黔南州280例胃镜检查患者幽门螺杆菌感染及抗生素耐药情况*

潘 科， 张人弘， 郑 娟， 张丹丹， 陈峥宏， 王 菲， 魏 刚， 綦廷娜**

(1.黔南州人民医院 消化内科， 贵州 都匀 558000； 2.贵州医科大学 微生物学教研室， 贵州 贵阳 550025)

黔南州280例胃镜检查患者幽门螺杆菌感染及抗生素耐药情况*

潘 科1， 张人弘1， 郑 娟1， 张丹丹1， 陈峥宏2， 王 菲2， 魏 刚2， 綦廷娜2**

(1.黔南州人民医院 消化内科， 贵州 都匀 558000； 2.贵州医科大学 微生物学教研室， 贵州 贵阳 550025)

目的： 了解黔南州280例胃镜检查患者幽门螺杆菌(H.pylori)感染状况及其对抗生素耐药情况。方法: 采集黔南州280例行胃镜检查的上消化道疾病患者胃黏膜组织，采用快速尿素酶法(RUT)诊断H.pylori感染，比较不同民族、性别、疾病类型患者的H.pylori感染率，对RUT试验阳性的胃黏膜组织进行H.pylori微需氧分离培养，以改良琼脂稀释法(界值法)检测各H.pylori临床菌株对阿莫西林、左氧氟沙星、甲硝唑、克拉霉素的敏感性，比较不同民族来源的临床分离株对抗菌药物的耐药率。结果: 280例上消化道疾病患者H.pylori感染率为86.1%(241/281)，不同民族和不同性别上消化道疾病患者H.Pylori感染率差异无统计学意义(P>0.05)；消化性溃疡患者H.Pylori感染率(95.4%)>慢性胃炎患者H.Pylori感染率(84.1%)>胃癌患者H.Pylori感染率(76.9%)，P<0.05；经分离培养获得74株H.pylori，对阿莫西林、左氧氟沙星、甲硝唑、克拉霉素的耐药率分别为5.4%(4/74)、20.3%(15/74)、86.5%(64/74)、29.7%(22/74)；分离自汉族和少数民族患者的H.Pylori对4种抗菌药物的耐药率差异无统计学意义(P>0.05)。结论: 上消化道疾病患者H.pylori感染率较高，H.Pylori对甲硝唑和克拉霉素耐药率较高，对阿莫西林和左氧氟沙星耐药率较低。

螺杆菌，幽门； 感染； 抗生素类； 耐药性

幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)感染与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌以及胃黏膜相关恶性淋巴瘤的发生密切相关。H.pylori流行情况呈全球分布状态，感染人数超全球人口总数的1/2[1]。不同国家和地区报道的H.pylori感染率不尽相同，常常随该地区经济发展状况、居住条件、生活饮食习惯、人口密度等社会环境和经济因素而变化[2]。H.pylori根除治疗可以促进溃疡的愈合、降低胃癌的发病率，目前H.pylori根除方案中抗菌药物组成方案有4种：(1)阿莫西林及克拉霉素，(2)阿莫西林及左氧氟沙星，(3)阿莫西林及呋喃唑酮，(4)四环素及甲硝唑或呋喃唑酮[3]。随着这些药物在各种感染性疾病治疗中的广泛应用，H.pylori耐药菌株不断增加，已成为影响H.Pylori根除率的严重问题。了解地区性H.pylori感染及耐药情况，有利于掌握当地的H.pylori流行情况并指导临床选择合适的治疗方案以提高根除率。本研究采用快速尿素酶法(rapid urease testing，RUT)检测了黔南州280例少数民族和汉族上消化道疾病患者胃黏膜组织H.pylori感染情况，并进行了H.pylori临床菌株的微需氧分离培养及药物敏感性试验，报告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 质控菌株H.pylori菌株NCTC l l637，获赠于中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，贵州医科大学微生物学教研室保存。

