石菖蒲-远志药对不同配伍比例对小鼠胃肠形态的影响*

安 柳，吴 赛，陈海洋，吕银娟，柳 琳，张智华△

(1.湖北中医药大学基础医学院2013级本科生，湖北 武汉 430065；2.湖北中医药大学基础医学院方剂学教研室，湖北 武汉 430065)

·实验研究·

石菖蒲-远志药对不同配伍比例对小鼠胃肠形态的影响*

安 柳1，吴 赛1，陈海洋1，吕银娟2，柳 琳2，张智华2△

(1.湖北中医药大学基础医学院2013级本科生，湖北 武汉 430065；2.湖北中医药大学基础医学院方剂学教研室，湖北 武汉 430065)

目的 探讨石菖蒲-远志药对不同配伍比例和给药时间对小鼠胃肠形态的影响。方法 昆明小鼠随机分为正常对照组、石菖蒲组、远志组、石菖蒲远志1：1组、石菖蒲远志1：2组和石菖蒲远志2：1组，每组10只。以0.2 mL/10 g给药量连续灌胃28 d，在7、14、28 d分别颈椎脱臼法处死3只小鼠，观察小鼠的消化管，并取胃窦及十二指肠做HE染色。结果 经大体观察，与生理盐水组相比，石菖蒲组、石菖蒲远志2：1和1：1配伍组各消化管形态和结构基本正常，未见肉眼可见的异常增生、糜烂和溃疡，黏膜色泽、纹理和结构正常。但远志组胃肠胀气明显，肠壁菲薄。HE染色显示，石菖蒲组各消化管显示基本正常组织学结构，远志组黏膜缺损，走向欠规则，而石菖蒲远志2：1和1：1组接近正常组织。结论 石菖蒲未对小鼠的消化管造成明显的毒副作用，远志对消化管有副作用，但与石菖蒲配伍后能缓解这一不良作用。

石菖蒲；远志；药对；配伍；小鼠；胃肠形态

前期研究发现，“石菖蒲-远志”是中医治疗老年性痴呆方剂中出现频次最高的药对[1]。但石菖蒲-远志用于防治老年性痴呆往往需要长期用药。药理学研究已证实远志有明显的胃肠副作用[2-3]，两药配伍使用是否对胃肠存在不良作用还有待进一步验证，为此笔者用正常小鼠作为实验对象，探讨石菖蒲-远志药对不同配伍比例、不同给药时间对胃肠形态的影响，现汇报如下：

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 雄性昆明种小鼠，体重(20±2)g，由武汉大学动物实验中心提供。受试动物喂全价颗粒饲料，自由饮水，室温(20±2)℃，湿度45-65%；受试动物购进后适应性喂养一周再进行正式试验。

1.1.2 药物和试剂 经鉴定为正品的石菖蒲、远志，均购于湖北顺天医药有限公司(货号140401、140301)；苏木素(Sigma，货号H9627)；伊红Y(水溶性，货号71014544)、无水乙醇、二甲苯、包埋石蜡等。

1.1.3 实验器材 旋转蒸发仪(RE-52AA，上海亚荣生化仪器厂)，SHZ-D(III)型循环水真空泵(天津华鑫仪器厂)、病理切片机(德国Leica RM 2016轮转式切片机)、切片刀(日本羽毛R35一次性刀片)、组织摊烤片机(武汉俊杰JK-6生物组织摊烤片机)、载玻片及盖玻片(江苏世泰实验器材有限公司)、显微镜(尼康E100型)、数码单反相机(佳能550D)。

1.2 方法

1.2.1 药物制备 分别取石菖蒲与远志药材共180 g依次以1：1、1：2、2：1比例加水8倍煎煮，大火煎开，小火煎40 min，第2次加4倍量水，同法操作，合并2次的药液。将药液转移至旋转蒸发仪，于75℃减压回收水，浓缩至1 g/mL生药量的药液，保存在-20℃冰箱中，临用时取出。

1.2.2 动物分组及给药 将实验动物随机分为正常对照组、石菖蒲组、远志组、石菖蒲远志1：1组、石菖蒲远志1：2组和石菖蒲远志2：1组，每组10只。各组分别灌胃相应药物，给药量为0.2 mL/10 g，对照组灌胃等容积生理盐水，给药4周。

1.2.3 胃肠取材及HE染色 分别在7、14 d和28 d末次灌胃后3 h，各组动物随机取3只小鼠颈椎脱臼法处死，迅速打开腹腔取胃、肠组织。取材后仔细观察各实验鼠的胃肠，先从外面观察胃壁和肠壁是否光整、是否有结节或肿块形成。然后切开胃壁和肠壁，观察胃、肠黏膜是否完整，有无溃疡、糜烂或肿瘤形成。肉眼观察后分别取胃窦部和十二指肠部，并于10%福尔马林液中固定。常规石蜡包埋，5 μm连续切片，HE常规染色，光镜下观察胃肠病理学改变并拍照。

