HPLC法测定林芝地区丹参中丹参酚酸B含量

张小红，肖 雪，梁 洁，史庆龙(.广东省食品药品职业技术学校，广东 广州 5066；2.广东药学院，广东 广州 50006；.中山大学南沙研究院，广东 广州 5458)



HPLC法测定林芝地区丹参中丹参酚酸B含量

张小红1，肖 雪2,3，梁 洁2*，史庆龙3
(1.广东省食品药品职业技术学校，广东 广州 510663；2.广东药学院，广东 广州 510006；3.中山大学南沙研究院，广东 广州 511458)

目的：采用高效液相色谱(HPLC)法测定林芝地区产丹参不同部位中丹参酚酸B的含量。方法：采用HPLC法，色谱柱为Phenomenex C18柱(4.60mm×250mm，5μm)；流动相为甲酸-水-甲醇-乙腈(1∶59∶30∶10)，等度洗脱；流速为1mL/min；检测波长为286nm；柱温为25℃。结果：丹参酚酸B含量测定的线性范围为0.039 6～0.792mg/mL，相关系数为0.999 0，平均加样回收率为99.40%。结论：丹参茎、叶中均含有丹参酚酸B，可以进行相应资源的开发。

丹参；丹参酚酸B；含量测定；HPLC

丹参为唇形科植物SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根和根茎，具有活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈等功效[1]，经组方配伍后广泛用于治疗心脑血管疾病[2-4]。丹参目前多以丹参酚酸类成分为主要研究对象[5-7]。本文主要研究多个产区丹参中的主要指标成分丹参酚酸B的含量。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent 1260 series LC液相色谱系统(包括：二元梯度泵、二极管阵列检测器、柱温箱、Chemstation化学工作站等)(美国安捷伦科技有限公司)，MJ-33快速水分测定仪(梅特勒-托利多国际贸易(上海)有限公司)，XS205型电子天平(d=0.01mg，梅特勒-托利多国际贸易(上海)有限公司)，SL300N型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)，XJD250B型微型高速粉碎机(姜堰市银河仪器厂)，Milli-Q超纯水仪(默克密理博公司)。

1.2 材料

丹参酚酸B(批号111562-201313)对照品(购于中国食品药品检定研究院)；甲醇、乙腈(色谱纯，德国默克集团)，其他试剂为分析纯(北京现代东方精细化工有限公司)。

丹参全草于2014年9月底采自西藏自治区林芝地区，经鉴定为唇形科植物丹参(SalviamiltiorrhizaBge.)。按照炮制方法，分别得到含水量≤13%的丹参药材(根茎)、丹参茎、丹参叶，其中茎、叶为丹参根茎剩余部分的混合样品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[1]

色谱柱为Phenomenex C18柱(4.60mm×250mm，5μm)；流动相为甲酸-水-甲醇-乙腈(1∶59∶30∶10)，等度洗脱；洗脱时间：15min；流速为1mL/min；检测波长为286 nm；柱温为25℃；进样量：5μL。

2.2 丹参酚酸B对照品溶液制备

精密称取丹参酚酸B对照品7.92mg，置于10mL容量瓶中，用75%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准品母液。将标准品溶液各取适量置于10mL容量瓶中，加入75%甲醇溶液至刻度，摇匀配制成一系列不同浓度的混合标准品溶液。

2.3 供试品溶液制备

精密称取丹参粉末(过3号筛)约0.2g，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50mL，称定重量，加热回流1h，放冷，用75%甲醇补足缺失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 空白干扰试验

取供试品溶液、丹参酚酸B对照品溶液和缺丹参的空白液，各进样5μL，结果表明丹参酚酸B对照品溶液和供试品溶液均呈现吸收峰，而缺丹参空白液在与对照品相应的位置上没有色谱峰出现(见图1)，表明本测定无干扰。

图1 丹参色谱

2.5 线性关系考察

精密吸取丹参酚酸B对照品溶液，分别进样5μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值。以丹参酚酸B对照品浓度(mg/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：y=4 994.9x-10.765，R2=0.999 0，丹参酚酸B在0.039 6～0.792mg/mL范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

取同一对照品连续进样6次，结果丹酚酸B含量的RSD为0.8%，说明本方法精密度良好。

2.7 重复性试验

取丹参药材(根)按照供试品制备方法平行制备供试品6份，结果丹参酚酸B含量的RSD为3.0%，说明本方法重复性良好。

2.8 稳定性试验

按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12、24h进样，结果丹参酚酸B含量的RSD为1.1%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.9 加样回收率试验

