HPLC法同时测定桂枝配方颗粒中肉桂酸和桂皮醛的含量

刘丹萍，赵惠玲，刘海燕， 李耀华 ，唐 军，韦相忠

(广西中医药大学 药学院,广西 南宁 530200)



HPLC法同时测定桂枝配方颗粒中肉桂酸和桂皮醛的含量

刘丹萍，赵惠玲，刘海燕， 李耀华*，唐 军，韦相忠

(广西中医药大学 药学院,广西 南宁 530200)

目的：建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定桂枝配方颗粒中肉桂酸、桂皮醛含量的方法。方法：色谱柱为Diamonsil C18(2)柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱;检测波长为290nm，柱温为25℃。结果：肉桂酸在0.032 7～0.327 0μg范围内与相应的峰面积呈良好线性关系，桂皮醛在0.642 0～1.926μg范围内与相应的峰面积呈良好线性关系，相关系数分别为0.999 0、0.999 9；肉桂酸、桂皮醛平均回收率分别为96.21%、101.4%，相对标准偏差值(RSD)分别为1.0%、1.6%。结论：该方法简便、快捷，结果准确，重复性好，可作为桂枝配方颗粒含量测定方法。

桂枝配方颗粒；肉桂酸；桂皮醛；高效液相色谱法；含量测定

桂枝为樟科肉桂(Cinnamomumcassiapresl)的干嫩枝条，具有发汗解肌、散寒止痛、温通筋脉、助阳化气、平冲降气之功效[1]。临床上多用于缓和肠胃刺激、强心、改善微循环、抗炎、抗血小板凝集等[2]。桂枝主要含有桂皮醛、桂皮醇、肉桂酸、甲氧基桂皮醛等活性成分[3]。中国药典2010年版只对桂枝进行桂皮醛含量测定[1]，同时鉴别和测定桂枝中桂皮醛和肉桂酸含量的文献报道较少。近年来桂枝的研究报道只有桂皮醛的含量测定，提取工艺、薄层鉴别等研究[4-7]，目前尚无同时测定桂枝配方颗粒中肉桂酸和桂皮醛含量的报道，本研究应用HPLC法同时测定桂枝配方颗粒中肉桂酸、桂皮醛的含量，以期为桂枝配方颗粒的质量控制提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

美国安捷伦公司Agilent1100型高效液相色谱仪，Agilent1100LC化学工作站，KQ5200B型超声波仪器(昆山市超声仪有限公司)；LG16高速微量离心机(上海安亭)；甲醇(色谱纯，分析纯，国药集团化学试剂有限公司)，乙醇(色谱纯，分析纯，国药集团化学试剂有限公司)，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。肉桂酸对照品(中国食品药品检定研究院提供，批号：110786-200503)；桂皮醛对照品 (中国食品药品检定研究院，批号：110710-200212) 均为供含量测定用；桂枝配方颗粒由江阴天江药业有限公司生产，批号：1204025、1202119、1206116。

1.2 色谱条件

色谱柱：迪马Diamonsil C18(2)柱(4.6mm×250mm，5μm)；紫外检测波长为290nm；柱温：25℃；进样体积：10μL；流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱，见表1。

表1 流动相洗脱程序

1.3 样品制备

取桂枝配方颗粒(批号：1204025)0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇25mL，超声提取30min，取出，放冷至室温，用50%乙醇补足损失的重量，摇匀，虑过，用10 000r/min离心10min,取上清液，即得。

1.4 对照品溶液的制备

分别精密称取肉桂酸对照品3.420mg、桂皮醛6.355mg，用甲醇溶解并定溶至10mL容量瓶中。分别配制成肉桂酸浓度为0.136 8mg/mL,桂皮醛浓度为0.214 2mg/mL的对照品溶液。

2 实验结果

2.1 精密度实验

分别精密吸取桂皮醛、肉桂酸对照品10μL，连续进样6次，测峰面积，结果两种对照品溶液RSD分别为1.4%、0.11%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.2 重复性试验

取桂枝配方颗粒(批号：1204025)约0.25g，按上述样品溶液制备方法和色谱条件，平行实验6次，结果肉桂酸平均含量为2.943mg/g、RSD为0.98%(n=6)，桂皮醛平均含量为1.120mg/g、RSD为0.38%(n=6)，表明本方法重现性良好。

2.3 稳定性试验

取桂枝配方颗粒(批号：1204025)0.25g,按上述样品溶液制备方法和色谱条件，分别在0、2、4、6、8、12、24h测定峰面积，结果桂皮醛、肉桂酸的RSD分别为1.4%、1.0%，表明样品在24h内稳定性良好。

