民族药小白薇的抗炎活性成分的初步研究*

陈 珠，陈海丰，杨彩霞，林玉萍，毛晓健

(云南中医学院，云南 昆明 650500)

民族药小白薇的抗炎活性成分的初步研究*

陈 珠，陈海丰，杨彩霞，林玉萍，毛晓健△

(云南中医学院，云南 昆明 650500)

目的 研究小白薇各种提取物对小鼠的炎症模型的影响，以明确小白薇抗炎活性的有效部位。方法 用棉球植入小鼠体内的方法测肉芽的重量；用二甲苯致耳肿胀的方法测耳廓肿胀率。结果 醋酸泼尼松对照组和50%醇提物高、低剂量组对二甲苯所致小鼠耳肿胀有极为显著的抑制作用(P<0.01)，其余各给药组作用均不显著；各给药组除醋酸泼尼松组、正丁醇高剂量组外均能显著抑制肉芽组织增生而有显著的抗炎作用；各给药组对小鼠胸腺、脾脏无明显影响，阳性对照组醋酸泼尼松能显著降低小鼠胸腺指数和脾脏指数，有免疫抑制作用。结论 小白薇提取物对炎症早期，毛细血管通透性增高时的抑制以50%醇提物作用显著，小白薇各提取物对炎症晚期肉芽组织增生有显著的抑制作用。

小白薇；提取物；抗炎；耳廓肿胀；肉芽组织

小白薇为萝摩科(Asclepiadaceae)植物云南娃儿藤(Tylophorayunnanensisschltr)的根，别名白龙须、白薇、水辣子根、老妈妈针线包、蛇辣子、白藤、娃儿藤、羊角草、中西林[1]。主产于云南、贵州和四川，生长于海拔2000 m以下山坡、向阳旷野及草地上[2]。根及根茎供药用，有除虚烦、清热散肿、生肌止痛之效[3]，亦为彝族习用药物，彝医常用小白薇单味水煎服，治疗气虚无力、肾炎，民间常用其治疗尿路感染、肾炎、痢疾、肝炎等[4]。为明确小白薇抗炎活性的有效部位和有效成分，小白薇分别以水、95%乙醇、50%乙醇、正丁醇、氯仿将小白薇提取物分成五个极性段，通过小鼠耳廓肿胀、棉球肉芽肿炎模型，以筛选抗炎活性，明确抗炎的有效部位，对小白薇抗炎作用做出初步评价，以期为临床应用和我省民族药资源开发提供一定的实验依据。本研究来源于云南省教育厅科学研究基金项目《小白薇的抗炎活性成分的研究》的课题，现报道如下：

1 实验材料

1.1 药材 小白薇提取物：水提取物、50%乙醇提取物、95%乙醇提取物、正丁醇提取物、氯仿提取物。由课题组提供。

1.2 实验动物 昆明种小白鼠，体重18～22 g，雄性。均购自昆明医学院实验动物中心。实验动物生产许可证号：动物 SCXK(滇2011-0004)SPF级；饲料：SCXK(滇2011-0005)。

1.3 实验器材及试剂 器材：手术剪刀，镊子，手术针、线，注射器，小鼠固定板、线，脱脂棉，棉签，手套，口罩等。

试剂：75%乙醇，碘酒，乙醚，二甲苯等均为市售分析纯试剂；注射用头孢拉定粉针剂(批号：100306)、生理盐水。

阳性药：醋酸泼尼松(批号：101132；浙江仙琚药业有限公司)。

2 试验方法及结果

2.1 药液制备及给药方法 将各种提取物放入蒸发皿中在水浴锅上挥发，将溶剂挥发干，准确称取，放入研钵中研成粉末，适当的加入可溶性淀粉，再将其配置成混悬液，以备给药。阳性药：醋酸泼尼松(5 mg/片)，临用时取一片药，放入研钵中研细后配成20 mL的混悬液，以备给药。