精密称取已知含量的同一组丹参药材，加入各成分对照品适量，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件进行分析。结果显示，丹参酚酸B的平均加样回收率分别为99.40%。结果见表1。

表1 加样回收率考察结果 (%)

2.10 样品测定

按照供试品溶液的制备方法制备丹参根、茎叶样品，按照上述色谱条件测定，计算含量，结果见表2，其中干品是扣除了水分之后的含量。

表2 丹参不同部位丹参酚酸B含量 (%)

3 讨论

本试验按照药典方法提取丹参药材、丹参茎、丹参叶中的丹参酚酸B，按照药典方法对丹参酚酸B进行了色谱分析，所选方法经典。丹参药材中水分的测定采用了梅特勒-托利多MJ-33快速水分测定仪。

由表2可知，同处于林芝地区，所采集的丹参药材(丹参根)和干品中所含丹参酚酸B的含量差别较小，其RSD分别为13.4%和13.6%，提示该地区丹参质量稳定性较好，丹参中所含水分均≤10.0%，满足药典要求。9月份采集的丹参茎和丹参叶中也含有相当浓度的丹参酚酸B，表明丹参茎、叶存在一定的开发价值，也扩大了丹参酚酸类成分的来源。

本试验检测了林芝地区多个产地丹参中丹参酚酸B的含量，为后期丹参的深度研究，如不同生长期丹参不同部位(花、叶、茎、根、种子)中丹参酚酸B的含量测定提供了研究基础，也为丹参植物资源的综合开发提供了有效的数据支持。

[1] 国家药典委员会.中国人民共和国药典[M].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：71-72.

[2] 范雪梅.中药复方双龙方作用机理的系统生物学研究[D].上海：华东理工大学，2010.

[3] 李翔，吴磊宏，范骁辉，等.复方丹参方主要活性成分网络药理学研究[J].中国中药杂志，2011，36(21)：2911-2915.

[4] 马丙祥，董宠凯. 丹参的药理作用研究新进展[J].中国药房，2014，25(7)：663-665.

[5] 薛静，叶正良，李德坤，等. HPLC同时测定丹参多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量[J]. 中国实验方剂学杂志，2013，19(3)：70-73.

[6] 卢君蓉，傅超美，刘芳，等. 星点设计-效应面法优选丹参中丹参总酚酸的提取工艺[J].中成药，2012，34(7)：1373-1376.

[7] 林徐剑，沈莹，施晓萍.丹参原药材和饮片与不同温度的水接触后丹酚酸B的含量变化[J].中国药学杂志，2014，49(17)：1506-1507.

(责任编辑：魏 晓)

Determination of Salvianolic Acid B ofSalviamiltiorrhizaBge. Collected from Nyingchi Prefecture by HPLC

Zhang Xiaohong1, Xiao Xue2,3,Liang Jie2*,Shi Qinglong3
(1.Guangdong Food and Drug Vocational-Technical School, Guangzhou 510663，China;2.Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006，China;3.Nansha Research Institute, Sun Yat-sen University，Guangzhou 511458，China)

Objective:To establish a method for Salvianolic acid B forSalviamiltiorrhizaBge. Methods:The Phenomenex C18analytical column (4.60 mm×250 mm, 5μm) was used. The mobile phases comsisted of Formic acid, H2O, Methanol and Aacetonitrile (1∶59∶30∶10) with isocratic elution. The flow rate was 1 mL/min, the detection wavelength was at 286 nm and the column temperature was at 25℃.Results:The method had good linear relationship within the range 0.0396～0.792 mg/mL of Salvianolic acid B, with the correlation coefficent higher as 0.999 0. The average recovery was 99.40% of Salvianolic acid B.Conclusion:There were certain concentrations of Salvianolic acid B in stem and leaves ofSalviamiltiorrhizaBge.

SalviamiltiorrhizaBge.；Salvianolic acid B；Determination;HPLC

2015-01-07

张小红(1979-)，女，广东省食品药品职业技术学校讲师，研究方向为中药质量控制。

梁洁(1969-)，女，广东药学院副教授，研究方向为中药质量控制与安全评价。E-mail：liangjie69@126.com

R284.2

A

1673-2197(2015)11-0045-02

10.11954/ytctyy.201511018