PCDH9、BAG-1S蛋白表达对非小细胞肺癌新辅助化疗预后状况的影响*

罗好秋

中晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）无法耐受手术，而大部分早期非小细胞肺癌患者术后仍需辅助化疗[1]。化疗是非小细胞肺癌的主要治疗手段，但目前非小细胞肺癌化疗有效率较低，其主要原因为化疗敏感性降低[2]。原钙黏附蛋白9（Protocadherin，PCDH9）在成人小肠、卵巢、前列腺、胸腺和脾脏组织中的表达明显高于胎儿组织[3]。抗凋亡蛋白BAG-1S（Bcl-2associated athanogenel，BAG-1S）高表达提示恶性肿瘤局部复发和远处转移率较高[4]。但关于PCDH9、BAG-1S蛋白表达对非小细胞肺癌新辅助化疗预后状况的影响研究甚少，本研究就这一问题进行探究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2008年1月-2009年12月本院肿瘤科非小细胞肺癌患者178例作为研究对象。纳入标准：全部患者均符合非小细胞肺癌的病理诊断标准，具有手术适应证，术后6~8周期新辅助化疗[5]。排除标准：至随访截止日期2014年12月，随访资料不完整。所选患者中男90例，女88例，年龄42~77岁，平均（63.41±6.14）岁，组织学类型：腺癌96例，鳞癌82例。组织学分化程度：低分化60例，中分化52例，高分化66例。临床分期：Ⅰ期42例，Ⅱ期57例，Ⅲ期79例。有淋巴结转移113例，无淋巴结转移65例。研究经本院医院伦理委员会批准，全部患者均签署知情同意书。

1.2 方法 采用免疫组化检测法。（1）试剂与仪器：鼠抗BAG-1S多克隆抗体（CC9E8，工作稀释度为1∶15）购自Santa Cruz公司，兔抗人PCDH9一抗及鼠抗兔二抗均购自美国Abcam公司，EDTA抗原修复液（pH=9.5）、DAB显色试剂盒和SP免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物公司，（2）操作步骤：术中采集非小细胞肺癌组织（178例）和癌旁组织（距离肿瘤组织2 cm，154例），石蜡切片、脱蜡、水化，磷酸盐（Phosphate Buffered Saline，PBS）缓冲液冲洗3 min×3次，高温高压下采用EDTA抗原修复液行抗原修复，滴加3%H2O2溶液，室温下孵育10 min阻断内源性过氧化物酶，PBS缓冲液冲洗3 min×3次，加第一抗体，室温下孵育60 min，PBS缓冲液冲洗5 min×3次，滴加聚合物增强剂，室温下孵育20 min，PBS缓冲液冲洗3 min×3次，加酶标抗鼠聚合物，室温下孵育30 min，PBS缓冲液冲洗3 min×3次，滴加DAB显色试剂，电子显微镜下观察，棕黄色为阳性，自来水冲洗，HE复染，0.1%盐酸分化，自来水冲洗，PBS缓冲液返蓝，乙醇梯度脱水干燥，中性树脂封片。

1.3 结果判定标准 组织切片由两名病理学医师重复观察，随机选取5个高倍镜视野，按阳性细胞数比例分级，无细胞着色评定为0分，细胞着色≤10%评定为1分，细胞着色10%~25%评定为2分，细胞着色26%~50%评定为3分，细胞着色51%~100%评定为4分；组织切片无色评定为0分，淡黄色评定为1分，棕黄色评定为2分，棕褐色评定为3分。两者积分相加≤2分为阴性；反之为阳性。

1.4 统计学处理 本研究数据采用SPSS 18.0统计软件进行分析，计量资料以（±s）表示，比较采用t检验，计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组PCDH9、BAG-1S蛋白表达比较 非小细胞肺癌组织PCDH9阳性表达率明显低于非小细胞肺癌癌旁组织，两者比较差异有统计学意义（P<0.05），非小细胞肺癌组织BAG-1S阳性表达率明显高于非小细胞肺癌癌旁组织，两者比较差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

