38 例EDTA－K2 抗凝剂引起血小板假性减少患者四种方法复检结果对比分析

黄 亮，刘祉琳 (广东省肇庆市第二人民医院检验科，广东 肇庆 526060)

目前各医疗单位常规筛检血小板计数主要方法为血液分析仪法，它测定速度快、重复性好、准确性高，能同时提供血小板多项指标。但由于自身检测原理的限制以及血小板易于黏附、聚集、破坏等特点，血液分析仪测定血小板常会出现与临床症状不符的低值。血小板减低是引起出血的常见原因，当血小板在20 ～50×109/L 时，可有轻度出血或术后出血症状，低于20×109/L 时可有较严重的出血;低于5×109/L 时，可导致严重的出血并可危及生命［1］。血小板的正确计数直接影响对患者疾病的诊断和治疗，因此及时发现血小板假性减少现象，选择正确方法纠正计数非常重要。现就我院38 例EDTA 依赖性血小板假性减少症患者用枸橼酸钠、肝素锂抗凝静脉血、末梢血、手工显微镜计数法、涂片法进行复检的实验分析报告如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源:我院2010 年9 月～2014 年7 月住院患者首次用EDTA-K2抗凝静脉血在血细胞分析仪血测定血小板明显减低，涂片染色镜检发现血小板聚集及血小板数量在正常参考范围内、结合临床资料体表检查无出血、瘀点、瘀斑、血尿、黑便等血小板减少症状及出、凝血时间正常，诊断EDTA 依赖性血小板减少症患者38 例。其中男17 例，女29 例，年龄3 天～79岁。

1.2 仪器与试剂:MindrayBC-5180 血细胞分析仪与配套试剂。Olympus 显微镜。EDTA-K2 抗凝管、枸橼酸钠抗凝管、肝素锂抗凝管，为广州阳普医疗科技股份有限公司提供。瑞氏-姬姆萨染液，为珠海贝索公司生产。不含任何抗凝剂的稀释液为mindrayBC-5180 血细胞分析仪配套试剂。按操作规程配制的草酸铵血小板稀释液。

1.3 方法

1.3.1 征得每例诊断EDTA 依赖性血小板减少症患者同意，再次采患者枸橼酸钠、肝素锂抗凝静脉血标本一份，30 ～120 min内在mindrayBC-5180 血细胞分析仪上计数血小板值，所有操作均按操作规程进行。因枸橼酸钠为液体抗凝剂，其抗凝剂与血液之比为1∶9，故细胞计数结果应再1.1 方为准确的结果，本文中所有枸橼酸钠抗凝管结果均为校正后的数值。

1.3.2 采集每例患者末梢血，①用微量吸管取患者末梢指血20 μl 于草酸铵血小板稀释液中，按文献［2］方法，在显微镜下手工计数三次取平均值。②取末梢指血20 μl 加入0.38 μl 中不含任何抗凝剂的mindrayBC-5180 血细胞分析仪配套稀释液中稀释后静置5 min，用mindrayBC-5180 封闭-预稀释模式计数血小板数值。

1.3.3 分别取枸橼酸钠、肝素锂抗凝静脉血、末梢指血制作头、体尾分明合格血涂片一张用瑞氏-姬姆萨染液按照操作步骤染色，显微镜下观察血小板数量、大小、形态、聚集分布情况。

2 结果

2.1 血小板计数结果:EDTA-K2、枸橼酸钠、肝素锂抗凝血、末梢血在血细胞分析仪上计数血小板及手工法计数血小板的五种计数结果见表1。

表1 38 例EDTA 依赖性血小板减少症患者四种方法复检结果

表1 38 例EDTA 依赖性血小板减少症患者四种方法复检结果

注:血小板计数单位为×109/L;与手工法相比，P ＜0.05

例数ED抗TA凝-血K2枸抗橼凝酸血钠肝抗素凝钠血 末梢血 手工法35 36±23 167±51 189±49 186±60 169±52 2 28±6 29±10 158±42 149±40 151±45 1 12 18 13 131 124

