降脂复肝胶囊质量标准研究

李彩东等

摘要：目的 建立降脂复肝胶囊的质量标准。方法 采用薄层色谱法对制剂中赤芍、丹参进行薄层定性鉴别。采用高效液相色谱法，Phenomenex C18色谱柱，以甲醇-0.1%磷酸水溶液（31∶69、75∶25）为流动相，流速1.0 mL/min，分别对制剂中芍药苷和丹参酮ⅡA的含量进行分析测定。结果 薄层鉴别图谱斑点清晰，阴性对照无干扰。芍药苷和丹参酮ⅡA进样量分别在0.448～4.48 μg和0.057 6～0.576 μg范围内线性关系良好，相关系数分别为0.999 4、0.999 5，平均加样回收率分别为99.93%（RSD=1.98%，n=9）、99.75%（RSD=1.70%，n=9）。结论 本试验定性定量检测方法准确、可靠、稳定、快速，重复性好，可用于降脂复肝胶囊的质量控制及评价。

关键词：降脂复肝胶囊；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.04.026

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2015）04-0094-04

Study on Quality Standard of Jiangzhi Fugan Capules LI Cai-dong， PAN Xin-bo， ZHANG Wei， WANG Xin （The Second Peoples Hospital of Lanzhou， Lanzhou 730046， China）

Abstract：Objective To establish the quality standard of Jiangzhi Fugan Capules. Methods TLC was used to the qualitative identification of Paeoniae Radix Rubra and Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma. The contents of Paeoniflorin and Tanshinone ⅡA were determined by HPLC. The HPLC separation was performed on Phenomenex C18 column （4.6 mm×250 mm， 5 μm）， with methanol- 0.1% phsophonic acid （31∶69， 75∶25） as mobile phase， and the flow rate was 1.0 mL/min. Results The results of TLC showed that relevant spots were clear without interference against the negative sample. The calibration curves for Paeoniflorin and Tanshinone ⅡA were found to be liner within the range of 0.448-4.48 μg， 0.057 6-0.576 μg， respectively. The correlation coefficients were 0.999 4 and 0.999 5， respectively. The average recoveries were 99.93% and 99.75%， with RSD of 1.98% （n=9） and 1.70% （n=9）， respectively. Conclusion The method is accurate， reliable， stable， rapid， and reproducible， and can be used for the quality control and evaluation of Jiangzhi Fugan Capules.

Key words：Jiangzhi Fugan Capules；quality standard；TLC；HPLC

降脂复肝胶囊由赤芍、丹参、山楂、制何首乌等9味中药提取加工而成，具有疏肝健脾、降脂化瘀、活血软坚等功效，临床用于脂肪肝、高脂血症的治疗，为本院院内制剂。本研究对处方中赤芍、丹参进行薄层色谱鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC）对处方中芍药苷、丹参酮ⅡA进行含量测定，并对其进行方法学验证，建立降脂复肝胶囊的质量控制方法，为该制剂的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

HPLC-20A高效液相色谱仪：PDA紫外检测器（日本岛津公司）；FA2004N型电子分析天平（上海精密科

通讯作者：潘新波，E-mail：sinpo_pan@163.com

学仪器有限公司）；超声波提取器（济宁天华超声电子仪器有限公司，型号TH-100BQ）；恒温水浴锅（江苏省金坛市环宇科学仪器厂，型号HH-8）。

芍药苷对照品（批号110736-201136，供含量測定用）、丹参酮ⅡA对照品（批号110766-200619，供含量测定用）、赤芍对照药材（批号121093-200402）、丹参对照药材（批号120923-201113），购于中国食品药品检定研究院；降脂复肝胶囊（批号120125、120222、120321、120425、120523）及缺赤芍、缺丹参阴性对照样品，本院制剂室自制；硅胶G板，青岛海洋化工厂；甲醇（色谱纯），深圳西陇化工股份有限公司；磷酸（色谱纯），天津市科密欧化学试剂有限公司；双蒸水（自制），其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 赤芍 取降脂复肝胶囊内容物2.0 g，加乙醇50 mL，超声处理30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。取赤芍对照药材粉末0.5 g，同法制成对照药材溶液。取缺赤芍的降脂复肝胶囊样品2.0 g，按供试品溶液制备方法制备，作为赤芍阴性对照溶液。另称取对照品芍药苷适量，加乙醇制成2 mg/mL的对照品溶液。按薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，分别吸取上述溶液各5 μL，在同一硅胶G薄层板上点样，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶8∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液显色，105 ℃加热使斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱的相应位置上，出现相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰[1]147。

2.1.2 丹参 取降脂复肝胶囊内容物2.0 g，加75%甲醇25 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，加盐酸1 mL，用乙酸乙酯萃取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。取丹参药材粉末0.5 g，同法制成对照药材溶液。取不含丹参的降脂复肝胶囊样品，按供试品溶液制备方法制备，作为丹参阴性对照溶液。按薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，分别吸取上述3种溶液各5 μL，于同一硅胶G薄层板上点样，以甲苯-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇-甲酸（2∶3∶8∶1∶1）为展开剂，展开，取出，挥干。喷以1%FeCl3乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰。

2.2 芍药苷含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex C18柱（5 μm， 4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（31∶69）；检测波长：230 nm；柱温：30 ℃；流速1.0 mL/min；进样量：10 μL[1]147，[2-3]。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品适量，精密称定0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL溶解，称定质量，超声提取（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，即得。

2.2.3 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品适量，置棕色容量瓶中，加甲醇配成浓度为224.0 μg/mL的对照品贮备液。