1.1.2 试剂 快速尿素酶试纸(珠海市克迪科技开发有限责任公司)，哥伦比亚培养基(青岛高科园海博生物技术有限公司)，MH培养基(杭州天和微生物试剂有限公司)，脱纤维绵羊血(采自贵州医科大学实验动物中心)，幽门螺杆菌添加剂(英国，OXOID)，微需氧产气袋(日本，三菱化学株式会社)，厌氧罐(日本，三菱化学株式会社)，H.pylori转送液(100 g/L蔗糖+50%小牛血清)，左氧氟沙星(中国食品药品检定研究院，批号130455-201106)，克拉霉素(中国食品药品检定研究所130558-200902)，阿莫西林(中国食品药品检定研究院，批号130409-201011)，甲硝唑(中国食品药品检定研究院，批号100191-200606)。

1.1.3H.pylori16SrDNA特异性引物 采用文献[4]引物，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，上游引物5′-CTTGCTA GAGT GCTGAT TA-3′，下游引物5′-TCCCACACTCTA GAATA GT-3′，扩增目的片段长度为550 bp。

1.2 方法

1.2.1H.pylori感染的诊断 2013年8月～2014年8月，于胃镜下采集黔南州人民医院消化科胃镜室行胃镜检查的280名上消化道疾病患者的胃窦和胃体处胃黏膜组织各一块，采用RUT法检测H.pylori，取少量胃黏膜组织块置于快速尿素酶试纸内，1～3 min内观察试纸呈樱红色，判断为试验阳性。

1.2.2H.pylori的分离培养和鉴定 取RUT试验阳性的胃黏膜组织浸渍于H.pylori转送液，置厌氧罐中微需氧条件下迅速运送至实验室剪碎后接种于含有H.pylori选择性添加剂的哥伦比亚血琼脂培养基中，37 ℃微需氧条件下培养4～5 d。将疑似菌株经革兰染色初步鉴定后划线分离培养，挑取单菌落传代培养并经革兰染色、快速尿素酶试验和H.pylori16S rDNA特异性PCR扩增进行鉴定。将阳性菌株保存于脱纤维绵羊血中，-80 ℃保存备用。

1.2.3 药物敏感性试验 参照文献[5]中的美国临床实验标准化委员会推荐的改良琼脂稀释法检测H.pylori对阿莫西林、左氧氟沙星、甲硝唑、克拉霉素的敏感性。取2 μL待检H.pylori菌液分别点种在各含药MH血琼脂平板中(克拉霉素、阿莫西林、左氧氟沙星终浓度为1 mg/L，甲硝唑终浓度为8 mg/L)微需氧培养4 d后观察，若接种点有细菌生长判为耐药。实验均重复两次，以NCTC l l637作为质控菌株。

1.3 观察指标

观察280例上消化道疾病患者H.pylori感染率，比较不同民族、性别、疾病类型患者的H.pylori感染率，观察各H.pylori临床菌株对阿莫西林、左氧氟沙星、甲硝唑、克拉霉素的敏感性，比较不同民族来源的临床分离株对抗菌药物的耐药率。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0软件进行统计分析，对不同民族、性别和疾病类型患者的H.pylori感染率以及不同民族来源临床分离菌株的耐药率比较用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1H.pylori感染率

280例上消化道疾病患者H.Pylori感染率为86.1%(241/280)，不同民族和不同性别患者H.Pylori感染率差异无统计学意义(P>0.05)，见表1和表2。不同疾病类型患者H.Pylori感染率比较，消化性溃疡患者H.Pylori感染率(95.4%)>慢性胃炎患者H.Pylori感染率(84.1%)>胃癌患者H.Pylori感染率(76.9%)，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

2. 2H.pylori分离培养和鉴定

280例临床标本经分离培养，共得到微需氧生长、革兰染色阴性螺杆菌、快速尿素酶试验阳性及16S rDNA鉴定阳性的H.pylori共74株。

2.3 药物敏感性试验

74株临床分离H.Pylori对阿莫西林、左氧氟沙星、甲硝唑、克拉霉素的耐药率分别为5.4%(4/74)、20.3%(15/74)、86.5%(64/74)、29.7%(22/74)，分离自少数民族与汉族患者的H.Pylori对4种抗生素耐药率差异无统计学意义(P>0.05)，见表4。

