同型半胱氨酸及代谢酶基因遗传多态性、叶酸和维生素B12与溃疡性结肠炎的相关性

陈少文 吴东海 吉明柱

同型半胱氨酸及代谢酶基因遗传多态性、叶酸和维生素B12与溃疡性结肠炎的相关性

陈少文 吴东海 吉明柱

目的 观察同型半胱氨酸(Hcy)及代谢酶基因遗传多态性、叶酸和维生素B12与溃疡性结肠炎(UC)之间的关系。方法 100例UC患者作为临床研究对象, 并将其作为研究组, 另选同期行体检的100例健康人员作为对照组。观察两组的Hcy、甲硫氨酸合成酶(MS)和亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的基因多态性、叶酸及维生素B12水平。结果 治疗前研究组患者的Hcy水平明显高于对照组, 叶酸和维生素B12水平明显低于对照组, 治疗后研究组的Hcy水平明显低于对照组, 叶酸和维生素B12水平明显高于对照组, 差异均有统计学意义(P＜0.05)。两组MS和MTHFR基因频率和等位基因频率比较, 差异均有统计学意义(P＜0.05)。经Logistic回归分析可得, UC患者的Hcy水平和维生素B12、叶酸、MS和MTHFR等因素之间有明显的相关性(P＜0.05)。结论 UC与Hcy及代谢酶基因多态性、叶酸、维生素B12之间有着密切的联系。

溃疡性结肠炎；同型半胱氨酸；代谢酶基因遗传多态性；叶酸；维生素B12

为了观察Hcy在UC发病机制中的作用, 本次研究选取2012年10月～2014年10月深圳市大鹏新区南澳人民医院、深圳市第二人民医院、深圳市蛇口人民医院收治的100例UC患者作为临床研究对象, 对其临床资料进行回顾性分析,现总结如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本次研究选取2012年10月～2014年10月深圳市大鹏新区南澳人民医院、深圳市第二人民医院、深圳市蛇口人民医院收治的100例UC患者作为临床研究对象, 并将其作为研究组, 所有患者均经病理检查和内镜检查明确诊断［1］, 且均已排除具有慢性肝炎、糖尿病及其他癌症疾病的患者, 其中男58例, 女42例；年龄51～79岁, 平均年龄(61.37±8.24)岁。另选同期于三家医院进行体检的100例健康体检人员作为对照组, 其中男54例, 女46例；年龄54～82岁, 平均年龄(67.53±6.87)岁。两组性别和年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 两组均于清晨空腹状态下抽取5 ml外周血作为血液标本, 给予肝素进行抗凝, 放置于低温环境下, 以2500 r/min的速度进行10 min的离心, 然后取上清液待测。使用北京九强公司提供的Hcy试剂, 通过循环酶法［2］对Hcy的浓度进行测定；采用Waters公司产出的高效液相色谱仪器和德国拜耳公司提供的维生素B12试剂, 通过放射免疫法对叶酸和维生素B12进行测定。研究组患者在治疗结束之后根据以上方法对相应的指标进行检测, 注意试验的所有步骤均严格遵循仪器和试剂的说明书进行操作。通过RT-PCR方法［3］对MS和MTHFR的基因多态性进行测定, 具体方法为：清晨空腹状态抽取5 ml外周血, 提取DNA后采用紫外分光光度仪对其浓度进行检测。试验中采用德国QIAGEN公司生产的RT-PCR试剂盒和引物合成, 南京诺唯赞生物科技有限公司生产的总蛋白提取试剂盒, 深圳华因康基因科技有限公司生产的PCR仪；MS：A2756G引物序列：上游：5c-CATGAAGAATATGAAGATATTAGA-3c, 下游：5c-GAAC TAGAAGAGAGAAATTCTCTA-3c；MTHFR：C677T引物序列：上游：5c-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3c, 下游：5c-AGGACGGTCCGTGAGGTC-3c；分别进行2 min的91℃变性和预变性, 给予1 min的56℃退火, 45 s的74℃30个循环, 5 min 72℃、12 h 4℃, 将cDNA的产物放在-20℃的环境下进行保存。分析利用3%浓度的琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物。

