中期因子在子宫颈癌中的表达及其临床意义

司马学琴 刘驯骅 李敏才 宁志丰▲

1.湖北科技学院基础医学院，湖北咸宁 437100；2.广东省人民医院病理科，广州 510000

近年来，子宫颈癌发病率及年轻化趋势己成为全球性公共卫生问题。据世界卫生组织报道，全世界每年有约50万例新发子宫颈癌病例，而我国每年新增该病患者达10万例，占全世界新发病例的1/5。子宫颈癌的治疗方法较多，有手术、放疗和化疗等综合治疗，我国每年仍有（2~3）万女性死于子宫颈癌。恶性肿瘤的发生、发展是多种因素相互作用的结果，随着生物化学及分子生物学理论与技术的进步，人们正在探索影响宫颈癌发生、发展的相关因子及对子宫颈癌更有效的治疗手段，从而改善宫颈癌患者的预后，降低该病的复发率和死亡率[1-2]。本文主要探讨中期因子（midkine，MK）在子宫颈癌中的表达与临床病理关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年1月~2015年1月就诊于本院经宫颈活检组织病理证实且未经任何治疗的子宫颈癌存档石蜡包埋标本90例，包括鳞癌67例，腺癌23例。患者年龄45（21～66）岁，其中子宫颈癌Ⅰ期28例、ⅡA期25例、ⅡB期19例、Ⅲ期18例[按国际妇产科联合会宫颈癌的临床分期（FI-Go，2004标准）][3]；组织分化程度：高分化 28例，中分化35例，低分化27例；伴淋巴结转移40例，无淋巴结转移50例。另取慢性宫颈炎45例，患者年龄44.3（20～65）岁和宫颈上皮内瘤样病变（CIN）45 例为对照组[年龄 45.7（31～70）岁，CINⅠ12例，CINⅡ14例，CIN Ⅲ19例]。3组患者的一般资料差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 研究方法

应用二步法免疫检测法，用10%甲醛固定组织标本，石蜡包埋，将标本连续切厚度为4.0μm的片，每例患者保留2张切片，分别进行HE染色、MK染色。山羊抗人MK多克隆抗体和兔抗人瘦素多克隆抗体均购于美国Santa Cruz公司，SP免疫组织化学试剂盒购自福州迈新生物有限公司。通过染色、显色、封片后镜检将组织切片脱蜡并脱水，参照说明书步骤染色，标本检验过程均无差异。将实验结果与已知阳性图片作对照。

1.3 结果判定[4]

在高倍镜观察选取有代表性的视野，每次约10个左右，每个视野计数50个细胞。若视野中有20%的细胞出现棕黄色染色，包括细胞质和（或）细胞膜，结果即为阳性。

1.4 统计学处理

采用SPSS 13.0软件处理数据，计量资料以x±s表示，采用t检验，计数资料以%表示，采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MK的镜下表达

慢性宫颈炎和宫颈上皮内瘤样病变组织的染色呈浅黄色，MK中期因子未见表达或表达微弱；位于宫颈组织边缘癌组织病变严重的胞质和胞膜染色较重，成棕黄色，主要见于图1、图2。血管密集部位的癌细胞间质纤维组织和小血管内皮细胞染色也呈弱阳性。

图1 宫颈癌细胞MK蛋白阳性表达（×400）

图2 宫颈癌细胞MK蛋白阳性表达（×100）

2.2 MK在不同宫颈疾病中阳性表达率的比较

MK在子宫颈癌、慢性宫颈炎、宫颈上皮瘤样组织中的阳性表达率为 78.9%（71/90）、8.9%（4/45）和11.1%（5/45），3 组比较，差异有统计学意义（χ2＝41.33，P＜0.05）。

2.3 MK在子宫颈癌各相关因素中表达情况的比较[5]

不同临床分期、组织分化程度和有无淋巴结转移宫颈癌的MK阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。宫颈鳞癌与宫颈腺癌的MK阳性率比较，差异无统计学意义（χ2=16．52，P＞0.05）（表 1）。

表1 MK在宫颈癌各相关因素中表达情况的比较[n（%）]

3 讨论

MK是体内内分泌系统的产物，能与肝素结合生长的低分子量蛋白质。在妊娠中期的胚胎组织中分布最广的MK成年后仅表达在某些特定组织中。MK因子具有多种生物学活性，在人类肿瘤细胞中表达明显，不仅能促进肿瘤细胞的生长，还可促进细胞分化、促有丝分裂、增强纤维溶酶活性等。近年已有研究发现，其在多种肿瘤组织中有异常表达，参与肿瘤的血管生成、抗细胞凋亡，并可影响肿瘤细胞的存活增殖与分化，还可能直接参与肿瘤的生长、转移过程，其在良恶性组织病变中有明显的表达差异。