分组给药剂量：实验动物均随机分为12组，即每个提取组分的高、低剂量组，阳性对照组，空白对照组。高、低剂量组给药剂量按体表面积折算，各极性段溶剂提取物按原生药材10 g/d，低剂量组为等效剂量，高剂量组为等效剂量的3倍。阳性药对照组选用醋酸泼尼松作为阳性药，给药剂量按体表面积折算，为人用量等效剂量。空白对照组给予同体积生理盐水。剂量见表1。

表1 小白薇不同提物给药剂量 (g/kg)

均灌胃给药，各药均配成0.2ml/10 g的混悬液，根据小鼠的体重，准确计算每只小鼠的给药剂量，每天1次，按时、准确给药，同时密切观察、记录动物的情况。

2.2 抗炎实验

2.2.1 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响[5]取雄性昆明种小白鼠144只，体重18～22 g，分组及给药剂量如表1所示，随机分为12组，每组12只，灌胃给药，每天1次，连续10天。第10天给药半小时后用二甲苯0.05 mL/只，涂于小鼠右耳廓致炎。致炎30 min后颈椎脱臼处死小鼠，立即用7 mm打孔器取左右耳片，电子天平称重。计算肿胀率[肿胀率=(右耳片重—左耳片重)/左耳片重；×100%]，并各组间进行比较。经统计比较，见表2。

表2 小白薇提取物对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响

注：与空白组比较，**P<0.05

结果表明：与空白对照组比较，醋酸泼尼松对照组和50%醇提高、低剂量组对二甲苯所致小鼠耳肿胀有极为显著的抑制作用(P<0.01)，其余各给药组作用均不显著。

2.2.2 对小鼠肉芽组织增生的影响[6]雄性小鼠，18～22 g，随机分为12组，每组12只。乙醚麻醉下，左右鼠蹊部消毒后剪开1 cm长的小口，一血管钳扩充皮下组织，用镊子将重量为10 mg的灭菌棉球植入皮下，然后缝合，必要时可加青、链霉素0.2 mi以防感染，手术次日开始灌胃给药，联系10天，第11天处死小鼠，打开原切口，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剔除脂肪组织，放烘箱中60度12 h烘干称重，将称得的重量减去棉球原重量即得肉芽肿的重量。结果见表3所示。

表3 小白薇提取物对小鼠肉芽组织的影响

注：与空白组比较，**P<0.01；*P<0.05

结果表明：与空白组比较，各给药组除醋酸泼尼松组、正丁醇高剂量组外均能显著抑制肉芽组织增生而有显著的抗炎作用。

2.2.3 对小鼠胸腺和脾脏的影响[7]将2.2.1试验取耳后的小鼠，迅速剖腹，取出胸腺和脾脏，用电子天平称其鲜重并计算胸腺指数和脾脏指数[胸腺(脾脏)指数=胸腺(脾脏)重量(g)/10(g)体重]，经统计比较结果见表3：

表4 小白薇提取物对小鼠胸腺、脾脏的影响

注：与空白组比较，**P<0.01

结果表明：与空白组比较，各给药组对小鼠胸腺、脾脏无明显影响，阳性对照组醋酸泼尼松能显著降低小鼠胸腺指数和脾脏指数，有免疫抑制作用。

3 结论与讨论：

本次研究初步得到以下结论：小白薇提取物对炎症早期，毛细血管通透性增高时的抑制以50%醇提物作用显著，其他各提取物有一定的抵制趋势，但作用不显著；小白薇提取物除正丁醇高剂量组外，对炎症晚期肉芽组织增生有显著的抑制作用。各给药组对小鼠胸腺、脾脏无显著影响。但本次实验只针对小鼠耳肿胀和肉芽组织增生炎症早期和晚期指标做了小白薇的抗炎活性成份的初步研究，对于炎症中期如白细胞游走等指标的影响，有待进一步研究。本次实验中也发现，各给药组对小鼠胸腺、脾脏无显著影响，即其对小鼠免疫无抑制作用，与其用于治疗气虚无力的临床应用是相符的。

