HPLC法测定林芝地区丹参中丹参酮IIA含量研究

张小红，梁 洁，肖 雪,*，史庆龙

(1.广东省食品药品职业技术学校，广东 广州 510663；2.广东药学院，广东 广州 510006；3.中山大学 南沙研究院，广东 广州 511458)



HPLC法测定林芝地区丹参中丹参酮IIA含量研究

张小红1，梁 洁2，肖 雪2,3*，史庆龙3

(1.广东省食品药品职业技术学校，广东 广州 510663；2.广东药学院，广东 广州 510006；3.中山大学 南沙研究院，广东 广州 511458)

目的：采用高效液相色谱(HPLC)法测定不同采收期丹参不同部位丹参酮IIA的含量。方法：采用HPLC法测定，色谱柱为Phenomenex C18柱(4.60mm×250mm，5μm)；流动相为水(A)—甲醇(B)(75∶25)等度洗脱，流速为1mL/min；检测波长为270nm，柱温25°C。结果：丹参酮IIA含量测定线性范围为3.24～97.2μg/mL，R2=0.999 9，平均加样回收率为99.1%。结论：不同采收期丹参不同部位丹参酮IIA含量有差异。

丹参；丹参酮IIA；含量测定

丹参为唇形科植物(SalviamiltiorrhizaBge.)的干燥根和根茎，具有活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈等功效，广泛用于各种痹证、痛证的临床治疗[1]。丹参是目前国内用量极大的一味中药材，诸多治疗心脑血管疾病中成药制剂均以丹参为主药[2-4]。丹参主要成分为：一类是脂溶性成分，以丹参酮类成分为主[5-8]；一类是水溶性成分，以丹参酚酸类成分为主[9-12]。本文主要研究不同产收期丹参原植物不同部位中丹参酮类主要指标丹参酮IIA的含量变化，现具体报道如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent 1260 Series LC液相色谱系统(美国安捷伦科技有限公司，包括二元梯度泵、二极管阵列检测器、柱温箱、Chemstation化学工作站等)；XS105型电子天平(d=0.01 mg，梅特勒—托利多国际贸易(上海)有限公司)；SL300N型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；XJD250B型微型高速粉碎机(姜堰市银河仪器厂)；Milli-Q超纯水仪(默克密理博公司)。

1.2 材料

丹参酮IIA(批号110766-200619)对照品，购于中国食品药品检定研究院；甲醇(色谱纯，德国默克集团公司)；其他试剂为分析纯(北京现代东方精细化工有限公司)。

丹参全草于2014年9月和10月采自西藏自治区林芝地区，经鉴定为唇形科植物丹参(SalviamiltiorrhizaBge.)。按炮制方法，分别得到含水量≤13%的丹参药材(根茎)[1]、丹参茎、丹参叶，其中茎、叶为丹参根茎剩余部分的混合样品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[1]

色谱柱：Phenomenex C18柱(4.60mm×250mm，5μm)；流动相条件：水(A)-甲醇(B)(75∶25)；洗脱时间：25min；流速：1.0mL/min；检测波长270nm，柱温25°C，进样量为5μL。

2.2 丹参酮IIA对照品溶液制备

精密称取丹参酮IIA对照品1.62mg，置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准品母液。各取标准品溶液适量置于10mL量瓶中，加入甲醇溶液至刻度，摇匀配制一系列不同浓度的混合标准品溶液。

2.3 供试品溶液制备

精密称取丹参粉末(过3号筛)0.3g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，加热回流1h，放冷，用甲醇补足缺失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 空白干扰试验

取供试品溶液、丹参酮IIA对照品溶液和缺丹参空白液，各进样5μL，结果表明丹参酮IIA对照品溶液和供试品溶液均呈现吸收峰，而缺丹参空白液在与对照品相应位置无色谱峰出现，表明该测定无干扰。见图1。

