不同工艺仙人掌提取物对绿壳蛋鸡生产性能及免疫指标的影响

顾文松，Li-Wen Hsu（.镇江天和生物技术有限公司，江苏　扬中　4；.印尼Satwa Boga Sampurna研究所，印尼　雅加达　405）



不同工艺仙人掌提取物对绿壳蛋鸡生产性能及免疫指标的影响

顾文松1，Li-Wen Hsu2
（1.镇江天和生物技术有限公司，江苏扬中212214；2.印尼Satwa Boga Sampurna研究所，印尼雅加达40115）

摘要：为研究不同工艺仙人掌提取物对绿壳蛋鸡生产性能的影响，选取40周龄绿壳蛋鸡7 260只，随机分为3组（处理Ⅰ组、处理Ⅱ组和对照组）。对照组饲喂基础饲粮，处理Ⅰ组在基础饲粮中添加乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物400 mg·kg(-1)，处理Ⅱ组在基础饲粮中添加超临界萃取的仙人掌提取物400 mg·kg(-1)，结果表明，添加不同工艺仙人掌提取物的处理组在产蛋率、平均蛋重、破壳率和绿壳蛋鸡外周血T淋巴细胞转化率与对照组相比均得到显著改善（P<0.05），处理Ⅰ组和处理Ⅱ组的料蛋比与对照组相比差异不显著（P>0.05）；处理Ⅰ组和处理Ⅱ组在产蛋率、平均蛋重、破壳蛋和绿壳蛋鸡外周血T淋巴细胞转化率上差异不显著（P>0.05）。同时发现，不同工艺仙人掌提取物饲喂绿壳蛋鸡能够改善蛋品质。

关键词：仙人掌提取物；绿壳蛋鸡；产蛋率；蛋重；T淋巴细胞

在畜牧生产中，抗生素的长期使用导致有害细菌产生耐药性、动物免疫力下降、畜禽内源性感染和二重感染，给养禽业造成巨大的经济损失。与此同时抗生素在畜禽产品中残留，也严重威胁到人类的健康。因此，具有无毒副作用，无药物残留等优点的饲用抗生素替代品备受关注。中草药与抗生素相比，具有天然性、无抗药性、无残留等特点，因此越来越受人们的重视。乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物具有预防动物疾病、提高免疫力、提高动物生产性能等功效，且无毒负作用[1-3]。但由于工艺复杂，不易于大量生产，限制其使用，而超临界萃取工艺则便于大批量生产。本试验以40周龄绿壳蛋鸡为试验对象，观察不同工艺仙人掌提取物对绿壳蛋鸡生产性能的影响，为仙人掌提取物替代抗生素添加剂提供重要依据，探索出便于大量生产的仙人掌提取工艺。

1　材料与方法

1.1试验动物

40周龄绿壳蛋鸡7 260只，由江苏扬中东风养禽场提供。

1.2试验饲粮

蛋鸡基础日粮组成及营养水平见表1。

表1　饲粮组成及营养水平DM

1.3药物与试剂

1.3.1试验药物

乙醇提取配合乙醚萃取仙人掌提取物：采用新鲜仙人掌通过乙醇提取和乙醚萃取技术制取的干粉；超临界萃取仙人掌提取物：采用新鲜仙人掌通过30 MPa、45℃下用超临界CO2提取的仙人掌干粉[3]。

1.3.2试验试剂

青霉素钠为哈药集团制药总厂产品；硫酸链霉素为华北制药股份有限公司产品；RPMI-1640培养液为Gibco公司产品；新生牛血清为杭州四季青生物材料有限公司产品；伴刀豆球蛋白（ConA）、台盼蓝为Sigma公司分装产品；淋巴细胞分离液为上海华精生物高科技有限公司产品；二甲基亚枫为上海生工生物工程技术服务有限公司产品；PBS稀释液为镇江天和生物技术有限公司实验室配制。

1.4试验方法

1.4.1动物分组及饲养

将绿壳蛋鸡7 260只随机分为3组，处理Ⅰ组为绿壳蛋鸡2 810只，在基础饲粮中添加乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物400 mg·kg-1；处理Ⅱ组为绿壳蛋鸡2 427只，在基础饲粮中添加超临界萃取的仙人掌提取物400 mg·kg-1；对照组为绿壳蛋鸡2 023只，饲喂基础饲粮。试验前鸡舍进行全面清洗、消毒，保证自动饮水器正常，自由饮水，采用16 h光照，按继定免疫程序进行蛋鸡群的免疫，试验期由专人饲养管理，蛋鸡饲喂为2次·d-1（9: 00、16: 00）。绿壳蛋鸡从40周龄开始进行正式试验，1个试验周期为7 d，共4周期28 d。