据报道，娃儿藤生物碱有显著的抗癌活性。从娃儿藤中提取出的娃儿藤总碱、娃儿藤宁定和娃儿藤宁在组织培养、抗白细胞指数测定和精原细胞法中均显示有抗肿瘤活性。在亚急性毒性试验中，发现该药具有明显降低白细胞的作用，因而推想其可能有抗白血病作用[8]；娃儿藤片具有镇咳、祛痰、平喘作用，可治疗慢性支气管炎，尤其对喘息型慢性支气管炎有一定的远期疗效[9]；王远兴等报道了卵叶娃儿藤总生物碱对宫颈癌细胞株HeLa的增殖有强烈的抑制作用，呈现出细胞缩小、核浓缩、细胞质红染及细胞质内空泡等典型的凋亡现象[10]，具体的作用机理尚需要进一步研究。娃儿藤属我国仅产31种，大多数资源贫乏，而鹅绒藤属为萝藦科种类最多的属，从鹅绒藤属植物中寻找菲骈吲哚里西啶生物碱为国内今后开发该类抗癌剂资源的一条重要途径[11]。故对小白薇值得做更深一步的研究。

[1]兰茂.滇南本草(第一卷)[M].昆明，云南科技出版社，1975：340-341.

[2]中国科学院植物研究所.中国数字植物标本馆植物研究[M].昆明：中国植物志电子版，2006：526-529.

[3]中国科学院昆明植物研究所植物研究[M].昆明：云南植物志(第三卷).1983：588-591.

[4]杨本雷.中国彝族药学[M].昆明：云南民族出版社，2004：546.

[5]陈奇，中药药理实验方法学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，2006：347.

[6]陈奇，中药药理实验方法学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，2006：355-356.

[7]陈奇，中药药理实验方法学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，2006：777-778.

[8]广西壮族自治区药物研究所.抗肿瘤药娃儿藤的实验研究Ⅱ.抗肿瘤作用及药理研究[J].生物化学与生物物理学报，1977，9(2)：139-145.

[9]江西省余干县医学科学研究所.娃儿藤片治疗慢性气管炎的疗效观察[J].中国中药杂志，1983，11：21.

[10]王远兴，贾素花，曾雯瑜等.卵叶娃儿藤碱对宫颈癌细胞株HeLa的体外作用[J].食品科学，2008，29(11)：609-611.

[11]彭军鹏，刘永和，李铣.娃儿藤生物碱的研究概况[J].西北药学杂志.1989，4(4)：42-47.

A Preliminary Study of National Anti-Inflammatory Active Ingredients of Tylophora Yunnanensis

CHEN Zhu1, CHEN Hai-feng2, YANG Cai-xia1,2, LIN Yu-ping2, MAO Xiao-jian2,3

(1.SchoolofPostgraduateStudents,YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Kunming650500,Yunnan; 2.YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Kunming650500,Yunnan)

Objective: To study the effect of various extracts of Tylophora yunnanensis on mouse anti-inflammation model to assure the effective parts of its anti-inflammatory activity. Methods: Mice were implanted into cotton balls to measure the weight of granulation. Xylene-induced ear swelling in mice was used to measure the rate of ear swelling. Results: A prednisone control group and high-dose and low-dose groups of 50% ethanol extract had a significant inhibitive effect (P<0.01) on xylene-induced ear swelling in mice. The rest of medication administration groups had no significant effect. Except the prednisone control group and N-butyl alcohol high dose group, each medication group could significantly inhibit proliferation of granulation tissue and had significant anti-inflammatory effect. All the medication groups had no significant effect on the thymus and spleen of the mice. The prednisone of the positive control group could significantly reduce the thymus index and spleen index, with immunosuppressive effect. Conclusion: The extracts of Tylophora yunnanensis has a remarkable effect on early inflammation at 50% alcohol extract when the blood capillary permeability increases, and has obvious inhibition effect on tissue proliferation of advanced stage of inflammation granulation tissue.

Tylophora yunnanensis, extract, anti-inflammatory, ear swelling, granulation tissue

云南省教育厅科学研究基金项目(NO：09Z0046)

陈珠(1989-)女，河南，研究方向：中药学。

R285.5

A

1007-2349(2015)08-0068-03

2015-0-15)

△通信作者：毛晓健，Tel：13888820657