水飞蓟脱壳前后对降脂保肝颗粒含量的影响

★ 石薇 董雪莲 邱智东 贾艾玲 (长春中医药大学 长春130117)

降脂保肝颗粒由人参、水飞蓟等多味中药材经提取制成，水飞蓟入肝经，味苦性微寒，苦以清火，寒以除热，协助人参共奏清肝热、补肝血之效。水飞蓟为菊科植物水飞蓟Silybum marianum(L．)Gaertn．的干燥成熟果实，是研究较全面的治疗肝病的药用植物［1］，其种子的提取物中水飞蓟宾的含量最多，生物活性最高，具有抗纤维化的作用，保护肝细胞膜，抗肝炎的活性最强［2］，降脂保肝处方中水飞蓟以乙醇加热回流提取，药渣与人参等药材水煎提取。本文针对醇提部分工艺中水飞蓟宾的含量进行测定研究。

水飞蓟宾存在于水飞蓟的壳中，果仁中基本没有，为了使水飞蓟药材在降脂保肝颗粒中高效利用，在已有水飞蓟壳仁分离技术基础上［3］，本实验以水飞蓟壳和水飞蓟粕分别为原料提取醇提浸膏，得到出膏率与水飞蓟宾的含量，以研究水飞蓟壳仁分离的必要性，为制药行业中提取含水飞蓟药材中药复方提供参考。

1 材料、仪器与试剂

1．1 降脂保肝颗粒醇提浸膏的制备 以水飞蓟壳为原料:水飞蓟药材由长春宏检药材公司提供，以水飞蓟脱壳机制备的水飞蓟壳，除去杂质，按照降脂保肝颗粒工艺要求，制成浸膏，作为试验原料，备用。

以水飞蓟粕为原料:水飞蓟药材由长春宏检药材公司提供，以水飞蓟粕，除去杂质，按照降脂保肝颗粒工艺要求，制成浸膏，作为试验原料，备用［4－6］。1．2 仪器与试药 R－205旋转蒸发仪(Buchi)、Agilent1260高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)、EL－204型电子分析天平(梅特勒－托利多仪器(上海)有限公司)、真空干燥箱(上海一恒实验仪器总厂)、TP－150超声波清洗机(天鹏电子新技术有限公司)、电动恒温水浴锅(江苏常熟医疗器械厂)。水飞蓟宾对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110856－200604，供含量测定用);甲醇(色谱纯，美国飞世尔公司)，纯净水(娃哈哈)，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 水飞蓟宾分析条件 水飞蓟宾用HPLC－UV测定;使用Agilent1260高效液相色谱仪，采用以下色谱条件测定:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(DiamonsilTM C18，5μL，250mm×4．6mm);以甲醇－水－冰醋酸溶液(48∶52∶1)为流动相;检测波长为287nm;流速1．0mL/min;柱温25℃［7］。

2．2 标准曲线的制备 分别精密吸取浓度为0.1196mg/mL的水飞蓟宾对照品溶液1，2，3，4，5，6μL，依法测定，注入液相色谱仪，以水飞蓟宾进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程为:Y=303．37X－4．8467，r=0．9999。水飞蓟宾进样量在0．1196～0．7176μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系。

2．3 精密度试验 取浓度为0．1196mg/mL的水飞蓟宾对照品溶液，连续进样6次，进样量为5μL，按照分析条件，测定其峰面积，计算精密度试验的RSD值为0．50%。

2．4 稳定性试验 取浓度为0．1196mg/mL的水飞蓟宾对照品溶液和供试品溶液，分别于0，2，8，12，24h注入高效液相色谱仪，按照分析条件结果表明，水飞蓟宾对照品溶液RSD值为0．89%，供试品溶液RSD值为2．80%，二者在24h内稳定性较好。2．5 重复性试验 取降脂保肝颗粒醇提浸膏，精密称量，平行处理6份作为供试品溶液，注入液相色谱仪按照分析条件，其相应的RSD值为1．73%。

2．6 加样回收率试验 取6份降脂保肝颗粒醇提浸膏，精密称定，分别精密加入的水飞蓟宾对照品粉末适量，按分析方法进行操作，依法测定，计算其加样回收率，平均回收率是100．67%，其RSD值为2.79%。

2．7 水飞蓟宾的含量 分别称取由水飞蓟壳与水飞蓟粕为原料药制成的醇提浸膏粉末(过三号筛)约2g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声30min，放冷，再称定，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过0．45μm微孔滤膜滤过，续滤液供HPLC法分析测定，求出分别以水飞蓟壳和水飞蓟粕原料中水飞蓟宾的含量以及出膏率，结果见表1。

表1 浸膏中水飞蓟宾的含量

3 讨论

目前药材市场上销售的水飞蓟质量参差不齐，且有部分在放置期间含量下降过多，因此以水飞蓟粕作为提取降脂保肝颗粒的原料时，在相应工艺条件下，水飞蓟宾的含量为0．22%，而以水飞蓟壳作为提取降脂保肝颗粒的原料时，在相应工艺条件下，水飞蓟宾的含量为0．96%，提高率为336．36%，可知以水飞蓟壳为原料时水飞蓟宾的含量及其在浸膏中的出膏量均高于以水飞蓟粕作为提取原料时的对应结果，可以证明以水飞蓟壳为原料能够有效的提高水飞蓟宾在降脂保肝颗粒中的含量，以提高降脂保肝颗粒的疗效，并为制药工业中水飞蓟宾提取工艺的改进提供参考［8］。

［1］陈毓荃，王春梅．水飞蓟综合利用基础研究I有效成分提取工艺［J］．西北农业学报，1997，6(4):91－93．

［2］杨晋，刘雅敏，刘延泽．水飞蓟素药学研究进展［J］．天然产物研究与开发，2004，16(2):185－187．

［3］陈钧．一种水飞蓟籽脱壳机:中国，CN201010154670．0［P］．2010－03－01．

［4］鞋华阁，张兴德，谢辉，等．保肝降脂颗粒质量标准［J］．中国实验方剂学杂志，2014，20(8):44－47．

［5］游旭彪．HPLC法测定水飞蓟宾胶囊中水飞蓟宾的含量［J］．海峡药学，2011，23(6):64－66．

［6］张淑丽，张天柱，杨世海．水飞蓟发状根培养体系的建立及其水飞蓟宾含量的测定［J］．中国中药杂志，2014，39(11):2005－2 010．

［7］赵迎英，王进旗，杨彬彬，等．高效液相色谱法测定水飞蓟提取物中水飞蓟宾的含量［J］．西北药学杂志，2005，20(2):63－64．

［8］姚水宝，杨水新，施红敏．梯度高效液相色谱法分离测定利加隆片中水飞蓟宾的含量［J］．中国药业，2001，10(8):13．