熟地配方颗粒质量标准研究

王科锋(武汉市中医医院,湖北 武汉 430014)



熟地配方颗粒质量标准研究

王科锋
(武汉市中医医院,湖北 武汉 430014)

目的：建立熟地配方颗粒的质量标准。方法：采用高效液相色谱法对熟地配方颗粒的主要活性成分毛蕊花糖苷进行定量分析。结果：毛蕊花糖苷在0.0135 3～0.541 2μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 6)；平均加样回收率为98.04%,RSD为1.65%(n=6)。结论：本方法简便、准确、重复性好,可作为熟地配方颗粒的质量控制方法。

熟地黄；配方颗粒；高效液相色谱法；毛蕊花糖苷

熟地为玄参科植物地黄的块根,具有补血滋阴的功效,可用于治疗血虚萎黄,眩晕,心悸失眠,月经不调,崩漏,亦可用于肾阴不足的潮热骨蒸、盗汗、遗精、消渴。熟地配方颗粒是由单味中药饮片经提取浓缩制成,供中医临床配方用的制剂,其有效成分、性味、主治、功效和饮片完全一致,且不用煎熬而直接热水冲服,服用简单方便,疗效确切,被越来越多患者认可,但其缺乏有效的质量控制标准,导致市面上流通的熟地配方颗粒质量不一,疗效不稳定。本实验采用高效液相色谱法对熟地配方颗粒主要活性成分毛蕊花糖苷的含量进行测定[1],为熟地配方颗粒的质量控制提供有效手段。

1 仪器与试药

1.1 实验仪器

日本岛津高效液相色谱仪(LC-20AD泵、SIL-20A自动进样器、SPD-M20A紫外检测器、LC-SoLution色谱工作站)； KQ-500PV型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司,40W,100 Hz)；FA2004电子分析天平(上海天平仪器厂,万分之一)。

1.2 实验试药

毛蕊花糖苷对照品(批号：111530-201310,中国食品药品检定研究院,含量：93.3%)；熟地配方颗粒(江阴天江药业有限公司，4g/袋,相当于饮片10g)；0.1%醋酸溶液；乙腈为色谱纯；甲醇为分析纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：ODS Phenomenex Gemini C18柱(250mm×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈-0.1%醋酸溶液(16∶84)；流速：1.0mL·min-1；检测波长：334nm；进样量：10μL；柱温：30℃,理论塔板数不低于5 000。

2.2 溶液配制

2.2.1 对照品溶液配制 精密称取毛蕊花糖苷对照品14.5mg,置于50mL容量瓶,加流动相溶解,定容,得浓度为270.6μg·mL-1的毛蕊花糖苷对照品溶液,精密量取2mL置入10mL容量瓶中,加流动相定容,得浓度为54.12μg·mL-1的毛蕊花糖苷对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液配制 精密称取熟地配方颗粒2g,置锥形瓶中,精密加入80%甲醇50mL,称重,在40W,60Hz条件下超声30min,放冷至室温,以80%甲醇补足失重,摇匀滤过,即得供试品溶液。

2.3 专属性考察

取毛蕊花糖苷对照品溶液、供试品溶液各进样10μL,按“3.1”色谱条件测定,记录色谱图。结果显示供试品溶液中毛蕊花糖苷分离度好,其他成分对毛蕊花糖苷的测定无干扰。见图1。

2.4 线性关系考察

精密量取54.12μg·mL-1毛蕊花糖苷对照品溶液0.25、0.5、1.0、2.5、5.0mL分别置于10mL容量瓶中,流动相定容摇匀,得浓度为1.353、2.706、5.412、13.53、7.06μg·mL-1的对照品溶液,各进样10μL,以毛蕊花糖苷浓度为横坐标,峰面积为纵坐标作回归方程,得线性回归方程Y=16 763X-7 948.9；r=0.999 6。结果表明毛蕊花糖苷在1.353～54.12μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