表1 不同民族上消化道疾病患者胃黏膜H. Pylori感染率

表2 不同性别上消化道疾病患者胃黏膜H. Pylori感染率

表3 不同类型上消化道疾病患者胃黏膜H. Pylori感染率

表4 不同民族患者H. Pylori菌株药物敏感性试验结果

3 讨论

我国H.pylori感染率较欧美等发达国家偏高，成人感染率达到42.0%～84.6%，各地区报道数据不尽相同[6]。本研究结果显示黔南州医院上消化道疾病患者H.pylori感染率为86.1%，与董秋萍等[7]报道的83.23%基本相符，处于国内较高水平。黄频等[8]报道男性上消化道疾病患者H.pylori感染率高于女性患者，而本研究中上消化道患者的H.pylori感染率却无性别差异。本研究中也未显示出H.pylori感染率的民族差异，可能与两类人群混杂聚居、生活饮食习惯逐渐同化等因素有关。H.pylori感染后可通过诱发机体产生局部炎症反应，诱导黏膜上皮组织增生与异常凋亡，调节癌基因与抑癌基因，并产生尿素酶、空泡毒素等致病因子引发慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌及胃黏膜相关恶性淋巴瘤等疾病[9]，本研究显示280例上消化道疾病患者中消化性溃疡患者的H.pylori感染率最高(95.4%)，而胃癌患者感染率最低(76.9%)。这与李雪梅等[10]报道的胃癌组患者H.pylori感染率高于其他上消化道疾病组不一致，可能与近年来社会环境或饮食习惯等非幽门螺杆菌感染因素(如吸烟、饮酒)导致胃癌所占比重升高有关[11]。本研究资料显示3种疾病类型的患者H.pylori感染率均高于75%，提示H.pylori感染是导致本地区上消化道疾病尤其是消化性溃疡的重要因素，有必要对这些患者实施有效的H.pylori根除治疗以促进溃疡的愈合、降低胃癌的发病率。

然而，随着临床上抗生素的广泛使用，使得H.pylori对抗生素的耐药问题日益突出。H.pylori耐药率在不同国家和地区不尽相同。了解地区性H.Pylori菌株耐药率变化趋势有助于该地区选择合适的抗生素进行根除治疗及采取有效的应对措施以提高H.Pylori根除率。

甲硝唑属硝基咪唑类药物，其在胃内的作用不受胃酸的影响，具有高稳定性和高活性，且价格便宜，往往被作为治疗H.Pylori感染的首选药物之一。但由于甲硝唑的广泛使用，尤其在口腔疾病和妇科疾病中的广泛使用，导致国内外普遍报道H.Pylori耐药菌株正日益增多。Francis Mégraud等[5]报道，H.pylori对甲硝唑的耐药率为20%～80%(平均30%～40%)，杨天敢等[12]报道浙江省台州地区甲硝唑耐药率高于93%。本研究分离的74株Hp对甲硝唑的耐药率高达86.5%，高于刘苓等[13]报道的临近地区贵阳H.pylori甲硝唑耐药率63.33%，提示本地区H.pylori对甲硝唑的耐药率已达到较高水平，应引起临床的注意。克拉霉素属大环内酯类抗生素，具有耐酸、能溶解于低pH胃液中的特性，口服后生物利用度好，不良反应少，被认为是H.pylori根除治疗方案中最有效的抗生素。因其价格偏高，十年前在中国并不常将其用于H.pylori的根除治疗。随着人民生活水平和经济状况的改善，克拉霉素在临床上的应用也越来越广泛，导致了H.pylori对克拉霉素的耐药率呈现出增高趋势。其耐药机制与H.Pylori23SrRNA V区基因突变使克拉霉素与细菌核糖体50S亚基结合能力降低有关[14]。本文结果显示黔南州医院分离到的H.pylori菌株对克拉霉素的耐药率达到了29.7%，与贵阳地区33.33%的耐药率接近，明显高于原素梅等[15]报道的7.4%及杜军等[16]报道的9.17%耐药率。根据第四次全国处理共识报告意见，当克拉霉素耐药率高于15%～20%时，则不宜再选用含有甲硝唑或克拉霉素的标准三联疗法作为根除H.pylori的一线方案，而推荐铋剂四联疗法作为一线治疗方案。阿莫西林、左氧氟沙星因其耐药率低可作为根除H.pylori的主要抗生素[3,17]。本研究中H.Pylori对左氧氟沙星的耐药率为20.3%，低于对甲硝唑和克拉霉素的耐药率。综合上述耐药资料，在本地区行H.Pylori根除治疗时可优先选用阿莫西林，遇到克拉霉素和甲硝唑耐药菌株时可选用左氧氟沙星，如能根据药敏试验结果选用2种敏感抗生素配合质子泵抑制剂及铋剂进行治疗更利于根除H.Pylori。