1.3 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示, 采用t检验；计数资料采用χ2检验；多因素采用Logistic回归分析。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组Hcy、维生素B12及叶酸水平对比 治疗前研究组患者的Hcy水平明显高于对照组, 叶酸和维生素B12水平明显低于对照组, 差异均有统计学意义(P＜0.05)。治疗后研究组的Hcy水平明显低于对照组, 叶酸和维生素B12水平明显高于对照组, 差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2.2 两组MS和MTHFR基因频率和等位基因频率对比 两组MS和MTHFR基因频率和等位基因频率比较, 差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表1 两组Hcy、维生素B12及叶酸水平对比( x-±s)

表2 两组MS和MTHFR基因频率和等位基因频率对比［n(%)］

2.3 Logistic回归分析 将患者的Hcy水平作为因变量, 维生素B12、叶酸、MS和MTHFR等作为自变量, 采用Logistic回归分析对研究组患者的各项指标进行分析得出, Hcy水平和维生素B12、叶酸、MS和MTHFR等因素之间有明显的相关性(P＜0.05)。

3 讨论

溃疡性结肠炎简称溃结, 是临床上一种侵及结肠和直肠的慢性非特异性炎症, 其炎性病变会对结肠黏膜和黏膜下层造成损伤, 通常主要位于乙状结肠与直肠上, 甚至也可以蔓延至整个结肠上［4］。目前, 临床上对于UC的发病机制尚未明确, 其具有病程漫长、易反复发作等特点。Hcy是一种具有非常高的生物活性的分子, 其实质上是甲硫氨酸代谢的中间产物, 能够通过诱导机体中的氧化应激反应而加快炎性反应的进程, 并且还可以引发内质网的应激反应而使机体长期维持在肠黏膜上皮炎症状态中, 同时Hcy还能够对肠黏膜和肠道菌群间的相互作用进行调节［5］。目前, 相关学者对于Hcy及代谢酶基因多态性和UC之间的关系越来越重视。本次研究结果显示, 研究组治疗后的Hcy水平降低, 叶酸、维生素B12水平上升, UC患者Hcy水平的降低和叶酸、维生素B12之间呈负相关性, 当免疫力降低时, 叶酸、维生素B12水平会降低, 导致Hcy出现堆积现象［6］。此外, 两组MS和MTHFR基因频率和等位基因频率比较, 差异均有统计学意义(P＜0.05)。这表明Hcy代谢的基因多态性会对其自身活性造成影响。而经Logistic回归分析显示, UC患者的Hcy水平和维生素B12、叶酸、MS和MTHFR等因素之间有明显的相关性(P＜0.05)。这表明在UC治疗时增加患者的叶酸和维生素B12水平有助于降低Hcy水平。

综上所述, UC与Hcy及代谢酶基因多态性、叶酸、维生素B12之间有着密切的联系。

［1］ 阿衣努尔·买提斯迪克, 吾尔古丽·阿卜杜来海提, 哈木拉提·吾甫尔, 等.129例溃疡性结肠炎患者维医异常体液分型的量化诊断入选项专家咨询研究.科技导报, 2013, 31(36):64-70.

［2］ 刘维新, 张绅, 任益, 等.溃疡性结肠炎及溃疡性结肠炎相关性结直肠癌小鼠模型中血管生成因子的表达及其与血管新生的关系.中国医科大学学报, 2013, 42(3):231-234, 266.

［3］ 刘树利, 常桂琴, 郭丽琴, 等.血清同型半胱氨酸与抗中性粒细胞胞质抗体对溃疡性结肠炎的诊断意义.重庆医学, 2014, 33(23):3069-3070.

［4］ 王敬军.溃疡性结肠炎患者血清同型半胱氨酸的检测及其临床意义.医学理论与实践, 2014, 19(20):2773-2774.

［5］ 蒋益, 赵杰, 徐昌隆, 等.亚甲基四氢叶酸还原酶G1793A基因多态性及高同型半胱氨酸血症与溃疡性结肠炎的相关性.中华内科杂志, 2010, 49(8):675-679.

［6］ 周旭军, 关秀军.溃疡性结肠炎患者血清同型半胱氨酸与叶酸和维生素B12的相关性研究.北京医学, 2015, 25(2):175-176.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.14.017

2015-04-01］

深圳市宝安区科技局(项目编号：2013241)

518121 深圳市大鹏新区南澳人民医院内科

(陈少文)；深圳市第二人民医院消化内科(吴东海)；深圳市南山区蛇口人民医院消化内科(吉明柱)