1.4.2产蛋性能测定

每天记录产蛋数、破壳蛋、总蛋重，每周统计一次采食量，计算日均产蛋率、平均蛋重、采食量及料蛋比。

1.4.3鸡外周血T淋巴细胞活性情况测定

1.4.3.1外周血T淋巴细胞的制备

于添饲后0、7、14、28 d从3组试验鸡群中分别随机抽取鸡10只，通过翅下静脉采集柠檬酸三钠抗凝血2 mL，制备淋巴细胞。用MI-1640培养液（含有青链霉素100单位·mL-1、新生牛血清100 mL·L-1）调整细胞密度至1×106个·mL-1后，转入细胞培养板于37.5℃、体积分数为5%的CO2培养箱中培养48 h。

1.4.3.2外周血T淋巴细胞增殖反应

待上述细胞生长至单层后，去除培养上清液，再用新鲜培养液悬浮细胞，加入ConA（终浓度10 mg·L-1）后，将细胞放入37.5℃、体积分数为5% 的CO2培养箱中继续培养24 h。取出细胞板，每孔加入同体积的MTT液（以RPMI-1640培养液配置），继续培养4 h后，弃去培养孔中的上清液，每孔中加入DMSO 100 uL，充分混匀，于室温避光静置15 min后，测定570 nm波长的吸光值（OD570nm），并计算平均值，作为T淋巴细胞增殖的指标。

2　结果与分析

2.1对绿壳蛋鸡产蛋性能的影响

不同工艺仙人掌提取物对绿壳蛋鸡产蛋性能的影响见表2。

由表2可知，第1周各组间产蛋率差异不显著（P>0.05）。由于试验选择的是40周龄的绿壳蛋鸡，随着周龄的增加，产蛋率呈逐渐下降的趋势，在试验第4周，处理Ⅰ组与处理Ⅱ组相比差异不显著（P>0.05），但处理Ⅰ、Ⅱ组与对照组相比差异显著（P<0.05）。第1周各组间平均蛋重差异不显著（P>0.05），随着试验时间的增加，各处理组平均蛋重没有明显变化，而对照组随着周龄的增加平均蛋重有所下降，在试验第4周处理Ⅰ组与处理Ⅱ组组间差异不显著（P>0.05），但处理Ⅰ、Ⅱ组与对照组相比差异显著（P<0.05）。料蛋比在整个试验期间无显著变化（P>0.05），可能和试验时间较短有关。

2.2对绿壳蛋鸡所产破壳蛋的影响

不同工艺仙人掌提取物对绿壳蛋鸡所产破壳蛋的影响见表3。

表2　不同工艺仙人掌提取物对绿壳蛋鸡产蛋性能的影响

表3　不同工艺仙人掌提取物对绿壳蛋鸡所产破壳蛋的影响

由表3可知，试验第1周各组破蛋率为2.15%～ 2.75%，由于试验选择的是40周龄的绿壳蛋鸡，随着试验周龄的增加，对照组破壳率没有显著变化（P>0.05），而各处理组破壳率呈逐渐下降的趋势，试验第4周各处理组间差异不显著（P>0.05）。

2.3对绿壳蛋鸡外周血T淋巴细胞转化率的影响

不同工艺仙人掌提取物对绿壳蛋鸡外周血T淋巴细胞转化率见表4。

由表4可知，试验第0天蛋鸡外周血T淋巴细胞转化率为0.127～0.131，各组间差异不显著（P> 0.05），第7天处理Ⅰ、Ⅱ组分别比对照组提高了17.97%和27.34%，差异显著（P<0.05），但处理Ⅰ组与处理Ⅱ组间差异不显著（P>0.05）。随着试验时间增加，处理Ⅰ、Ⅱ组的蛋鸡外周血T淋巴细胞转化率上升，而对照组没有明显变化。试验28 d后处理Ⅰ、Ⅱ组与对照组相比有显著提高（P<0.05），分别提高了51.94%和54.26%，但处理Ⅰ组与处理Ⅱ组间差异不显著（P>0.05）。

表4　不同工艺仙人掌提取物对绿壳蛋鸡外周血T淋巴细胞转化率

3　讨　论

3.1对绿壳蛋鸡生产性能的影响

仙人掌除含有各种氨基酸、可溶性糖、有机酸、维生素和各种无机元素外，还含有丰富的生理活性物质如异鼠李素和槲皮素的葡萄糖苷、异槲皮苷和三萜化合物，这些物质能够补充动物的生理需求，提高动物的生产性能[5-6]。本试验表明，不同工艺仙人掌提取物有提高产蛋率和增加蛋重的作用，在试验第4周，对照组产蛋率比乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物组下降3.93%，两组间差异显著（P<0.05）；比超临界萃取仙人掌提取物组下降5.56%，两组间差异显著（P<0.05），但两处理组间差异不显著（P>0.05）；试验第4周平均蛋重为53.46～50.00，处理Ⅰ、Ⅱ组与对照相比组间差异显著（P<0.05），对照组比不同工艺仙人掌提取物组下降6.36%～6.92%，但两处理组间差异不显著（P> 0.05）。

