墓头回总黄酮提取工艺研究

王雅琦

(哈药集团制药六厂，黑龙江 哈尔滨 150056)



墓头回总黄酮提取工艺研究

王雅琦

(哈药集团制药六厂，黑龙江 哈尔滨 150056)

目的：探讨墓头回总黄酮的最佳提取工艺。方法：采用超声提取法提取墓头回中的总黄酮，采用比色法测定总黄酮含量，以总黄酮得率为指标，考察乙醇浓度、料液比和超声时间对墓头回总黄酮提取率的影响，利用响应面分析法确定墓头回总黄酮的最佳提取工艺。结果：墓头回总黄酮的最佳提取工艺为：加30倍量的60%乙醇超声提取20min。结论：该提取工艺得率高、操作简便，具有周期短、精度高等优点，可用于工业化大生产。

墓头回；总黄酮；提取工艺

墓头回为败酱科败酱属植物异叶败酱或糙叶败酱的根茎和根，性凉，味苦、微酸涩，根及全草入药用，具有燥湿止带、收敛止血、清热解毒的功效，主治赤白带下、泄泻痢疾、疮疡肿毒等[1]。近年来国内外学者对墓头回中黄酮类化合物的药理作用进行了研究，在抗肿瘤、抗氧化、抗炎、镇静、镇痛等[2]方面取得了显著进展。超声波辅助提取法是提取天然成分的常用方法[3]。目前关于墓头回总黄酮的最佳提取工艺研究报道较少，本文采用响应面分析法，考察影响提取效果的主要因素，确定最佳提取工艺条件，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

UV-2600紫外-可见分光光度计、KQ5200超声清洗器、电子分析天平等。

1.2 试药

槲皮素(批号：100081-201481)，购于中国食品药品检定研究院；墓头回，购于安徽亳州；其他试剂均为分析纯。

2 方法学考察

2.1 对照品溶液制备

精密称取槲皮素对照品7.3mg，置于25mL容量瓶中，加适量60%乙醇，超声片刻使之溶解，加60%乙醇定容至刻度，得浓度为0.292mg/mL的对照品溶液，备用。

2.2 供试品溶液制备

称取1.0g墓头回药材粗粉，加20mL 60%乙醇超声提取20min，过滤，用60%乙醇定容至25mL容量瓶中，得浓度为40mg/mL的供试品溶液，备用。

2.3 最大吸收波长确定

精密吸取对照品溶液1.0mL，置于25mL容量瓶中，按照“2.4”项下显色方法操作，于200～800nm波长范围内进行光谱扫描，确定其最大吸收波长为480nm。

2.4 线性关系考察

精密吸取对照品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mL，分别置于25mL容量瓶中，加60%乙醇至6mL，加5% NaNO2溶液1.0mL，放置6min，加10%Al(NO3)3溶液1.0mL，放置6min，加10%NaOH溶液10mL，定容至刻度，摇匀，放置15min，以相应试剂作空白对照，于480nm处测定吸光度。以吸光度(y)为纵坐标，以样品浓度x为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：y=0.265 5x+0.025 3，r=0.999 0。结果表明：槲皮素在0.012～0.047mg范围内与吸光度值呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液1.0mL，置于25mL容量瓶中，按照“2.4”项下方法测定吸光度，平行测定6次，计算得吸光度RSD为0.25%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取同一对照品溶液1.0mL，置于25mL容量瓶中，按照“2.4”项下方法，分别于放置30、60、90、120、150、180min后测定吸光度，计算得RSD为1.49%，表明样品溶液在180min内稳定性良好。

2.7 重复性试验

精密吸取同一供试品溶液1.0mL，置于25mL容量瓶中，按照“2.4”项下方法测定吸光度，平行测定6次，计算得RSD为0.21%，表明该方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密称取9份已知总黄酮含量的药材粉末，随机分为3组，各组分别精密加入已知含量80%、100%、120%的槲皮素对照品，按照供试品制备方法制备样品溶液，于“2.4”项下显色条件测定总黄酮含量，计算得加样回收率为99.0%，RSD为1.67%。

3 单因素考察

3.1 乙醇浓度考察

称取1g墓头回药材粗粉5份，固定超声时间为20min、料液比为1∶20，分别采用浓度为40%、50%、60%、70%、80%的乙醇提取，测定其吸光度，结果见图1。乙醇浓度选取40%、50%和60%作为提取工艺优化的3个水平。

图1 吸光度响应面分析

3.2 料液比考察

称取药材(过60目筛)适量，固定超声时间为20min、乙醇浓度为60%，分别用料液比为1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50进行提取，测定其总黄酮含量，选择三个最佳的料液比进行考察，分别为1∶10、1∶20、1∶30。

3.3 超声时间考察

称取药材(过60目筛)适量，固定乙醇浓度为60%、料液比为1∶20，分别超声提取10、20、30、40、50min，测定其总黄酮含量，选择3个最佳的超声时间进行考察，分别为10、20、30min。

3.4 提取工艺优化

根据Box-Benhnken的中心组合实验设计原理，综合单因素实验结果，在选定温度为25℃的前提下，选择乙醇浓度、料液比和超声时间3个因素作为自变量设计响应面分析实验，分别以A、B、C表示，每个自变量的低、中、高水平分别以-1、0、1 进行编码，以墓头回总黄酮提取得率作为响应值Y，结果见表1。采用Design-Expert软件对表1结果进行响应面回归分析，得拟合方程：含量=-370.01175+10.83762×A+8.29930×B+2.89508×C-0.025875×A×B-0.10223×A2-0.12781×B2-0.076280×C2。由方差分析可知，拟合方程有较高的拟合度，理论最佳提取工艺为：加30倍的60%乙醇超声提取20min，药材有效成分能最大程度地溶出。

表1 响应面分析实验结果

注：共有17 个实验，其中12 个为析因实验，5个为中心实验，以估计误差。

4 讨论

传统的数理统计方法往往采用正交设计或均匀设计，可同时考虑多种因素，寻求最佳因素水平组合，但其不能在给出的整个区域中找出因素和响应值之间明确的函数表达式，即回归方程，因而无法找到整个区域中因素的最佳组合和响应值的最优值。响应面分析方法是通过中心组合实验研究几种实验因素间交互作用的一种回归分析方法，具有试验次数少、周期短、回归方程精度高等优点，并可从图形方面分析寻求最优考察因素值。

本实验采用响应面分析法对墓头回总黄酮提取工艺进行研究，实验所确定的提取工艺具有提取得率高、操作简便、成本较低等优点，为墓头回总黄酮提取工艺的优化及墓头回植物资源的开发利用提供了科学依据。

[1] 蔡光先.湖南药物志[M].长沙:湖南科学技术出版社,2004:4857-4859.

[2] 江苏医学院.中药大辞典[M].上海:上海人民出版社,1986.

(责任编辑：尹晨茹)

2015-07-12

王雅琦(1979-)，女，黑龙江省哈药集团制药六厂主管药师，研究方向为药物质量标准及工艺。

R384.1

A

1673-2197(2015)22-0030-02

10.11954/ytctyy.201522012