，收集分离的脾细胞悬液，1 500 r/min离心5～10分钟，弃上清；加红细胞裂解液10 mL，混匀脾细胞，静置4～5分钟，待红细胞完全破碎，1500r/min离心10分钟，弃上清液去除红细胞，PBS液洗2～3遍，将细胞悬浮于1 mL完全培养液中，台盼蓝染色计数，活细胞数在95%以上，调整细胞密度2× 106个/mL。将细胞悬液加入96孔细胞培养板，每孔100 μL。每个实验组设6个复孔(加ConA液50 μL，相当于5 μg/mL)，同时设对照孔6个(加RPMI1640培养液50 μL)。置5%CO2，37℃培养箱中培养72小时。培养结束前4小时，每孔加入20μL MTT，继续培养4小时。培养结束后，1 000 r/min离心5分钟，弃上清，每孔加100 μL酸性异丙醇，吹打均匀，使紫色结晶完全溶解，紫外可见分光光度计(570 nm)测吸光度(A)。

1.8 骨髓D N A含量 取小鼠右侧股骨，除净软组织，用0.005 mol/L，CaCl210 mL将全部骨髓冲入离心管，置4℃冰箱30分钟，2 500 r/min离心15分钟，弃上清，将沉淀物加入0.2 mol/L，HClO45 mL中，90℃加热15分钟，冷却过滤，滤液在紫外可见分光光度计(260 nm)测A(1A代表50 μm/mL双链DNA)。

2 结果

2.1 对免疫抑制小鼠脏器指数的影响 模型组小鼠注射环磷酰胺后，胸腺、脾脏和肝脏指数均有不同程度下降，表明环磷酰胺可使小鼠上述器官萎缩。对胸腺指数的影响：与模型组比较，生脉膨化胶囊各剂量组和生脉胶囊组均能明显提高免疫抑制小鼠胸腺指数，差异有统计学意义(P＜0.05)；与生脉胶囊组比较，生脉膨化胶囊中剂量组可提高免疫抑制小鼠胸腺指数，差异有统计学意义(P＜0.05)；生脉膨化胶囊各剂量组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

2.2 对脾脏指数的影响 与模型组比较，生脉膨化胶囊各剂量组可明显提高免疫抑制小鼠脾脏指数，差异有统计学意义(P＜0.05)，生脉胶囊组则无统计学意义(P＞0.05)；与生脉胶囊组比较，生脉膨化胶囊中、低剂量组可明显提高免疫抑制小鼠脾脏指数，差异有统计学意义(P＜0.01)；生脉膨化胶囊各组之间比较，中剂量组与高、低剂量组之间差异显著，但高、低剂量组之间差异无统计学意义(P＞0.05)，说明中剂量组效果显著。见表1。

表1 各组胸腺指数及脾脏指数比较 m g/g

2.3 对肝脏指数的影响 与模型组比较，生脉胶囊组和生脉膨化胶囊中、低剂量组均可明显提高免疫抑制小鼠肝脏指数，具有显著差异(P＜0.05)；生脉膨化胶囊各剂量组比较，中剂量组与高、低剂量组之间差异显著(P＜0.05)，但高、低剂量组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。见表2。

2.4 对肾脏指数的影响 与模型组比较，生脉胶囊组、生脉膨化胶囊高、低剂量组可提高免疫抑制小鼠肾脏指数，差异有统计学意义(P＜0.05)，生脉膨化胶囊中剂量组差异有统计学意义(P＜0.05)；与生脉胶囊组比较，生脉膨化胶囊中剂量组可明显提高免疫抑制小鼠肾脏指数，差异有统计学意义(P＜0.05)；生脉膨化胶囊各剂量组间比较，中剂量组与高、低剂量组之间差异有统计学意义(P＜0.01)，但高、低剂量组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。见表2。

表2 各组肝脏指数及肾脏指数比较 m g/g

2.5 对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力的影响 与模型组比较，生脉胶囊组，生脉膨化胶囊高、中剂量组可明显提高ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表3。

表3 生脉膨化胶囊对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力的影响

2.6 对骨髓D N A含量的影响 与模型组比较，生脉胶囊组，生脉膨化胶囊各剂量组可明显提高免疫抑制小鼠骨髓DNA含量，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表4。

