盘状结构域受体2在前列腺癌组织标本中的表达及临床意义

许妍妮，张 键，李 婧，张 燕

(1.西安交通大学第一附属医院转化医学中心, 陕西西安 710061；2.西安交通大学医学部地方病研究所，环境与疾病相关基因教育部重点实验室，陕西西安 710061)

·临床研究·

盘状结构域受体2在前列腺癌组织标本中的表达及临床意义

许妍妮1,2，张 键1，李 婧1，张 燕1

(1.西安交通大学第一附属医院转化医学中心, 陕西西安 710061；2.西安交通大学医学部地方病研究所，环境与疾病相关基因教育部重点实验室，陕西西安 710061)

目的 探讨盘状结构域受体2(DDR2)蛋白在前列腺癌组织标本中的表达，分析其与其临床病理特征的关系，初步明确DDR2在前列腺中的作用，为探寻新的治疗靶点提供基础。方法 采用免疫组化检测46例前列腺癌和18例良性前列腺增生组织标本中DDR2的表达情况。结果 前列腺癌组织的DDR2阳性表达率(82.61%)明显高于良性前列腺增生组织的DDR2的阳性表达率(11.11%，P<0.05)。Gleason 5～7分组和8～10分组前列腺癌组织的DDR2阳性表达率明显高于Gleason 2～4分组前列腺癌组织DDR2阳性表达率 (P<0.05)。DDR2蛋白阳性表达与TNM分期比较，TNM分期越晚，DDR2阳性表达率越高(P<0.05)。血清PSA水平≤20 μg/L组前列腺癌组织的DDR2阳性表达率明显低于PSA>20 μg/L组(P<0.05)。而DDR2阳性表达率与患者的年龄因素无关(P>0.05)。结论 DDR2在前列腺癌中高表达，提示其在前列腺癌的发生发展中可能起重要作用。

前列腺癌；盘状结构域受体2；免疫组化；蛋白表达；治疗靶点

前列腺癌为男性泌尿生殖系统最常见恶性肿瘤[1]，发病率居男性肿瘤第二位，占男性全部癌症例数的14%[2]。前列腺癌发病率有显著的区域性差异，发达国家的发生率和致死率均高于发展中国家[3]。虽然目前我国前列腺癌发生率不高，但随着人口老龄化、生活方式及饮食结构的西化，其将持续快速增长，严重影响我国男性健康[4]。因此，研究前列腺癌发生发展过程中的关键分子，对于开发靶向药物有重要意义。盘状结构域受体2 (discoidin domain receptor 2，DDR2)是一种受体型蛋白酪氨酸激酶，其配体为胶原[5-6]，在多种肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用[7-9]。本研究采用免疫组化检测DDR2在前列腺癌组织中的表达，分析其表达与临床病理特征的相关性，为进一步研究DDR2在前列腺癌中的作用提供基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本 收集我院2010～2013年46例前列腺癌组织标本(其中32例前列腺穿刺活检标本、14例前列腺切除术标本)，均经病理切片证实为前列腺癌。纳入标准为癌组织长度超过1 mm，且术前未接受放化疗。收集我院同期18例良性前列腺增生手术切除标本，经病理切片证实为良性前列腺增生。上述标本均为常规石蜡包埋的存档蜡块。

1.1.2 临床病理资料 前列腺癌患者年龄46～77岁，平均(60.3±2.8)岁。病理类型：按照Gleason评分进行病理分级：Gleason评分2～4分为高分化，5～7分为中分化，8～10分为低分化癌。46例全部为腺癌，其中Gleason 2 ～ 4分11例、5～7分18例、8～10分17例。TNM临床分期：T1期15例、T2期11例、T3期15例、T4期5例；N0期42例、N1期4例；M0期41例、M1期5例。前列腺增生患者年龄59～81岁，平均(69.1±3.2)岁。