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(2015-05-20收稿，2015-06-30修回)

中文编辑： 周 凌； 英文编辑： 刘 华

Prevalence and Antibiotic Resistance ofHelicobacterpyloriIsolated from 280 Patients Accepting Gastroscopy in Qiannan Autonomous Prefecture

PAN Ke1, ZHANG Renhong1, ZHENG Juan1, ZHANG Dandan1, CHEN Zhenghong2, WANG Fei2, WEI Gang2, QI Tingna2

(1.DepartmentofGastrointestinalMedicine,People'sHospitalofQiannanAutonomousPrefecture,Duyun558000,Guizhou,China; 2.DepartmentofMicrobiology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550025,Guizhou,China)

Objective: To investigate infection situation and antibiotic resistance ofHelicobacterpyloriisolated from 280 patients undergoing gastroscopy in Qiannan autonomous prefecture. Methods: A total of 280 patients undergoing gastroscopy in Qiannan autonomous prefecture were enrolled in this study. Gastric mucosal specimens were collected and rapid urease testing(RUT)was used to diagnoseH.pyloriinfection.H.pyloriinfection rates of different nationality, different sex and different disease type were compared. The positive gastric mucosa tissue in RUT test underwent microaerophilic isolation and culture. Modified agar dilution method was adopted to detect antibiotic susceptibility of clinlicalH.pyloristrains to amoxicillin, levofloxacin, metronidazole and clarithromycin, and antibiotic resistance rates of clinlicalH.pyloristrains of different nationality were compared. Results: Among 280 patients with disease of upper digestive tract,H.pyloriinfection rate was 86.1% (241/280). There were no statistically significant differences ofH.pyloriinfection rate in different nationality and genderP>0.05).H.Pyloriinfection rate of patients with peptic ulcer was highest (95.4%), followed by chronic gastritis (84.1%) and gastric cancer (76.9%),P<0.05. 74H.pyloriisolates were obtained by microaerophilic culture. The resistance rate of 74H.pyloriisolates to amoxicillin, levofloxacin, metronidazole and clarithromycin was 5.4% (4/74), 20.3% (15/74), 86.5% (64/74), 29.7% (22/74), respectively and there were no statistically significant differences between Han and minority patients (P>0.05). Conclusion:H.pyloriwas the major factor that contributes to upper gastrointestinal diseases occuring in the people's hospital of Qiannan autonomous prefecture. The resistance rates ofH.pylorito metronidazole and clarithromycin were higher compared with amoxicillin and levofloxacin .

Helicobacterpylori; infection; antibiotics; drug resistance

国家自然科学基金(81460314)； 贵州省科技厅-贵阳医学院联合基金[黔科合LG字(2012)010]

时间：2015-08-07

http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20150807.2252.026.html

R378；R573

A

1000-2707(2015)09-0930-05

**通信作者 E-mail:qitingna77@163.com