2 结果

2.1 一般情况及大体观察 给药组在灌胃后约3 d开始，部分小鼠出现进食减少，体质量下降，活动减少等，尤以远志组明显。而空白组小鼠均未出现上述情况。远志组和石菖蒲远志1：2组各有1只小鼠死亡，石菖蒲组因灌胃误操作死亡1只。

小鼠取材后，立即解剖胃、肠。解剖胃时，先沿胃大弯处剪开；解剖肠时沿肠系膜缘的对侧剪开。用生理盐水将内容物冲洗干净，然后将之展开、平摊，用肉眼及解剖显微镜观察胃、肠黏膜，发现对照组、石菖蒲和2：1、1：1配伍组小鼠的胃、肠黏膜均呈现基本正常的黏膜形态，未见出血、糜烂、溃疡和肿瘤形成等，但远志组胃肠胀气明显，肠壁菲薄，未见明显出血、糜烂和溃疡，1：2配伍组也表现出一定程度的胃肠胀气，肠壁薄，无出血、糜烂等。

2.2 各组小鼠胃壁HE染色观察 对照组小鼠胃窦组织经HE染色显示：黏膜呈粉红色，被覆黏液，黏膜皱襞表面光滑，走向规则；胃底腺之间可见少量的结缔组织；固有层下可见平滑肌层。与对照组相比，石菖蒲组、2：1配伍组和1：1配伍组灌胃小鼠均未发现其胃壁黏膜出现损伤；高倍镜下可见主细胞和壁细胞符合正常的形态学结构，未出现病变特征；也未发现有明显的毛细血管扩张等现象。但远志组胃黏膜组织不同程度充血水肿，固有层和黏膜下层可见大量中性粒细胞、嗜酸性粒细胞堆积，有少量溃疡点，并随着给药时间的延长，黏膜损伤程度逐渐加重(见图1)。

图1 给药14 d、28 d，各组胃窦HE染色：A-F分别为对照组、石菖蒲组、远志组、1：1组、1：2组、2：1组

2.3 各组小鼠肠HE染色观察 对照组小鼠肠组织经HE染色显示正常的肠黏膜结构，黏膜和黏膜下层向肠腔突起，形成皱襞，可见许多的叶状、指状绒毛突向肠腔，柱状细胞、杯状细胞等排列正常；黏膜下层有许多黏液性的肠腺，在大肠的黏膜下层内有大量的脂肪细胞；平滑肌排列规则，边界清晰。与对照组相比，石菖蒲组及2：1、1：1配伍组小鼠灌胃后未发现其黏膜和黏膜下层结构出现明显变化，未发现肠腔有明显的毛细血管扩张等现象。但远志组和1：2配伍组肠黏膜绒毛完整性被破坏，黏膜组织充血水肿，上皮脱落、坏死，大量炎细胞浸润，且随着给药时间的延长，病变加剧(见图2)。

图2 给药7d、28d，各组肠HE染色：A-F分别为对照组、石菖蒲组、远志组、1：1组、1：2组、2：1组

3 讨论

石菖蒲为天南星科多年生草本植物石菖蒲的根茎，有开窍醒神，化湿和胃，宁神益智之功。有研究发现石菖蒲通过抑制胃肠(主要是胃)收缩活动而对胃脘胀痛具有治疗作用。石菖蒲对胃头区无明显作用，但对胃尾区的平滑肌具有兴奋作用[4]，并有促进消化液的分泌及制止胃肠异常发酵、延缓平滑肌痉挛的作用[5]。至于其副作用，有人认为石菖蒲长期给药可导致实验动物胃肠道肿瘤[6-7]，存在潜在的致畸、致癌作用，但也有文献报道否认了这一点[8]，认为其对胃肠形态无影响。

远志为远志科多年生草本植物远志或卵叶远志的根，具有安心宁神，祛痰开窍，消散痈肿等功效。现代研究证实远志在常规用量时即可引起轻度恶心、腹胀，能使胃黏膜损伤，胃壁变薄，胃肠道胀气，抑制胃排空及小肠推进运动，严重影响胃肠道消化功能，若大剂量服用可引起恶心、呕吐、腹泻、溶血等不良反应，并可导致实验动物胃黏膜出血、脱落，呈现出明显的胃肠靶器官副作用。研究还发现远志较强的祛痰作用是其所含皂苷对胃黏膜的刺激作用，反射性地促进支气管分泌液增加所致[9]。生远志提取液能够降低胃部兴奋性神经递质P物质含量，减弱Ca2+-ATP酶活性，增加NO含量，从而干预胃肠肌电慢波，并且还可以通过减少胃肠道cajal间质细胞的数量抑制胃肠运动[10-11]。鉴于生远志明显的毒副作用，传统多通过炮制来降低毒性。研究发现生远志与姜远志能显著抑制胃肠运动及消化功能，其蜜炙品、甘草炮制品的抑制作用相对弱[2-3]，配伍厚朴可在一定程度上缓解远志胃肠动力抑制的作用[12-13]。也有研究发现打破远志糖基可降低其胃肠毒性[14]。