表1 两组PCDH9、BAG-1S蛋白表达比较 例（%）

2.2 不同PCDH9蛋白表达对非小细胞肺癌新辅助化疗预后的影响 PCDH9阳性表达者总生存期及无进展生存期均明显高于PCDH9阴性表达者，两者比较差异有统计学意义（P<0.05），见表 2。

表2 不同PCDH9蛋白表达对非小细胞肺癌新辅助化疗预后影响的比较（x-±s） 个月

2.3 不同BAG-1S蛋白表达对非小细胞肺癌新辅助化疗预后的影响 BAG-1S阳性者总生存期及无进展生存期均明显低于BAG-1S阴性表达者，两者比较差异有统计学意义（P<0.05），见表3。

表3 不同BAG-1S蛋白表达对非小细胞肺癌新辅助化疗预后影响的比较（x-±s） 个月

3 讨论

美国肺部恶性肿瘤总体5年生存率约为15%，而我国肺部恶性肿瘤总体5年生存率仅为10%，大部分国家肺部恶性肿瘤发生率呈逐渐增高趋势，而关于肺部恶性肿瘤的病理发生机制尚未完全明确。非小细胞肺癌是常见的肺部恶性肿瘤之一，其病情进展较快，预后欠佳，且对常规放化疗耐药，5年生存率较低。

原钙黏蛋白（PCDH）根据基因组结构差异分为团簇性和非团簇性，非团簇性PCDH具有细胞黏附分子的异质性和同质性，参与细胞黏附因子的生物功能[6-7]。PCDH9基因有1个特别长的外显子编码，其属于细胞黏附分子cadherin超家族成员，钙黏蛋白缺失可促进恶性肿瘤浸润和转移[8]。相关研究亦显示，PCDH9在胶质瘤组织中的表达明显低于癌旁组织，且在高级胶质瘤组织PCDH9表达缺乏，PCDH9阴性表达者生存期较PCDH9阳性表达者明显缩短[9]。因此，PCDH9可作为胶质瘤预后的特异性指标。经临床实践研究同时证实，PCDH9在乳腺癌组织中表达显著降低，明显低于胸腺纤维腺瘤，且与淋巴结转移及其侵犯呈明显的负相关，揭示了PCDH9表达在乳腺癌的临床治疗效果和预后的预测中具有重要的意义。但关于PCDH9对肺部恶性肿瘤预后状况的评估意义研究甚少。

BAG-1S归属BAG-1，后者是近期发现的抗凋亡蛋白，其包括BAG-1M、BAG-1L和BAG-1S等不同亚型。BAG-1与Bcl-2相结合发挥多种生物功能。BAG-1S通过与多种基因蛋白产物相互作用共同调节细胞增殖和凋亡，在细胞质内，BAG-1S分别与Bal-2和HSP70相结合调节细胞凋亡和增殖功能[10]。BAG-1S与RAF-1激酶、类固醇激素受体等蛋白发生作用，还可与Bal-2形成复合物，共同促进抗细胞凋亡功能。BAG-1S在人类正常组织中几乎不表达，但在大部分恶性肿瘤组织中显著性高表达。文献[11]报道显示，BAG-1S在食管鳞癌组织和胃腺癌组织中的表达明显增高，其表达程度与组织分化程度、淋巴结转移、浸润深度和临床分期等紧密相关。同时，食管鳞癌组织BAG-1S阳性表达显著高于食管鳞癌癌旁正常组织，提示BAG-1S参与食管癌的发生和发展。但关于BAG-1S在非小细胞肺癌疾病的发生和发展中的作用有待进一步的临床研究。

本研究结果显示，非小细胞肺癌组织PCDH9阳性表达率明显低于非小细胞肺癌癌旁组织，BAG-1S阳性表达率明显高于非小细胞肺癌癌旁组织，两者比较差异有统计学意义（P<0.05），研究结果揭示了非小细胞肺癌组织PCDH9表达缺失，而BAG-1S呈高表达，与相关研究报道结果一致[12]。PCDH9阳性表达者总生存时间和无进展生存期均明显增高，BAG-1S阳性者总生存时间和无进展生存期均明显降低。相关研究报道显示，BAG-1S在正常人体组织中弱表达甚至不表达，而在大部分肿瘤细胞均明显高表达[13-14]。该研究同样表明，胃腺癌组织，食管鳞癌组织和大肠癌组织中的BAG-1S显著性高表达，其与浸润深度、分化程度、淋巴结转移和临床分期等紧密相关。大量研究证实了BAG-1S高表达参与的恶性肿瘤的发生和发展[4]。结合本研究结果，PCDH9阴性表达的非小细胞肺癌预后欠佳，而BAG-1S阳性表达的非小细胞肺癌预后欠佳。因此，PCDH9阳性或BAG-1S阴性表达有助于改善非小细胞肺癌新辅助化疗患者的预后状况。

