HPLC-ELSD法同时测定泽泻药材中3种有效成分含量的研究

郝燕勤

(赤峰学院 医学院，内蒙古 赤峰 024000)



HPLC-ELSD法同时测定泽泻药材中3种有效成分含量的研究

郝燕勤

(赤峰学院 医学院，内蒙古 赤峰 024000)

目的：建立泽泻药材中23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇A三种三萜化合物的含量测定方法，比较泽泻药材不同产地及不同炮制方式中3种三萜化合物的含量。方法：采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)，色谱柱：Alltima C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)；柱温：室温；流动相：0.1%甲酸乙腈-水(70∶30)；流速：1.0mL/min，ELSD气体流速：2.5L/min；漂移管温度：90℃。结果：23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇A的线性范围分别为4.0～62μg(r=0.999 8)、4.8～68μg(r=0.999 7)、4.4～70μg(r=0.999 5)，平均回收率分别为97.75%、98.66%、99.13%。结论：该方法简便灵敏，快速准确，重复性好，可用于泽泻药材的质量评价。

泽泻；23-乙酰泽泻醇B；24-乙酰泽泻醇A；泽泻醇A；HPLC-ELSD法

泽泻(AlismaOrientalis(Sam) Juzep.)为泽泻科泽泻属多年生水生植物，干燥块茎入药，性寒，味苷、淡。泽泻为我国常用的传统中药，据《中国药典》(2010版)[1]记载，泽泻具有利水渗湿、泄热、化浊降脂之功效，可用于治疗小便不利、水肿胀满、高脂血症等疾病。泽泻以萜类成分[2]为主，还含有多糖、少数黄酮、木脂素、植物甾醇等成分报道。其中，萜类主要以原萜烷型四环三萜和愈创木烷型倍半萜类化合物为主。研究表明，23-乙酰泽泻醇B和24-乙酰泽泻醇A为主要活性成分[3]，同时也是质量控制指标；24-乙酰泽泻醇A由于结构不稳定，长时间溶解在质子溶剂中最终转化为泽泻醇A。本研究选取23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇A 三种三萜化合物进行含量测定[4]，由于三种化合物的紫外光谱图为末端吸收，应采用HPLC-ELSD法[5]在同一色谱条件下进行测定。

1 材料与试药

1.1 材料

仪器：FCV-10AL vp色谱仪(日本岛津)；蒸发光散射检测器(Alltech ELSD-2000ES)； 十万分之一电子分析天平(美国Denvor公司)；KQ3200 超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。对照品：23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇A对照品为实验室自制。通过波谱方法(1H NMR 和13C NMR)鉴定，且纯度达98%以上。

药材：不同产地及炮制方式的泽泻药材，购于四川、福建及广州市清平药材市场、安徽亳州药材市场， 均由我校中药学院鉴定。

1.2 试药

试剂：甲酸、甲醇和乙腈为色谱纯(Merck)；液相用水为娃哈哈纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Alltima C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)；流动相为1%甲酸乙腈-水(70:30)；流速：1.0mL/min；柱温：室温；ELSD参数：漂移管温度90℃，雾化气体流速2.5L/min。

2.2 对照品溶液的配制

精密称取23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇A对照品适量，加甲醇分别制成浓度为0.514 4、0.532 4、0.490 4mg/mL的储备用溶液。

2.3 供试品溶液的配制

取泽泻药材干燥块茎适量，粉碎成细粉，精密称取500mg，精密加入80%的甲醇25mL，称重，超声提取30min，冷却，称重补重，混匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得。

2.4 专属性试验

分别取上述对照品溶液、供试品溶液进行测定。结果见图1。

2.5 线性关系考察

精密吸取不同体积23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇A对照品储备液，逐级稀释，制备一系列不同浓度的对照品混合溶液，分别精密吸取该梯度溶液20μL进样，以峰面积的自然对数为横坐标，以进样量的自然对数为纵坐标，制作标准曲线，结果表明3种成分线性关系良好。见表1。