取54.12μg·mL-1毛蕊花糖苷对照品溶液进样10μL,按“2.1”色谱条件重复进样 6次,以毛蕊花糖苷峰面积计算RSD为0.92%,表明仪器精密度良好。

图1 各溶液HPLC图谱(1为毛蕊花糖苷峰)

2.6 稳定性试验

取“2.2.2”项下供试品溶液,在0、2、4、8、24、48h进样10μL,按“2.1”色谱条件测定,计算得RSD为1.14%,说明供试品溶液在48h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

取同一批熟地配方颗粒适量,按“2.2.2”供试品溶液的制备方法分别制备6份供试品溶液,按“2.1”色谱条件测定毛蕊花糖苷的峰面积,得RSD为1.58%,表明此方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密称取已知含量的熟地配方颗粒1g共6份,分别加入0.9mL 270.6 μg·mL-1的毛蕊花糖苷对照品溶液,按“2.2.2” 项供试品制备方法制备,按“2.1”色谱条件各进样10μL,测定毛蕊花糖苷的峰面积,样品中毛蕊花糖苷的平均加样回收率为98.04%,RSD为1.65% 。详见表1。

2.9 样品含量测定

取三个批号的熟地配方颗粒样品,每个批号3份,每份精密称取2g,按“2.2.2”项下供试品制备方法制备供试品溶液,按“2.1”色谱条件各进样10μL,测定毛蕊花糖的峰面积,代入回归方程计算,见表2。熟地配方颗粒中毛蕊花糖苷的平均含量分别为486.35、484.11、488.26μg·g-1,RSD分别为1.51%、0.51%、0.63% 。

表1 加样回收率结果

表2 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 供试品溶液制备方法确定

本实验中,比较了加热回流提取法和超声提取法对熟地配方颗粒中毛蕊花糖苷的提取效率,得出超声提取法提取效率高且所用时间较短,故选用超声提取法。在提取溶剂方面,比较了乙醇、甲醇,最后测出用甲醇作提取溶剂时,毛蕊花糖苷含量较高,且对不同浓度甲醇溶液做比较,最终选定80%甲醇溶液作提取溶剂。对超声提取时间确定时,发现超过半小时,毛蕊花糖苷含量不再增加,故提取时间选定为半小时。

3.2 含量限度确定

本实验所用的熟地配方颗粒规格为4g/袋,相当于饮片10g,按2010版《中国药典》规定熟地中毛蕊花糖苷含量不得少于0.02%,则熟地配方颗粒中毛蕊花糖苷的含量不得少于500μg·g-1,而实验测出三个批号熟地配方颗粒中毛蕊花糖苷的平均含量为486.35,484.11,488.26μg·g-1,均小于500μg·g-1,查阅相关文献[2-4]得出毛蕊花糖苷不稳定,在熟地配方颗粒制备过程中含量减少,建议以毛蕊花糖苷含量不得少于400μg·g-1为熟地配方颗粒的质量标准。

本实验操作简便,精密度高,稳定性良好,能准确测出熟地中毛蕊花糖苷的含量,可用于熟地配方颗粒的质量控制与综合评价。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：化学工业出版社,2010:115-116.

[2] 吴培培,闫明,霍仕霞.苯乙醇苷类化合物的研究进展[J].医药导报,2011,30(10):1316-1319.

[3] 尚伟庆.地黄炮制过程中毛蕊花糖苷变化的研究[J].新中医,2014,46(5):209-211.

[4] 王宏洁,金亚红,李鹏跃,等.鲜、生、熟地黄药材中3种活性成分含量的比较[J].中国中药杂志,2008,33(15):1923-1925.

(责任编辑：魏 晓)

2015-01-09

王科锋(1990-),男,湖北省武汉市中医医院药师,研究方向分为临床药学。

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1673-2197(2015)11-0040-02

10.11954/ytctyy.201511016