2.2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例分别称取缺赤芍的其余药味，按照制备工艺制成缺赤芍的阴性样品。准确称取该阴性样品0.5 g，按“2.2.2”项下方法制备，即得。

2.2.5 专属性试验 分别吸取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，结果显示阴性对照无干扰。色谱图见图1。

2.2.6 线性关系考察 分别精密量取芍药苷对照品贮备液2、6、8、10、14、20 μL，按上述条件进样测定。以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准线性回归曲线，得回归方程Y=1 829 569.687 5X-194 161.3，r=0.999 5。结果表明，芍药苷的进样量在0.448～4.48 μg范围内线性良好。

2.2.7 精密度试验 精密量取芍药苷对照品溶液10 μL，连续进样6次，芍药苷色谱峰的峰面积RSD=0.75%，结果表明仪器精密度良好。

2.2.8 稳定性试验 取同一份供试品溶液，于配制后0、4、8、12、24 h进样测定，芍药苷色谱峰的峰面积RSD=1.31%，结果表明在室温条件下该供试品溶液24 h内稳定性良好。

2.2.9 重复性试验 称定6份同一批号的样品，按“2.2.2”项下制备，精密吸取10 μL，按上述色谱条件进样测定，芍药苷的含量RSD=1.87%，结果表明该方法重复性良好。

2.2.10 加样回收率试验 精密称定9份已知含量同一批号的样品，每份0.2 g，平均分为3组，每组芍药苷对照品的加入量分别相当于供试品中原有含量质量分数的80%、100%、120%，按“2.2.2”项下方法制成低、中、高浓度的溶液，每个浓度各测定3次，分别精密吸取10 μL，注入高效液相色谱仪，以外标法进行测定，结果见表1。

2.3 丹参酮ⅡA含量测定

2.3.1 色譜条件 色谱柱：Phenomenex C18柱（5 μm， 4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（75∶25）；检测波长：270 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。

2.3.2 供试品溶液的制备 取本品适量，精密称定0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL溶解，称定质量，超声提取（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，即得[1]70。

2.3.3 对照品溶液的制备 取丹参酮ⅡA对照品适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加甲醇配制成浓度为28.8 μg/mL的对照品贮备液。

2.3.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例分别称取缺丹参的其余药味，按照制备工艺制成缺丹参的阴性样品。准确称取该阴性样品0.5 g，按“2.3.2”项下方法制备，即得。

2.3.5 专属性试验 分别吸取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，结果显示丹参阴性对照无干扰。色谱图见图2。

2.3.6 线性关系考察 分别精密量取丹参酮ⅡA对照品贮备液2、4、8、12、16、20 μL，按上述条件进样测定。以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制线性回归曲线，得回归方程Y=7 212 091.080 7X+45 539.907 7，r=0.999 4，结果表明，丹参酮ⅡA的进样量在0.057 6～0.576 μg范围内与其峰面积的线性关系良好。

2.3.7 精密度试验 精密量取丹参酮ⅡA对照品溶液各10 μL，连续进样6次，色谱峰峰面积RSD=0.79%，结果表明仪器精密度良好。

2.3.8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，于配制后0、4、8、12、24 h进样测定，丹参酮ⅡA色谱峰峰面积RSD=0.87%，结果表明，在室温条件下该供试品溶液24 h内稳定性良好。

2.3.9 重复性试验 称定6份同一批号的样品，按“2.3.2”项下方法制备供试品样品溶液，精密吸取10 μL，分别按上述样品测定法进样测定，丹参酮ⅡA含量RSD=2.43%，结果表明该方法重复性良好。

2.3.10 加样回收率试验 精密称定9份已知含量同一批号的样品，每份0.2 g，平均分为3组，每组分别精密加入相当于供试品中原有含量质量分数80%、100%、120%的丹参酮ⅡA对照品，按“2.3.2”项下方法制成低、中、高浓度的溶液，每个浓度各测定3次，分别精密吸取10 μL进样，以外标法进行测定，结果见表3。

2.3.11 样品含量测定 精密称取5批降脂复肝胶囊样品，每批3份，按照“2.3.2”项下方法制备供试品溶液并测定，结果见表4。

3 讨论

本试验中，赤芍的薄层鉴别参考药典方法，得到重复性好、专属性强、阴性无干扰的定性鉴别方法。丹参的薄层鉴别中，药典采用硅胶GF254高效薄层板，但本试验发现GF254板的荧光对丹参中某些成分的鉴别有干扰，故通过查阅文献在药典方法上进行多次改进，最终确定其鉴别方法为硅胶G薄层板，FeCl3乙醇溶液显色，日光下检视。结果显示其专属性强、阴性对照无干扰。

赤芍药材及不同制剂中芍药苷的含量测定方法已有报道[2-3]，通过参阅药典和相关文献[4-7]，本试验对样品的提取方法进行了方法学考察。分别考察了超声、煎煮2种提取方式，及提取时间、溶剂对供试品中芍药苷和丹参酮ⅡA含量的影响，结果显示，芍药苷和丹参酮ⅡA分别采用50%甲醇和100%甲醇超声处理30 min，溶出较完全，为最佳提取方式。分别考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸水、乙腈-磷酸水作为流动相对样品分离效果的影响，结果表明，以甲醇-0.1%磷酸水为流动相时，样品色谱峰峰型、分离度良好。

本研究采用HPLC对降脂复肝胶囊中芍药苷和丹参酮ⅡA进行了含量测定，方法学考察结果表明，在选定的色谱条件下，其他成分无干扰，系统适用性符合要求，所建立的含量测定方法简便可行，精密度好，方法稳定，重复性好，能有效地对降脂复肝胶囊进行质量控制。

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（收稿日期：2014-08-20；編辑：陈静）