3.2对绿壳蛋鸡所产破壳蛋的影响

添饲仙人掌提取物组破壳蛋率有所下降，而对照组破壳蛋率呈明显上升趋势。

3.3对绿壳蛋鸡外周血T淋巴细胞转化率的影响

仙人掌提取物中含有多种植物多糖及其他有益因子，诱导体内淋巴细胞的增殖和活化，可以增强机体免疫系统发挥免疫应答[7]。临床主要以外周血T淋巴细胞转化率为衡量标准，T淋巴细胞在受到有丝分裂原或抗原刺激时可发生增殖和分化，但对ConA比较敏感，利用这一特性将T细胞在体外经ConA刺激，发生一系列增殖变化，转化为淋巴母细胞[8]。转化率高低可反映机体的免疫功能状态。本试验结果表明，仙人掌提取物作为饲料添加剂添饲0、7、14、28 d后，添饲组蛋鸡T细胞对ConA的增殖效应显著提高（P<0.05），表明机体的免疫水平在添饲期内得到有效提升，并维持在高水平，超临界萃取和乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物有同等的效果。

4　结论

试验结果表明，在基础日粮中添加不同工艺仙人掌提取物400 mg·kg-1，可提高绿壳蛋鸡产蛋率，对绿壳蛋鸡外周血T淋巴细胞转化率的提高也有显著的作用，并可在一定程度上改善蛋鸡健康状况。超临界萃取和乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物有同等的效果。

[参考文献]

[1]顾文松, Hsu L W.仙人掌提取物对蛋鸡产蛋性能、抗氧化能力、免疫功能及血液生化指标的影响[J].中国饲料, 2012（6）: 31-33.

[2]顾文松, Hsu L W,刘建,等.仙人掌提取物对断奶仔猪生产性能、抗氧化能力及免疫功能的影响[J].饲料工业, 2011, 32 （15）: 23-26.

[3]顾文松.仙人掌提取物对肉鸡生产性能尧营养物质利用和肠道微生物区系的影响[J].中国饲料, 2009（21）: 14-16, 21.

[4]顾文松, Hsu L W.仙人掌提取物饲喂大鼠的试验[J].畜牧与兽医, 2013, 45（11）: 44-46.

[5] Saleem R, Ahmad M, Azmat A, et al. Hypotensive activity, toxicol⁃ogy and histopathology of opuntioside-I and methanolic extract of Opuntia dillenii[J]. Biological and Pharmaceutical Bulletin, 2005, 28（10）: 1 844-1 851.

[6] Azmat A, Ahmed M. Pharmacological evidence of hypotensive activity of somina (Herbal drug) in normotensive rats[J]. Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 2014, 13（11）: 1 863-1 866.

[7]季宇彬,汲晨锋,邹翔,等. 2种仙人掌多糖对S180小鼠红细胞免疫功能影响的研究[J].中国中药杂志, 2005, 30（9）: 690-693.

[8]杨敏,李光华.中药对机体的免疫调节及作用机制[J].辽宁中医杂志, 2013, 40（4）: 812-814.

Effect of Different Techniques of the Cactus PE on the Production Performance and Immune Parameters of Blue-shell Chicken

GU Wensong1, HSU Liwen2
（1. Zhenjiang Tianhe Bio-technology Co., Ltd., Yangzhong 212214, Jiangsu China; 2. Satwa Boga Sampurna research Institute, Jakarta 40115, Indonesia）

Abstract:In order to study effect of different techniques of the cactus PE on the production performance of chick⁃en, seven thousand two hundred and sixty chickens (aged 40 weeks) were randomly divided into 3 groups (treatment groupⅠ,Ⅱand the control group). The control group was fed the basal diet；groupⅠwas fed 400 mg·kg(-1)the cactus PE by alcohol extraction and ether extraction which was added into basal diet；groupⅡwas fed 400 mg·kg(-1)the cac⁃tus PE by supercritical fluid extraction which was added into basal diet. The results showed that laying rate, average egg weight, shell-breaking rate and chicken peripheral blood T-lymphocytes in different techniques of treated group have significantly higher than the control group(P<0.05), feed egg ratio in groupⅠandⅡwere not significant com⁃pared with the control group(P>0.05); laying rate, average egg weight, shell-breaking rate and chicken peripheral blood T-lymphocytes conversion rate were not significantly different in groupⅠcompared with groupⅡ(P>0.05). The test also found that egg quality can be improvedindifferent techniques of the cactus PE.

Key words:cactus PE; Blue-shell chicken; laying rate; egg weight; T- lymphocyte

作者简介：顾文松（1980-），男，江苏扬中人，硕士，主要从事草药对畜禽疾病的防控和饲料添加剂的研制。

基金项目：镇江市科技支撑项目（NY2012007）

收稿日期：2015-01-22

中图分类号：S816.7；S831

文献标志码：A

文章编号：1001-0084（2015）05-0006-04