RP-HPLC法测定咳喘宁片中苦杏仁苷含量研究

王莎莎

(抚顺市药品检验检测中心，辽宁 抚顺 113000)



RP-HPLC法测定咳喘宁片中苦杏仁苷含量研究

王莎莎

(抚顺市药品检验检测中心，辽宁 抚顺 113000)

目的：建立RP-HPLC法测定咳喘宁片中苦杏仁苷含量。方法：选用Agilent Eelipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液(23∶77)，流速为1.0mL/min，检测波长207nm，柱温30℃。结果：苦杏仁苷在0.071～0.702μg范围内呈良好线性关系，相关系数R2=0.999 6，苦杏仁苷平均回收率为99.16%，RSD=0.93%。结论：采用RP-HPLC法可用于测定咳喘宁片中苦杏仁苷的含量，通过方法学考察验证，该方法精密度高、稳定性良好，方法操作简便、可行性高。

咳喘宁片；苦杏仁苷；RP-HPLC法；含量

咳喘宁片具有宣通肺气、止咳平喘之功效，可用于治疗支气管哮喘、咳嗽、老年痰喘等疾病。本研究运用反相高效液相色谱法测定苦杏仁苷的含量[1-2]，为提高完善咳喘宁片的质量标准提供可靠依据。

1 材料与仪器

1.1 仪器

Agilent Eelipse高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱工作站( 美国Agilent Eelipse公司); Agilent Eelipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；AB-135型万分之一电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

1.2 药材与试剂

乙腈(色谱纯，美国Fisher公司)；甲醇(分析纯，北京化工厂)，磷酸(分析纯，北京化工厂)，水为超纯水(浙江杭州娃哈哈集团)，其他所用试剂均为分析纯。苦杏仁苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号为110820-201305)；咳喘宁片 (先声药业有限公司，国药准字Z20043845)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

以十八烷基键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-0.05%磷酸水溶液(23∶77)。流速1.0mL/min；检测波长207nm；柱温30°C；进样量10μL，理论塔板数按苦杏仁苷峰计算应不低于7 000。

2.2 对照品溶液的制备

取苦杏仁苷对照品适量，加入甲醇溶液溶解，制成浓度为35μg /mL的苦杏仁苷溶液，备用[3]。

2.3 样品溶液的制备

取咳喘宁片样品适量，研细，精密称取粉末1.021g，精密量取50mL甲醇溶液，加入锥形瓶中，称重，超声处理30min后取出，放凉后再次称定样品溶液和锥形瓶的总重量，计算缺失重量，并加甲醇补足，混匀，过滤，取滤液10mL移入50mL容量瓶中，加甲醇定容，混匀，经0.45μm的滤膜过滤，备用[4]。测定结果图1、图2。

图1 对照品高效液相色谱

图2 供试品高效液相色谱

2.4 线性关系考察

精密吸取苦杏仁苷对照品溶液0.071、0.175、0.351、0.527、0.702μg注入液相色谱仪，以峰面积积分值为纵坐标，以进样量为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程为：Y=403 986X+305.71，R2=0.999 6。结果表明：在0.071～0.702μg线性范围内，样品浓度与峰面积线性关系良好。

图3 苦杏仁苷标准曲线

2.5 精密度试验

吸取10μL精密量取“2.2”项配制的对照品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，记录对照品苦杏仁苷峰面积积分值，并计算考察精密度，RSD值为0.27%。结果表明该方法精密度良好。

2.6 稳定性试验

取供试品溶液5份，分别放置0、6、9、12、18、24h后，依

次进样10μL，测定苦杏仁苷峰面积值(n=6)，计算苦杏仁苷的含量。结果显示：在24h内RSD值为1.12%，表明该制剂在24h内基本稳定。

2.7 重复性试验

精密称取对照品溶液，连续进针，进样量为10μL，精密称取“2.3”项咳喘宁片样品溶液6份，分别测定峰面积值。结果显示：苦杏仁苷含量RSD值为1.06%，表明该方法有较好重复性。

2.8 加样回收率试验

精密称取同一批次咳喘宁片粉末共6份，精密加入对照品(浓度为35μg/mL)，依次进样测定，计算回收率、RSD值。结果表明：样品的平均回收率为99.16%，RSD值为0.93%，该法准确性较好，方法可行。见表1。

表1 回收率试验结果 (n=6)

2.9 含量测定结果

取3批咳喘宁片制备供试品溶液，按上述色谱条件测定含量，根据对照品与样品的峰面积计算苦杏仁苷含量。结果表明：本品苦杏仁苷含量应不低于0.244mg/g。结果见表2。

表2 样品中苦杏仁苷含量测定结果

3 讨论

咳喘宁片由麻黄、苦杏仁、石膏、百部、桔梗等多味中药组成，方中苦杏仁具有降气、止咳、平喘等功效，临床常用于治疗咳嗽气喘、胸满痰多、肠燥便秘等疾病[5]。本研究建立RP-HPLC法测定咳喘宁片中苦杏仁苷含量，依据《中国药典》(2010版)苦杏仁项的要求，并通过查阅大量参考文献，采用TU-1810紫外-可见分光光度计在200～600nm波长范围内测定，对苦杏仁苷的70%乙醇溶液进行紫外波长扫描，结果表明苦杏仁苷在207nm处有最大吸收峰，与其他组分可较好分离，故其检测波长选择为207nm。苦杏仁苷测定流动相选择乙腈-0.1%磷酸水溶液(8∶92)、乙腈-0.05%磷酸水溶液(23∶77)两种，其中以乙腈-0.05%磷酸水溶液(23∶77)作为流动相，供试品色谱中苦杏仁苷峰型对称，组分分离度较好，且苦杏仁苷峰与杂质峰分离效果良好。

[1] 娄朝暄. 咳喘宁片中盐酸麻黄碱含量的HPLC法测定[J].中国医药工业杂志,2015,44(8):804-806.

[2] KOOJY，HWANG E Y，CHO S,et al.Quantitative determ ination of am ygdalin epimers from arm eniacae sem en by liquid chromatography[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 2005, 814 (1):69-73.

[3] 吴向阳，仰玲玲，仰榴青.RP-HPLC法同时测定野葛的根、茎和叶中苦杏仁苷、大豆苷和大豆苷元的含量[J].食品科学,2009，30(14)：248-252.

[4] 寇凯,许宁侠,申烨华. 反相高效液相色谱法测定长柄扁桃仁产品中苦杏仁苷含量[J]. 分析科学学报，2013，29(3)：367-370.

[5] 刘睿,王宁,刘志辉. RP-HPLC同时测定宣肺止咳口服液中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱及苦杏仁苷含量[J]. 中国实验方剂学杂志，2011，17(16)：91-93.

(责任编辑：李岚春)

2015-06-26

王莎莎(1983—)，女，硕士，辽宁省抚顺市药品检验检测中心主管药师，研究方向为药物分析。

R286.0；R284.2

A

1673-2197(2015)22-0034-02

10.11954/ytctyy.201522014