ESBLs、SSBL 的检测及临床应用

杜安玲

ESBLs、SSBL 的检测及临床应用

杜安玲

目的 了解对头孢噻肟耐药的大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、超超广谱β-内酰胺酶(SSBL)的临床分布及其对抗生素的敏感性。方法 利用双纸片协同试验及纸片法确证试验检测ESBLs及SSBL, 并用纸片扩散试验和DL-96E测定抗生素的敏感性。结果 从头孢噻肟最小抑菌浓度(MIC)≥2的大肠埃希菌检出产ESBLs为62.5%；产SSBL为9.4%。产酶菌株对头孢菌素高度耐药,对氨曲南、庆大霉素、环丙沙星及复方新诺明耐药率高, 对亚胺培南、美罗培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦耐药率低。结论 产生ESBLs、SSBL是大肠埃希菌对头孢菌素类抗生素耐药的重要机制, 实验室应加强检测, 为临床合理使用抗生素提供依据。

抗生素；超广谱β-内酰胺酶；超超广谱β-内酰胺酶；耐药性检测

近年来发现大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素耐药率升高的主要原因是细菌产生了ESBLs、SSBL和AmpC酶［1,2］,大肠埃希菌主要引起呼吸道、尿路系统、伤口等部位感染,是重要的医院感染常见条件病原菌。为了解大肠埃希菌产ESBLs、SSBL在本所的分布情况, 正确理解细菌的不同耐药机制, 掌握细菌耐药率的变化, 为临床合理使用抗生素提供依据。本试验从临床住院患者分离的对头孢噻肟≥2的大肠埃希菌进行检测ESBLs、SSBL酶, 现报告如下。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 选取本所2013年6月～2014年12月分离的菌株, 选择对头孢噻肟MIC≥2的大埃埃希菌160株。样本主要来自痰、中段尿、胸腹水等。细菌鉴定为珠海迪尔DL-96细菌鉴定仪。

1.2 药敏试验 抗生素药敏稀释板(DL-96E)购自珠海迪尔公司。质控菌为大肠埃希菌ATCC25922。结果按2012年临床和实验室标准协会(CLSI)标准进行判读。

1.3 超广谱β-内酰胺酶检测 双纸片协同试验及采用2012年CLSI推荐的初筛及确证试验［3］。取头孢西丁纸片抑菌环直径≤18 mm的菌株, 转种至胰酶大豆消化液中, 将生长至对数期的细菌培养物离心后, 取沉淀部分的菌细胞经反复冻融(-70℃及37℃交替水浴5次)制备酶的粗提物。按标准药敏纸片扩散法在M-H琼脂平板上涂布大肠埃希菌ATCC25922, 在平板中央放置30 mg的头孢西丁纸片, 在距纸片边沿5 mm处开使用无菌刀片向外呈放射状挖一约20 mm × 2 mm的细槽, 将酶的粗提物加入细槽中, 于35℃培养过夜。表面细菌在细槽和头孢西丁的抑菌环之间出现细菌生长为阳性, 证明所测菌产生SSBL酶。

2 结果

2.1 ESBLs、SSBL的检测结果分析 当头孢噻肟MIC=2、4、8、32时, 大肠埃希菌检出产ESBLs比率分别为3.8%(6/160)、6.3%(10/160)、40.6%(65/160)、11.9%(19/160)；当头孢噻肟MIC=2、4、8、32时, 大肠埃希菌检出产SSBL比率分别为0、0、6.9%(11/160)、2.5%(4/160)。见表1。

表1 产ESBLs、SSBL大肠埃希菌与头孢噻肟MIC检出关系(n)

2.2 产ESBLs、SSBL大肠埃希对常用抗生素的敏感性 对亚胺培南敏感(100.0%)、美罗培南敏感(100.0%)、哌拉西林/他唑巴坦敏感(93.1%)、阿米卡星敏感(91.3%)、头孢哌酮/舒巴坦敏感(78.8%)。产ESBLs大肠埃希菌对头孢菌素类、单酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类和复方新诺明抗生素高度耐药, 仅部分菌株体外试验显示对四代头孢吡肟敏感。

3 讨论

由于广谱三代、四代头孢菌素在临床的广泛应用、患者免疫力下降及基础疾病的增多, 细菌的耐药率亦不断增加, ESBLs和SSBL酶的产生则是目前认为大肠埃希菌对三代、四代头孢菌素耐药的主要机制。ESBLs大多数由TEM-1、TEM-2及SHV-1发生突变的衍生物, 能水解青霉素类、头孢菌素类及单酰胺类, 能被克拉维酸等酶抑制剂所抑制, 对头霉素及碳青霉烯类敏感, 多由质粒传递, 导致大肠埃希菌对三代头孢菌素及酶抑制剂的耐受［4］, 以CTX型ESBLs占多数［5,6］。

本试验中, 大肠埃希菌检出产ESBLs、SSBL的比率分别为62.5%和9.4%, 表明大肠埃希菌对三代头孢菌素耐药的主要原因是产生ESBLs、SSBL, 大肠埃希菌对头孢菌素类、喹诺酮类和单酰胺类抗生素高度耐药, 对庆大霉素及复方新诺明耐药率也较高, 而对头孢哌酮/舒巴坦敏感(78.8%), 阿米卡星敏感(91.3%), 哌拉西林/他唑巴坦敏感(93.1%), 尚未发现对亚胺培南、美罗培南耐药菌株。同时用头孢噻肟、头孢他啶和头孢噻肟/克拉维酸、头孢他啶/克拉维酸检测ESBLs, 能起到互补作用, 能提高ESBLs的检出率。结果显示头孢噻肟MIC值越大产ESBLs、SSBL率越高。

美国国家临床标准化委员会认为产ESBLs、SSBL者, 虽体外测定对头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟等头孢菌素敏感,但体内疗效差, 实验室应报告耐药。本试验中部分产ESBLs菌株显示对头孢他啶、头孢吡肟体外敏感, 由于体内疗效不好, 应视为耐药。因此, 实验室应积极开展对产酶菌的检测,正确区分ESBLs和SSBL不仅是细菌耐药监测的需要, 更具有分子流行病学意义, 而且对了解细菌耐药机制, 合理选择抗生素、为临床合理使用抗生素提供重要依据和一定的指导作用。

［1］ 王辉, 刘颖梅, 王清涛.北京发现同时产DHA-1质粒AmpC型XRX-M型超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌.中华微生物学和免疫学杂志, 2005, 25(5):419-422.

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［3］ Bret L, Claris CC, Sitot D, et al.Chromosomally encoded AmpC-type b-Lactamase in a clinical isolate of Proteus mirabilis.Antimicrob Agents Chemother, 2005, 42(5):1110-1114.

［4］ 凌宙贵, 刘滨, 刘卫, 等.产ESBLs动态监测及耐药性分析.中华医院感染学杂志, 2014, 24(17):4174-4176.

［5］ 张虎, 闫中强, 曹晋桂, 等.医院感染肺炎克雷伯菌耐药趋势及b-内酰胺酶基因分型分析.中华医院感染学杂志, 2014, 24(21):5207-5209.

［6］ 常燕子, 李巧云, 裘莉佩, 等.质粒介导的喹诺酮类耐药基因在社区泌尿系感染大肠埃希菌中的分布.中国卫生检验杂志, 2010, 5(20):1092-1094.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.24.102

2015-04-23］

455000 安阳市结核病防治所