2.4 线性关系考察

分别精密称取肉桂酸对照品0.327 0mg、桂皮醛6.420mg，用甲醇溶解并定溶至10mL容量瓶中，分别配制成浓度为肉桂酸0.032 70mg/mL,桂皮醛0.642 0mg/mL的对照品溶液。肉桂酸进样体积分别为1、2、4、6、8、10μL，桂皮醛进样体积分别为1、3、4、5、6μL，以峰面积值为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)绘制标准曲线，结果肉桂酸标准曲线方程为Y=6 763.5X+1.871 3，r=0.999 0(n=5)，桂皮醛标准曲线方程为Y=11 348X+446.43，r=0.999 9(n=5)，结果表明，肉桂酸在0.032 7～ 0.327μg范围内与相应的峰面积呈良好线性关系，桂皮醛在0.642～ 1.926μg范围内与相应的峰面积呈良好线性关系。

2.5 加样回收率试验

称取桂枝配方颗粒(批号：11070166)6份各0.125g，精密称定，精密加入肉桂酸与桂皮醛对照品溶液。按供试品溶液制备项下操作，按上述色谱条件测定含量，计算回收率，得肉桂酸平均回收率为96.21%，RSD为1.0%；桂皮醛平均回收率为101.4%，RSD为1.6%。结果见表2、表3。

表2 肉桂酸加样回收率试验结果

表3 桂皮醛加样回收率试验结果

2.6 样品含量测定

取不同产地桂枝配方颗粒(批号：1204025)0.25g，精密称定，按样品方法制备，在上述色谱条件下，计算含量，结果见表4。

3 讨论

3.1 提取时间选择

采用30min、45min、60min不同的提取时间，结果30min与45min、60min差别不大，故采用45min为提取时间。

表4 桂枝配方颗粒样品含量测定结果

3.2 提取溶剂选择

供试品溶液的处理过程中，曾尝试采用50%、75%、100%不同浓度的甲醇和乙醇作为提取溶剂，50%的溶剂提取效果最好，甲醇与乙醇提取含量差别不大，从环保的方面考虑，选择50%的乙醇作为提取溶剂。

本研究以HPLC法测定桂枝配方颗粒中肉桂酸、桂皮醛的含量，实验方法简便、快速、准确度高，从不同批号的测定结果来看，可以作为桂枝配方颗粒中肉桂酸和桂皮醛的含量测定方法。

[1] 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010.

[2] 肖培根.新编中药志[M].第3卷.北京:化学工业出版社，2002:575.

[3] 刘江云，杨学东，徐丽珍，等.桂枝的化学成分研究[J].中草药，2002,33(8)：681-683.

[4] 梁奇，吴宗彬.HPLC测定桂枝配方颗粒中桂皮醛含量[J].中国实用医药，2008，3(10)：13-14.

[5] 刘勇，陈娟，杨建设，等.桂枝配方颗粒提取制备工艺及其鉴别的研究[J].中草药，2009,40(149):204-206.

[6] 将华，赫福，李艳荣，等.HPLC同时测定桂枝配方颗粒中桂皮酸、芍药苷、甘草酸含量[J].中国中药杂志，2008,33(2):149-153.

[7] 汤小蕾，赵清.桂枝配方颗粒的质量标准[J].中国药师，2008，11(8):954-955.

(责任编辑：宋勇刚)

Determine Guizhi Formula Grains Cinnamic Acid and Cinnamic Aldehyde Content by HPLC

Liu Danping,Zhao Huiling,Liu Haiyan,Li Yaohua*,Tang Jun,Wei Xiangzhong

(College of Pharmacy，Guangxi University of Traditional Chinese Medicine,Nanning 530200，China)

Objective:To establish an HPLC method for the content determination of cinnamic acid and cinnamic aldehyde in guizhi formula grains.Methods:The analytical method was carried out with Diamonsil C18(2) (4.6mm×250mm,5μm)columnand.The mobile phase was consisted of b isn-0.1% phosphoric acid.The detection wavelength was 290nm.Column temperature is 25℃.Results:The calibration curve was linear within the range of 0.032 7～0.327μg(r=0.999 0) and 0.642～ 1.926μg (r=0.999 9) for cinnamic acid and cinnamic aldehyde respectively.The average recoveries were 96.21 % (RSD=1.0%),101.4%(RSD=1.6%) for cinnamic acid and cinnamic aldehyde.Conclusion:The method is simple,accurate,reproducible and precise,and applicable for the determination of guizhi formula grains formula granule.

Guizhi Formula Grains； Cinnamic Acid ；Cinnamic Aldehyde；HPLC；Content Determination

2015-04-28

刘丹萍(1990-)，女，广西中医药大学硕士研究生，研究方向为药物新剂型。

李耀华(1978-)，男，广西中医药大学讲师，研究方向为中药质量控制。E-mail:yaohuali@163.com

R284.2

A

1673-2197(2015)18-0011-02

10.11954/ytctyy.201518006