1.1.3 试剂 免疫组化链霉亲合素-生物素酶复合物(strept avidinbiotin complex，SABC)即用型试剂盒购自武汉博士德公司，DDR2抗体购自美国Santa公司。

1.2 方法

1.2.1 染色方法 标本经4%(体积分数)中性甲醛固定，石蜡包埋，常规切片。切片用二甲苯脱蜡，梯度乙醇和蒸馏水水化，PBS冲洗5 min×3次，每张切片加100 μL 3%过氧化氢溶液, 室温下孵育30 min阻断内源性过氧化物酶的活性，PBS冲洗5 min×3次后，滴加5%BSA封闭液室温孵育20 min。甩去多余液体滴加DDR2一抗37 ℃孵育30 min，4 ℃冰箱过夜。PBS洗涤后滴加二抗37 ℃孵育30 min，洗涤后滴加SABC试剂孵育30 min。DAB显色，苏木素复染。梯度乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。

1.2.2 结果判定 以细胞质和细胞膜出现棕黄色颗粒状物为DDR2染色阳性。①按阳性细胞率：阳性细胞<5%为0分，5%～<10%为1分，10%～<30%为2分，30%～<70%为3分，≥70%为4分；②按细胞染色强度：无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。以上两项几分之积判定染色结果：0～1分为阴性(-)，2～ 4分为弱阳性(+)，6～8分为阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。

1.2.3 统计分析 采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，以P<0.05为有统计学差异。

2 结 果

免疫组化结果显示，DDR2蛋白阳性反应主要位于细胞质和细胞膜，呈棕黄色颗粒状染色(图1)。46例前列腺癌组织中，DDR2阳性表达率为82.61% (38/46)；18例前列腺增生组织中，DDR2阳性表达率为11.11% (2/18)。前列腺癌组织与前列腺增生组织的DDR2阳性表达率具有统计学差异(P<0.05，表1)。结果提示DDR2可能在前列腺癌的发生发展过程中起重要作用。

图1 DDR2在前列腺增生、前列腺癌组织中的表达差异(DAB，×40)

表1 前列腺癌、前列腺增生组织中DDR2的表达情况 [例(%)]

为了进一步明确DDR2在前列腺癌病理进程中的作用，我们分析了DDR2表达与前列腺癌组织标本临床病理特征之间的关系。结果表明，Gleason分级5～7分组、8～10分组的前列腺癌组织DDR2阳性率明显高于Gleason分级2～4分组的前列腺癌组织DDR2阳性表达率，其差异具有统计学意义(P<0.05，表2)。DDR2蛋白阳性表达与TNM分期比较，TNM分期越晚，DDR2蛋白阳性表达率越高(P<0.05，表2)。T1期和T2期前列腺癌组织的DDR2阳性表达率分别为73.33%和72.33%，而T3期和T4期前列腺癌组织的DDR2阳性表达率则高达93.33%和100%。N0期前列腺癌组织的DDR2阳性表达率为80.95%，而N1期前列腺癌组织的DDR2阳性表达率则高达100%。M0期前列腺癌组织的DDR2阳性表达率为80.49%，而M1期前列腺癌组织的DDR2阳性表达率则高达100%。患者血清PSA水平≤20 μg/L组的前列腺癌组织DDR2阳性表达率明显低于PSA>20 μg/L组，其差异具有统计学意义(P<0.05，表2)。而DDR2蛋白阳性表达率与患者的年龄因素无关(P>0.05，表2)。

表2 46例前列腺癌组织中DDR2的表达情况 [例(%)]

3 讨 论

近年来，我国前列腺癌的发生率越来越高，已成为影响我国男性健康的重要因素[2]。前列腺癌的分子生物学研究表明，多种癌基因、抑癌基因和其他调节基因共同参与了前列腺癌的发生和发展，与其预后评价有着非常密切的关系[3]。