到目前为止，石菖蒲远志配伍后对胃肠作用方面的研究报道较少。如前所述，远志大量或长期使用对胃肠有毒副作用，然而研究发现石菖蒲远志散(由石菖蒲、远志、猪牙皂角组成)属于毒性较小的药物，且急性毒副作用较少[15]。已证实石菖蒲可能通过抑制远志皂苷溶出而对远志有减毒作用[16]。当两种单味药配伍合煎时，药对化合物群的组成发生了明显变化，有大量微量组分被检出，也有部分来自远志或石菖蒲的成分消失或含量发生了明显变化[17]。因此石菖蒲能否降低远志的胃肠毒副作用值得我们思考，通过以上分析我们可以设想两药配伍后有可能达到“纠偏减毒”的效果。

实验发现石菖蒲组及2：1配伍组对胃肠影响较小，其次为1：1配伍组，而远志组和1：2配伍组有一定的胃肠毒性，证实远志确有胃肠毒性，而石菖蒲对其毒性有一定的拮抗作用。

由实验结果可知，若要减低远志的胃肠毒性，石菖蒲远志以2：1配伍为最佳。为了进一步探讨两药配伍后对实验动物胃肠消化功能的影响，我们又选用了大鼠作为实验对象，给药28 d后，分别在7、28 d行HE染色观察其胃及空肠的形态学变化，检测其胃酸、胃蛋白酶、胃泌素及生长抑素的水平，初步探讨了其作用机制，限于篇幅，另文报道。

总之，石菖蒲-远志是古今抗痴呆方剂中出现频次最高的药对之一，此药对在益智抗衰方面应用前景广阔，若能深入、系统研究，为这一药对的临床安全及合理使用提供科学依据，具有重要的学术价值和科学意义。

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Effect of Acorus Tatarinowii and Polygala Tenuifolia on Mice Gastrointestinal Form with Different Compatibility Proportions

AN Liu1, HUA Du-ping1, WU Sai1, YE Wen-jing1, CHEN Hai-yang1, ZENG Zi-xuan1,LV Yin-juan2, LIU Lin2, ZHANG Zhi-hua2

(1.SchoolofBasicMedicine,HubeiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Wuhan430065,Hubei; 2.PrescriptionsTeachingSection,DepartmentofBasicMedicine,HubeiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Wuhan430065,Hubei)

Objective: To study the effect of Acorus Tatarinowii and Polygala Tenuifolia on mice gastrointestinal form with different compatibility proportions. Methods: Kunming mice were randomly divided into a normal control group, an Acorus Tatarinowii (AT) group, a Polygala Tenuifolia (PT) group, a 1:1 AT group, a 1:2 AT group and a 2:1 AT-PT group, 10 mice per group. Each group was intragastrically administrated with 0.2 mL/10g dose of these drugs for successive 28 days, and three mice were respectively killed by cervical dislocation at the 7th, 14th and 28th day, to observe their digestive tract and take their gastric antrum and duodenum to do HE staining. Results: When compared with the saline group, the digestive tract morphology and structure of AT group, 2:1 AT-PT group and 1:1 AT group were normal, no visible dysplasia, erosions and ulcers and their mucous membrane color, texture and structure were normal, but in PT group, the flatulence of the mice was obvious and their intestinal were meager. HE staining showed that AT group showed normal histology of the digestive tract while PT group showed mucosal defect, towards irregular, but 2:1 AT-PT group and 1:1 AT group were close to normal tissue. Conclusion: Acorus Tatarinowii do not cause significant side effect on the digestive tract of the mice and Polygala Tenuifolia do cause side effect on the digestive tract of the mice, but the compatibility of Acorus Tatarinowii and Polygala Tenuifolia can alleviate the adverse effect.

Acorus Tatarinowii, Polygala Tenuifolia, medicine pair, compatibility, mice, gastrointestinal form

国家自然科学基金青年项目(NO：81202734)；湖北中医药大学2014“挑战杯”大学生课外学术科技作品项目。

安柳(1991-)，女，湖北，湖北中医药大学基础医学院2013级中医学七年制学生。

△通信作者：张智华，E-mail：zzhor@163.com。

R285.5

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1007-2349(2015)08-0063-04

2015-05-21)