MK是近年来新发现的基因，与多向因子共同组成肝素结合生长因子家族，最初在视磺酸诱导分化的早期胚胎瘤细胞中被发现。近年的研究表明，MK在肿瘤组织中有过度表达，与肿瘤的发生、发展和分化密切相关，并具有抗细胞凋亡的作用。MK在体内的分布随着胚胎的发育而变化，妊娠中期是分泌高峰期，以后逐渐减少，成年后只在肾脏组织可检测出。近年有研究发现，MK在肝癌、乳腺癌[6]等肿瘤组织中的表达，本研究主要是观察MK在宫颈癌组织中的表达与临床病理特征的关系。MK蛋白阳性表达主要位于宫颈癌肿瘤细胞的细胞质内，细胞核无染色情况，并且染色组织分布呈现出弥漫性，同时具有较为显著的特异性，在组织边缘部位表达增强。

本研究结果示，MK在子宫颈癌、慢性宫颈炎、宫颈上皮瘤样组织中的阳性表达率分别为78.9%、8.9%、11.1%，差异有统计学意义（P＜0.05），提示MK在不同的宫颈病理中阳性率表达不同，在子宫颈癌中表达程度最高，故在以后的研究中考虑其可以作为宫颈癌病变的预兆及治疗的研究入口[7-9]。子宫颈癌组织Ⅱ、Ⅲ期的MK阳性表达程度较Ⅰ期明显，中、低分化和有淋巴结转移的子宫颈癌组织的MK阳性表达率比高分化和无淋巴结转移的子宫颈癌组织更高（P＜0.05），但宫颈鳞癌与宫颈腺癌的阳性表达率比较，差异无统计学意义，故MK随着组织恶化程度的增高表达越明显，在临床可以为宫颈疾病，尤其是子宫颈癌的恶化程度提供参考。

本研究对比、分析了MK在子宫颈癌、慢性宫颈炎和宫颈上皮瘤样组织中的不同分布，进一步说明MK在肿瘤细胞中表达明显。王耀先等[10-11]认为，MK在子宫颈鳞癌阳性表达率显著高于腺癌（P<0.01），与本研究结果不同，可能与研究过程中的标本人数或实验方法有关，有待进一步探讨。

综上所述，MK在肿瘤组织中活性很高，但在正常组织中活性较低[12-16]，由于其在肿瘤组织中的特殊作用使其有望成为治疗恶性肿瘤疾病的靶点，故对MK在子宫颈癌组织中的研究有一定的临床意义，其可能成为子宫颈癌诊断和预后的重要指标。

[1]柳杨.浅谈中期因子在宫颈癌组织中的表达及临床意义[J].当代医药论丛，2014，12（18）：261-262．

[2]张健，郑艾，柴丹，等.新辅助化疗对宫颈癌组织中MK和MVD表达的影响[J].四川大学学报·医学版，2008，39（6）：950-952.

[3]林仲秋．FIGO/IGCS妇科恶性肿瘤分期及临床实践指南之三：宫颈癌[J].国际妇产科学杂志，2008，35（3）：226-228．

[4]刘钧，赵永年，谭榜宪，等.中期因子、一氧化氮合酶和VEGF在子宫颈癌的表达及临床意义[J].诊断病理学杂志，2004，11（6）：415-417.

[5]高德红，廖琪.转移相关基因1在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中表达及意义[J].中国优生与遗传杂志，2012，20（ 11 ）：31，73.

[6]张曙光，张林.Midkine基因在肿瘤治疗中的研究进展[J].现代肿瘤医学，2011，19（8）：1681-1684.

[7]Dai LC，Wang X，Yao X，et al.Antisense oligonucleotides targeting midkine inhibit tumor growth in an in situ human hepatocellular carcinoma model[J].Acta Pharnmcol Sin，2007，28（3）：453-458.

[8]傅瑶，梁冠盈，迟秋君，等.HPV感染及 MMP-2、MMP-7、MMP-9的表达与子宫颈癌相关性分析[J].哈尔滨医科大学学报，2014，48（6）：444-448.

[9]Kadomatsu K，Muramatsu T.Midkine and pleiotrophin in neural development and cancer[J].Cancer Lett，2004，204（2）：127-143.

[10]王耀先，于晖，陈秀玮，等.宫颈癌组织中中期因子表达与临床病理特征的关系[J].哈尔滨医科大学学报，2008，42（6）：622-624.

[11]杨越波，曾海涛，唐虹，等.影响子宫颈癌预后的高危因素分析[J].中国妇幼保健，2011，26（8）：1145-1148.

[12]高琨，丁丽，李力，等.中晚期子宫颈癌患者调强放疗的疗效及预后影响因素分析[J].中华妇产科杂志，2014，49（1）：30-35.

[13]高翔，张淑兰.BMI-1基因和蛋白在子宫颈癌中的表达和临床意义[J].中国医科大学学报，2011，40（8）：719-721.

[14]王露颖，杨正才，杨竹，等.FOXC1蛋白在子宫颈癌及子宫内膜癌中的表达及意义[J].重庆医科大学学报，2010，35（4）：497-500.

[15]申震，周颖，赵卫东，等.Vimentin及E-Cadherin在子宫颈癌中的表达及其与上皮细胞间质化的相关性[J].安徽医科大学学报，2013，48（5）：505-508.

[16]宋恩霖，王茂梅，熊秀娟，等.子宫颈癌组织中AEG-1表达与微血管生成的关系[J].临床与实验病理学杂志，2014，30（7）：717-720.