气相-内标法测定白兰地中甲醇、乙酸乙酯、糠醛和高级醇

2015-05-07莫燕霞殷居易顾晓俊陈梅珍何卫敏吴维儿

食品研究与开发 2015年21期

莫燕霞，殷居易，顾晓俊，陈梅珍，何卫敏，吴维儿

（宁波出入境检验检疫局，浙江宁波315800）

白兰地是以葡萄为原料，经发酵、蒸馏、橡木桶陈酿、调配而成的蒸馏酒。除了水和乙醇外，还含有酸类、酯类、醛类、醇类等多种风味化合物。白兰地在其蒸酒过程中极易产生多余甲醇，甲醇是一种无色、有酒精气味、易挥发的液体，超量对人体具有较强毒性作用，主要表现在损伤视力，严重者双目失明，甚至致人死亡。我国对白兰地中甲醇有着严格要求：GB2757-2012《食品安全国家标准蒸馏酒及其配制酒》[1]规定甲醇≤2.0 g/L，因此对白兰地中甲醇的准确测定和质量控制显得至关重要。酯类、醛类、糠醛和高级醇等在白兰地理化检测中是非常重要的指标，与白兰地品质有着直接的联系。白兰地在贮存陈酿过程中萃取橡木桶中的香气成分（酯类、醛类等），使得各种成分相互协调融合，形成白兰地的特征香气。

目前白兰地（蒸馏酒）中甲醇的检测方法主要采用GB/T 5009.48-2003《蒸馏酒和配制酒卫生标准分析方法》[2]规定的外标法，分析结果的准确度和精密度与进样量有密切关系，进样技术的好坏直接影响测定结果的准确性。GB/T 11856-2008《白兰地》[3]规定白兰地酯类（以乙酸乙酯计）用滴定法测定，操作复杂且滴定终点不易判断；测定糠醛和高级醇时使用不同的内标物，需要单独分析，费时费力；且采用单点测试，增加了试验误差。本研究以甲基异丁基甲醇作为内标，采用内标标准曲线法，毛细管柱-氢焰离子化检测器同时测定白兰地中甲醇、乙酸乙酯、糠醛、高级醇（正丙醇+异戊醇+异丁醇+正丁醇+仲丁醇）含量，与外标法和滴定法等方法比较，具有快速高效、准确度高、重现性好、不受进样误差影响等优点。

1 材料与方法

1.1 仪器

7890气相色谱仪配置氢焰离子化检测器、色谱柱，Agilent CP-Wax 57（50 m ×250 μm，0.2 μm）：美国安捷伦；梅特勒-托利多XS204（分度值0.1 mg）电子天平：瑞士 Mettler。

1.2 试剂

甲醇、乙酸乙酯、糠醛、正丙醇、异戊醇、异丁醇、正丁醇、仲丁醇、甲基异丁基甲醇（内标）；无水乙醇：色谱纯；水：超纯水。

1.3 色谱条件

进样口温度：220℃，检测器（FID）温度：300℃，氢气流量：60 mL/min；空气流量：400 mL/min；尾吹氮气流量：25 mL/min；柱温：起始温度 40 ℃，保持 2 min，以6℃/min上升到180℃，保持2 min后运行：200℃保持3 min。

1.4 方法

1.4.1 标准溶液配制

各组分标准储备液：吸取甲醇、乙酸乙酯、糠醛、正丙醇、异戊醇、异丁醇、正丁醇、仲丁醇色谱纯各200 μL，分别置于10 mL容量瓶中，用电子天平准确称量，用40%（体积分数）乙醇溶液定容，计算质量浓度，得到各个组分的单一标准品储备液，于冰箱保存。

内标溶液：吸取甲基异丁基甲醇内标液200 μL，置于10 mL容量瓶中，用电子天平准确称量，用40%（体积分数）乙醇溶液定容，计算其质量浓度，于冰箱保存。

1.5 标准曲线的建立

依次准确吸取各组分标准储备液0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0 mL于100 mL容量瓶中，用40%（体积分数）乙醇溶液定容，计算各组分质量浓度，得到6个不同浓度的混合标准使用溶液。

准确吸取上述混合标准使用溶液各10 mL于25 mL比色管中，依次加入0.1 mL甲基异丁基甲醇内标溶液，摇匀。取该系列标准溶液，根据1.3项所述色谱条件，平行测定3次，每次进样1 μL，以各组分与内标浓度比为横坐标，各组分与内标峰面积比为纵坐标绘制各组分标准曲线，建立校正表，在气相色谱化学工作站里自动完成上述分析过程。

1.6 样品的测定

准确吸取样品10 mL于25 mL比色管中，加入0.1 mL甲基异丁基甲醇内标溶液，摇匀。根据1.3项所述色谱条件，进样1 μL，测得样品色谱图，由气相色谱化学工作站自动进行分析。

2 结果与讨论

2.1 色谱分离情况

按1.3方法进行试验，得到标准溶液和白兰地样品的色谱图，如图1所示。

图1 各组分的色谱图（a.标样；b.白兰地）Fig.1 Chromatogram of components

2.2 标准曲线和线性范围

根据1.3操作条件，将标准系列溶液依次进样，分别得到8种组分的线性范围、回归方程及相关系数，结果见表1。

2.3 方法重复性

准确吸取1.4项下所配置的混合各组分标准储备液一定体积于100 mL容量瓶中，用40%（体积分数）乙醇溶液定容，计算组分质量浓度，得到单一浓度的混合标准使用溶液，吸取上述溶液10 mL于25 mL比色管中，加入0.1 mL内标溶液，摇匀。同时准确吸取样品10 mL和适量标准溶液于25 mL比色管中，加入0.1 mL内标溶液，摇匀，配制成供试品溶液。取上述两份溶液，在本试验所选用的色谱条件下连续进样6次，每次进样1 μL，进行测定，结果见表2。标准品中各组分峰面积的RSD均小于3.0%，样品中各组分峰面积的RSD均小于4.0%，说明方法的精密度良好，满足测定要求。