2.6 精密度试验

精密吸取23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇A的对照品混合溶液(浓度分别为51.4、53.2、49.0μg/mL)，在上述色谱条件下，连续进样6次，记录峰面积，结果显示：23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇A的RSD分别为0.82%、1.3%、1.4%，表明仪器精密度良好。

表1 3种指标成分线性关系结果 (n=6)

2.7 重复性试验

取同一批泽泻药材(编号ZX1)粉末，按“2.3”项方法制得6份供试品溶液，进样分析，结果显示：23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇A的平均含量分别为0.08%、0.03%、0.01%，RSD分别为1.2%、1.9%、2.2%。

2.8 稳定性试验

按“2.3”项方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12h测定，每次进样20μL。测定23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇A三个化合物的峰面积，计算RSD值分别为0.22%、0.28%、0.47%。表明三种化合物的供试品溶液在12h内基本稳定。

2.9 加样回收率试验

取已知含量的泽泻药材粉末(编号ZX1)，精密称取0.5g，共9份，每3份为一组，分别准确加入“2.2”项对照品溶液0.5、1.0、1.5mL，按“2.3”项方法操作，依法测定。通过计算，23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇A三种化合物的平均回收率分别为97.75%、98.66%、99.13%，RSD值分别为0.7%、1.4%、1.9%。

2.10 样品含量测定

分别取市售不同产地及不同炮制方法的泽泻药材粉末，每个编号平行2份，按“2.3”项方法制备供试品溶液，测定结果见表2。

3 讨论

3.1 检测器选择

泽泻中大多数三萜成分的最大紫外吸收波长为末端吸收，特征性不强，且受流动相影响会产生基线漂移现象。本研究中3种四环三萜化合物结构中仅有一个双键、一个羰基，且不形成共轭，实验比较的UV 210nm和ELSD检测结果同样证明，ELSD的基线噪音明显小于210nm。因此，选择ELSD检测更合理。

3.2 流动相选择

通过试验结果比较可得，乙腈较甲醇的分离度好，更适合漂移管的较高温度；同时，酸性环境会使泽泻醇在HPLC分析中保持良好的峰形，有利于泽泻药材分析。因此，流动相选择0.1%甲酸乙腈-水系统。

表2 不同来源及不同炮制方式泽泻药材中3种有效三萜成分含量测定结果

4 结论

文献报道，泽泻中的三萜类成分具有明显的降血脂活性，《中国药典》(2010版)泽泻药材项下只以单一成分23-乙酰泽泻醇B作为标准品进行含量测定。本实验建立了同时测定泽泻药材中23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇A三种有效成分的高效液相色谱法，且选择ELSD作为检测器，方法灵敏度高，简便快速，重复性好，为深入研究泽泻药材的质量控制提供一定科学依据。

比较不同产地及炮制方法提取泽泻药材中23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇A含量，结果发现不同产地及不同炮制提取方法泽泻药材中三种成分略有差别，原因可能与采集时间、海拔高度有关。有文献报道显示，泽泻因春、秋季节采集、炮制提取方法不同，其利尿作用强度亦不同。因此，今后对泽泻的化学成分、质量控制、活性评价方面，应考虑采收季节、炮制方式等影响因素。

[1] 国家药典委员会.中国药典[M]. 南京：南京大学出版社，2010.

[2] 朱玉岚，彭国平. 泽泻的萜类化学成分研究进展[J]. 天然产物研究与开发， 2006(18)：348-351.

[3] 彭贤,黄舒,郦皆秀,等.泽泻属植物化学成分与药理活性[J].国外医药·植物药分册, 2000, 15(6)：245-247.

[4] 周坛树, 施大文. 不同产地泽泻中主要成分的HPLC测定[J]. 中药材, 2000, 23(11)：687-688.

[5] 黄永焯, 王宁生. HPLC-ELSD在天然药物分析中的应用[J]. 中药新药与临床药理, 2001, 12(6)：444-448.

(责任编辑：李岚春)

2015-06-23

郝燕勤(1969-)，女，蒙古族，内蒙古赤峰学院中级实验师，研究方向为药学分析。

R284.2

A

1673-2197(2015)22-0032-02

10.11954/ytctyy.201522013