DDR2基因定位于1q23.3，编码一个含有855个氨基酸、分子质量约为120 ku的膜受体蛋白[6]。它属于DDRs家族，是一类受体型蛋白酪氨酸激酶。DDR2的配体是胶原，其胞外段DS结构域与胶原结合后，其胞内段的酪氨酸激酶结构域内的酪氨酸发生磷酸化，介导下游信号分子发生活化[7]。DDR2参与多种肿瘤的进展过程。DDR2促进乳腺癌发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)，促进乳腺癌发生转移[10]；DDR2促进黑色素瘤细胞A375向肝转移[11]，促进肝癌细胞[12]、结肠癌细胞增殖和迁移[13]；此外DDR2还与鼻咽癌、甲状腺癌的转移密切相关[14-15]。

我们采用免疫组化染色技术研究了DDR2在前列腺癌组织及良性前列腺增生组织中的表达情况，比较了两种组织中DDR2表达水平的差异，发现DDR2在前列腺癌组织中的表达水平明显高于前列腺增生组织。我们分析了DDR2表达水平与前列腺癌标本临床病理特征的关系，发现Gleason评分越高、TNM分期越晚、PSA水平越高的前列腺癌标本的DDR2表达水平越高。本研究初步提示DDR2可能在前列腺癌发生发展中起促进作用，为进一步研究DDR2在前列腺癌中的作用提供了理论基础。

[1] DEMICHELIS F, STANFORD JL.Genetic predisposition to prostate cancer: Update and future perspectives [J]. Urol Oncol, 2015, 33(2):75-84.

[2] 韩苏军, 张思维, 陈万青, 等. 中国前列腺癌发病现状和流行趋势分析[J]. 临床肿瘤学杂志, 2013,18(4):330-334.

[3] 杜然, 郑莉, 张惠箴, 等. 前列腺癌的分子病理学研究进展 [J]. 临床与实验病理学杂志, 2011,27(6):632-634.

[4] 韩仁强, 武鸣, 陈万青, 等. 2003～2007 年中国前列腺癌发病与死亡分析 [J]. 中国肿瘤, 2012,21 (11):805-811.

[5] BORZA CM, POZZI A. Discoidin domain receptors in disease [J]. Matrix Biol, 2014, 34(1):185-192.

[6] CARAFOLI F, HOHENESTER E. Collagen recognition and transmembrane signalling by discoidin domain receptors [J]. Biochim Biophys Acta, 2013, 1834(10):2187-2194.

[7] LEITINGER B. Discoidin domain receptor functions in physiological and pathological conditions [J]. Int Rev Cell Mol Biol, 2014,310:39-87.

[8] BEAUCHEMIN N. The colorectal tumor microenvironment: the next decade [J]. Cancer Microenviron, 2011,4(2):181-185.

[9] YASHIMA H, SHIMIZU K, ARAKI T,et al. Assessment of DDR2, BRAF, EGFR and KRAS mutations as therapeutic targets in non-adenocarcinoma lung cancer patients [J]. Mol Clin Oncol, 2014, 2(5):714-718.

[10] REN T, ZHANG W, LIU X, et al. Discoidin domain receptor 2 (DDR2) promotes breast cancer cell metastasis and the mechanism implicates epithelial-mesenchymal transition programme under hypoxia [J]. J Pathol, 2014, 234(4):526-537.

[11] BADIOLA I, VILLACÉ P, BASALDUA I, et al. Downregulation of discoidin domain receptor 2 in A375 human melanoma cells reduces its experimental liver metastasis ability [J]. Oncol Rep, 2011, 26(4):971-978.

[12] LEE NO, PARK JW, LEE JA, et al. Dual action of a selective cyclooxygenase-2 inhibitor on vascular endothelial growth factor expression in human hepatocellular carcinoma cells: novel involvement of discoidin domain receptor 2 [J]. J Cancer Res Clin Oncol, 2012, 138(1):73-84.

[13] BEAUCHEMIN N. The colorectal tumor microenvironment: the next decade [J].Cancer Microenviron, 2011, 4(2):181-185.