图1 丹参色谱

2.5 线性关系考察

精密吸取丹参酮IIA对照品溶液，分别进样5μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值。以丹参酮IIA对照品浓度(μg/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程为：Y=31.501X-16.653，R2=0.999 9。结果表明，丹参酮IIA在3.24～97.2μg/mL范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

取同一批对照品，连续进样6次，结果显示丹参酮IIA含量的RSD(%)为0.4，说明该方法精密度良好。

2.7 重复性试验

取丹参药材(根)按供试品制备方法平行制备供试品6份，结果丹参酮IIA含量RSD(%)为0.5，说明该方法重复性良好。

2.8 稳定性试验

按供试品溶液制备方法制备供试品，分别于0、2、4、6、8、12、24h进样，结果显示丹参酮IIA含量RSD(%)为0.4，说明供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.9 加样回收率试验

精密称取已知含量的同一组丹参药材，加入各成分对照品适量，按“2.3”项方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件进行分析。结果显示，丹参酮IIA平均加样回收率分别为99.0%、99.4%、98.7%。见表1。

表1 加样回收率考察结果 (%)

2.10 样品测定

按供试品溶液制备方法制备丹参根、茎叶样品，按“2.1”项色谱条件测定，计算含量。见表2。

表2 丹参不同部位丹参酮IIA含量 (%)

3 讨论

本试验按药典方法提取丹参药材、丹参茎、丹参叶中丹参酮IIA成分，按药典方法对丹参酮IIA进行色谱分析，所选方法经典。由表2可知，同处于林芝地区所采集的丹参药材(丹参根)中丹参酮IIA差别较大，两次采集含量差异较大，其RSD(%)高达54.3和10.3；不同采收期丹参酮IIA的含量并不相同，可能由于10月份丹参叶落，丹参酮IIA得以蓄积，含量上升。9月份采集的丹参茎和丹参叶中也含有少量丹参酮IIA，但其含量较低；10月份由于叶落，未能采集理想状态的丹参叶，故仅检测丹参茎。本试验结果表明丹参茎叶存在一定的开发价值。

本试验检测林芝地区处于采收期的丹参多个部位，为后期丹参的深入研究，如不同生长期丹参不同部位(花、叶、茎、根、种子)中丹参酮IIA含量测定，提供研究基础，也为丹参植物资源的综合开发提供数据支持。

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(责任编辑：李岚春)

Determination of Tanshinone IIA ofSalviaMiltiorrhizaBge.Collected from Nyingchi Prefecture by HPLC

Zhang Xiaohong1,Liang Jie2,Xiao Xue2,3,Shi Qinglong3

(1.Guangdong Food and Drug Vocational-Technical School,Guangzhou 510663,China;2.Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510006,China;3.Nansha Research Institute,Sun Yat-sen University,Guangzhou 511458,China)

Objective:To establish a method for Tanshinone IIA for Salvia miltiorrhiza Bge.Methods:The Phenomenex C18analytical column (4.60mm×250mm,5μm) was used.The mobile phases comsisted of H2O and MeOH with isocratic elution.The flow rate was 1 mL/min,the detection wavelength was at 270 nm and the column temperature was at 25°C.Results:The method had good linear relationship within the range 3.24～97.2μg/mL of Tanshinone IIA,with the correlation coefficent higher as 0.999 9.The average recovery was 99.1% of Tanshinone IIA.Conclusion:There were certain concentrations of Tanshinone IIA in different parts of Salvia miltiorrhiza Bge in different harvest.

SalviamiltiorrhizaBge.;Tanshinone IIA;Content Determination

2015-02-15

张小红(1979-)，女，广东省食品药品职业技术学校讲师，研究方向为中药质量控制。E-mail：57388664@qq.com

肖雪(1985-)，男，博士，研究方向为中药质量控制。E-mail：erxiaohappy@163.com

R284

A

1673-2197(2015)12-0017-02

10.11954/ytctyy.201512007