综上所述，PCDH9、BAG-1S蛋白表达可预示非小细胞肺癌新辅助化疗预后状况，其中PCDH9阳性表达越高，BAG-1S阳性表达越低，疾病预后越佳。

[1] Toyokawa G，Takenoyama M，Ichinose Y，et al.Multimodality treatment with surgery for locally advanced non-small-cell lung cancer with N2 disease：a review article[J].Clinical Lung Cancer，2014，16（1）：6-14.

[2]陈弢，胡国华.原钙黏蛋白20研究进展[J].重庆医学，2014，43（23）：3088-3090.

[3] Raymond H M，Hermann G，John H L，et al.Outcomes by tumor histology and KRAS mutation status after lung stereotactic body radiation therapy for early-stage non-small-cell lung cancer[J].Clinical Lung Cancer，2015，16（1）：24-32.

[4] Hinitt C A M，Wood J，Lee S S，et al.BAG-1 enhances cell–cell adhesion，reduces proliferation and induces chaperone-independent suppression of hepatocyte growth factor-induced epidermal keratinocyte migration[J].Experimental Cell Research，2010，316（13）：2042-2060.

[5] Eguchi K，Oyama T，Tajima A，et al.Intratumoral gene expression of 5-fluorouracil pharmacokinetics-related enzymes in stage Ⅰ andⅡ non-small cell lung cancer patients treated with uracil-tegafur after surgery：a prospective multi-institutional study in Japan[J].Lung Cancer，2015，87（1）：53-58.

[6]孙晓艳，王亚帝，何东宁，等.BAG-1S和COX-2基因在非小细胞肺癌中的表达及其对预后的意义[J].中国全科医学，2014，16（32）：3840-3845.

[7] Takenaka T，Takenoyama M，Toyozawa R，et al.Concurrent chemoradiotherapy for patients with postoperative recurrence of surgically resected non-small-cell lung cancer[J].Clinical Lung Cancer，2015，16（1）：51-56.

[8]张连民，郝李刚，张华，等.血清癌胚抗原与非小细胞肺癌患者EGFR突变的关系及其对预后的影响[J].中国肿瘤临床，2014，41（17）：1075-1079.

[9]徐宝宁，张磊，田大力，等.RhoA蛋白在人非小细胞肺癌中的表达及临床意义[J].中国医科大学学报，2014，43（8）：710-713.

[10]高亚维，哈敏文.CIP2A在非小细胞肺癌的表达及患者预后分析[J].中国生化药物杂志，2014，34（4）：81-84.

[11] Hattori Y，Satouchi M，Shimada T，et al.A phase 2 study of bevacizumab in combination with carboplatin and paclitaxel in patients with non-squamous non-small-cell lung cancer harboring mutations of epidermal growth factor receptor （EGFR） after failing first-line EGFR-tyrosine kinase inhibitors （HANSHIN Oncology Group 0109）[J].Lung Cancer，2015，87（2）：136-140.

[12]张引子，刘华.鸦胆子油乳注射液联合DP方案治疗非小细胞肺癌的临床疗效[J].中国老年学杂志，2014，34（17）：4766-4767.

[13]郭威早，纪红，严之红，等.紫杉醇和微小RNA对非小细胞肺癌的协同抑制作用[J].中国老年学杂志，2014，22（21）：6147-6149.

[14] Hinitt C A M，Benn T M，Threadgold S，et al.BAG-1L promotes keratinocyte differentiation in organotypic culture models and changes in relative BAG-1 isoform abundance may lead to defective stratification[J].Experimental Cell Research，2011，317（15）：2159-2170.