[14] CHUA HH, YEH TH, WANG YP, et al. Upregulation of discoidin domain receptor 2 in nasopharyngeal carcinoma [J]. Head Neck, 2008, 30(4):427-436.

[15] RODRIGUES R, ROQUE L, ESPADINHA C, et al. Comparative genomic hybridization, BRAF, RAS, RET, and oligo-array analysis in aneuploid papillary thyroid carcinomas [J]. Oncol Rep, 2007, 18(4):917-926.

(编辑 何宏灵)

西安交通大学医学院第一附属医院面向全国招收泌尿外科进修医师的通知

西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科是国家重点学科。近年来形成了鲜明的学科内亚专业，成立了肿瘤、结石、前列腺疾病、小儿泌尿、女性与神经泌尿、男科疾病等不同学组。2010年起本学科与台湾阳明大学泌尿外科(台北荣民总医院泌尿外科)建立开展长期合作，每年邀请4～5批台湾著名泌尿外科专家来学科交流、讲学、指导临床工作。

为了给全国泌尿外科同道，特别是青年泌尿外科医师提供良好的进修锻炼机会，本学科面向全国招收泌尿外科进修医师。热诚欢迎全国各地泌尿外科医生来我科进修学习、共同进步。

来本学科进修学习实行导师制，每位进修医师根据条件和实际需求配备一位高年资医师担任导师，具体指导临床实践、临床科研论文书写等。进修期限一般为1年。在全面进修各亚专业基础上，根据本人意愿可对部分亚专业进行重点培养。学习期满，经考核合格者，将颁发专科进修证书。

报名条件：1.大学本科以上学历； 2.已取得执业医师资格； 3.具有2年外科临床工作经验，或1年以上泌尿外科工作经验。

申请程序：1.填写《进修申请表》； 2.将《进修申请表》、三证复印件(学历证书、执业资格证书、医师资格证书)、医院证明等寄回。详细情况请致电或发E-mail垂询。

联系方式：710061 西安市雁塔西路277号西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科

联系人：吴大鹏(029-85323945；15102968258；wudapeng1974@yahoo.com)

Expression of discoidin domain receptor 2 in prostate cancer tissue and its clinical significance

XU Yan-ni1,2, ZHANG Jian1, LI Jing1, ZHANG Yan1

(1.Center for Translational Medicine,the First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710061; 2.Institute of Endemic Diseases, Xi’an Jiaotong University Health Science Center, Xi’an 710061, China)

Objective To investigate the expression of discoidin domain receptor 2 (DDR2) in human prostate cancer and its correlation with the clinicopathologic parameters. Methods Immunohistochemistry assay was performed to detect the expression of DDR2 in 46 cases of prostate cancer and 18 cases of benign prostate hyperplasia. Results The positive expression of DDR2 in prostate cancer (82.61%) was significantly higher than that in benign prostate hyperplasia (11.11%,P<0.05). The positive expression of DDR2 in Gleason 5～7 group and 8～19 group was obviously higher than that in Gleason 2～4 group (P<0.05). The expression of DDR2 was positively related to the TNM stages and increased with tumor progression (P<0.05). The expression of DDR2 was significantly related to serum level of PSA (P<0.05), but not to age.Conclusion The overexpression of DDR2 may play an important role in the pathogenesis of prostate cancer.

prostate cancer; discoindin domain receptor 2; immunohistochemistry; protein expression; therapeutic target

2015-06-18

2015-07-01

国家自然科学基金项目(No.81300716)；教育部高等学校博士学科点专项科研基金项目(No.20120201120089)；陕西省卫生厅科研基金项目(No.2012D59)

张燕，助理研究员.E-mail：zyyan1114@163.com

许妍妮(1982-)，女(汉族)，学士，主管检验师.研究方向:疾病早期诊断标志. E-mail：xuyanni448@163.com

R737.25

A

10.3969/j.issn.1009-8291.2015.10.003