表4 生脉膨化胶囊对免疫抑制小鼠骨髓D N A含量的影响

3 讨论

胸腺和脾脏是动物体内主要的免疫器官，免疫器官重量是反映机体非特异性免疫功能的重要指标，胸腺和脾脏指数的高低能客观反映机体非特异性免疫功能。生脉膨化胶囊各剂量组脏器指数均高于正常组，中剂量组胸腺、脾脏、肾脏指数明显高于模型组(P＜0.05)，肝脏指数高于模型组(P＜0.05)。因此，生脉膨化胶囊对由环磷酰胺引起的免疫器官及主要脏器变化有一定保护作用，中剂量组效果优于传统生脉胶囊(P＜0.05)。

在ConA诱导淋巴细胞转化实验中，模型组小鼠淋巴细胞增殖反应明显降低。传统生脉胶囊组及生脉膨化胶囊高、中剂量组能显著提升免疫抑制小鼠的淋巴细胞增殖反应(P＜0.05)。淋巴细胞是反映特异性免疫的一个重要指标，生脉膨化胶囊能显著提高免疫抑制小鼠的淋巴增值反应，说明生脉膨化胶囊能够有效地提高机体特异性免疫功能。

环磷酰胺造模后，模型组小鼠骨髓DNA含量最低，提示环磷酰胺具有明显的骨髓抑制作用。生脉膨化胶囊各剂量组DNA含量明显高于模型组(P＜0.05)，高剂量组高于传统生脉胶囊组。骨髓属于免疫器官，机体内所有细胞(包括巨噬细胞、淋巴细胞、肥大细胞等)都能在骨髓中产生，因此骨髓DNA含量的恢复能在某种程度上反映免疫功能的强弱。生脉膨化胶囊能显著提高免疫抑制小鼠骨髓DNA含量，提示生脉膨化胶囊对环磷酰胺所致骨髓损伤具有一定的保护作用，能有效保护生物体的免疫系统。

综上所述，生脉膨化胶囊对环磷酰胺致免疫功能低下小鼠的免疫功能具有恢复作用，且在多方面表现要优于传统生脉胶囊，说明膨化技术用于生脉散中的红参膨化是可行的。

［1］ 彭明勇，李艳.生脉散的临床应用及药理研究［J］.中医中药，2012，10(1)：224-226.

［2］ 张翠英.人参膨化炮制及膨化饮片的质量研究［D］.成都：西南交通大学，2006.

［3］ 王懿萍，姜怡，王盛民.中药膨化技术用于生脉胶囊的可行性研究［J］.时珍国医国药，2010，21(1)：174-176.

The Effects of ShengMai Puffed Capsules on the Mice with Immune Dysfunction

WANG Yiping1,YIN Ye2,WANG Shengming2,LIU Ruiying2,XIONG Xiong1
1 Emei Branch of Southwest Jiaotong University,Emei 614202,China; 2 School of Life Science and Engineering of Southwest Jiaotong University

Objective:To observe the effects of ShengMai puffed capsules on the mice suffering from immune dysfunction.Methods:Immunodepression mice were prepared with cyclophosphamide,the effects of ShengMai puffed capsule on the mice with immune dysfunction were assessed by observing organ index,splenic lymphocyte transformation and detecting DNA contents of bone marrow.Results:Different doses groups were higher than the normal group in organ indexes,moderate dose group was higher than the model group in thymus index,spleen index and kidney index obviously (P＜0.05),higher than the model group in liver index (P＜0.05);compared with the model group,high and moderate doses groups could significantly raise lymphocyte proliferation(P＜0.05);different doses group was higher than the model group in DNA contents(P＜0.05).Conclusion:ShengMai puffed capsules could improve immune function of the mice,it's superior to traditional ShengMai capsules in many aspects.

ShengMai puffed capsules;ShengMai capsules;immune function

R285.5

A

1004-6852(2015)10-0009-03

2015-02-10

四川省科技攻关计划(编号2006Z08-021)；成都市科技局科技攻关计划(编号07G G Y B100SF-010)。

王懿萍(1963—)，女，硕士学位，教授。研究方向：中药质量控制研究。