2.2 血涂片结果:38 例患者EDTA-K2、枸橼酸钠、肝素锂抗凝血、末梢血血涂片经瑞氏-姬姆萨染液染色后显微镜观察所见结果见表2。

表2 38 例EDTA 依赖性血小板减少症患者血涂片结果

3 讨论

EDTA-K2抗凝原理是与血液中钙离子结合成螯合物，而使钙离子失去凝血作用，从而阻止血液凝固。EDTA-K2作为国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐使用全血细胞分析抗凝剂，它具有对血细胞形态和血小板聚集性影响很小的优点，但任何抗凝剂的使用均可造成血小板的聚集，最常见于EDTA 抗凝剂引起血小板的体外聚集:血小板之间、血小板与白细胞之间相互聚集、堆积和发生卫星现象，导致血细胞计数仪的错误识别而使血小板计数明显减少，发生血小板假性减少和白细胞假性升高的现象，即为EDTA 依赖性血小板减少症(EDTA-dependent pseudothrom bocytopenia，EDTA-PTCP)。引起假性血小板减少的机制是这些个体血浆中存在一种EDTA 依赖性凝集素(通常为IgG)，在体外抗凝情况下能够识别血小板表面抗原(如GPⅡb/Ⅲa)和或中性粒细胞FcγⅢ受体，引起血小板-血小板或血小板-中性粒细胞的聚集［3］。另外，EDTA 能够增加血小板表面电荷防止血小板聚集［4］，血小板抗体的存在可能减少了血小板表面电荷从而削减了EDTA 的抗凝功效从而引起血小板聚集。抗凝剂EDTA-K2引起的血小板聚集不易被溶血素破坏［5］。血小板假性减少现象可见于正常人或其他患者，发生率介于0.09%～0.21%，患者无任何临床出血征象［3］。除引起假性血小板减少症外无其他重要临床意义［6］。当发生EDTA-K2抗凝剂引起血小板假性减少现象时，张之南［3］等认为应该以枸橼酸抗凝血在显微下或用血细胞自动计数仪核实血小板数量。Marshall A.Lichtman［6］等也认为直接取手指血血涂片可更准确地反映血小板的数量或取手指血直接置入370C稀释液后在相差显微镜下进行计数可获得正确数值。也有文献认为可用肝素钠［7］抗凝剂可作血小板计数可以纠正EDTA依赖性血小板假性减少现象。从本文表1 表2 可以看出，38 例EDTA 依赖性血小板减少症患者有35 例可以用枸橼酸钠或肝素钠同时加以纠正，其纠正数值和手工显微镜计数法、末梢血稀释法计数结果相接近，涂片镜检血小板均呈散在分布;2 例用肝素钠能纠正而枸橼酸钠不能纠正，1 例枸橼酸钠和肝素钠均不能纠正，手工显微镜计数法、末梢血稀释法计数结果和肝素钠抗凝血纠正结果相接近而和枸橼酸钠抗凝血不符，血涂片镜检肝素锂抗凝血血小板散在分布而枸橼酸钠抗凝血呈成片聚集;1 例枸橼酸钠、肝素锂均不能纠正，两者纠正结果和手工显微镜计数法、稀释法计数结果不符，血涂片血小板均出现成片聚集。本组实验结果说明大多数EDTA 依赖性血小板减少症患者可以用枸橼酸钠或肝素钠单独加以纠正;对不能枸橼酸钠、肝素钠抗凝剂纠的患者可以采集患者末梢指血直接置于不含任何抗凝剂的稀释液中用血细胞分析仪计数血小板值或用手工显微镜计数法计数血小板值加以纠正。少部分患者对枸橼酸钠、肝素钠抗凝剂发生聚集反应引起血小板假性减少的机理尚不清楚。

在临床检验工作中，检验人员重视镜检、提高工作责任心及加强与临床沟通尤其重要。凡遇到血液分析计数EDTA-K2抗凝标本血小板明显减低与患者临床症状不符、涂片染色镜检发现血小板聚集的标本，一定要及时与临床沟通询问患者病史，可以首先更换枸橼酸钠或肝素钠抗凝标本计数血小板，若遇到不能用枸橼酸钠或肝素钠抗凝标本纠正的患者则可以采集患者末梢指血直接置于不含任何抗凝剂的稀释液中用血细胞分析仪计数血小板或用手工显微镜计数法正确计数血小板。

［1］ 熊立凡，刘成玉.临床检验基础［M］.第4 版.北京:人民卫生出版社:2010:67.

［2］ 叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.第3 版.南京:东南大学出版社，2006:123-124，136.

［3］ 张之南，单渊东，李蓉生，等.协和血液病学［M］.北京:中国协和医科大学出版社，2004，631.

［4］ 周小棉，巫小莉，邓伟雄，等.丁胺卡那霉素抑制和解离抗凝剂依赖的假性血小板聚集作用研究［J］.中华检验医学杂志，2007，30(3):333.

［5］ 朱建奎，张春玲，薛 健.抗凝剂EDTA-K2导致血小板假性减少原因分析［J］.吉林医学，2010，31(33):6018.

［6］ Marshall A.Lichtman，Ernest Beutler，Thomas J.kipps，William J.Williams.译者陈方平，钟美佐，赵谢兰.威廉姆斯血液病学手册［M］.第6 版.湖南:湖南科学技术出版社，2003:424-425.

［7］ 郑 云.三种方法对EDTA-K2 抗凝剂引起血小板假性减少的检测及分析［J］.临床医学工程，2011，18(12):1924.