结核感染T 细胞斑点试验在诊断COPD 伴肺结核中的临床意义

相 洁，袁益坤，王 忠，刘 丹

（1.延安大学咸阳医院，咸阳 712000；2.礼泉县人民医院，咸阳 712000）

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是呼吸内科常见的疾病类型，COPD 患者常常伴有免疫功能异常，自身抵抗力有限，而机体免疫力下降时感染肺结核在重要诱因，与此同时，COPD 患者长期使用激素也会造成满意度进一步降低，加剧肺结核病情［1］。结核病是一种长期存在的威胁人类健康的疾病，也是一个重大的公共卫生问题［2］。COPD 伴发肺结核会使患者的健康状况严重恶化，因此及早发现、及早确诊并采取合理的防控措施是治疗疾病的关键所在。结核感染T 细胞斑点试验是一个有效的结核分歧杆菌感染诊断技术［4］。为验证其在COPD 伴肺结核中的应用价值，我院开展了相应的研究工作，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取我院2013 年6 月～2014 年12 月期间收治的90 例慢性阻塞性肺疾病（COPD）疑似肺结核患者作为研究对象，所选患者均符合2002 年中华医学会呼吸病学分会制定的COPD 诊断标准。其中男53例，女37 例；年龄58~76 岁，平均（67.9±4.5）岁；COPD病史3~19 年，平均（8.7±2.6）年。患者存在一定程度的咳嗽、呼吸困难、发热、胸痛等症状，影像学检查显示纵膈淋巴结结节、斑片、肿大。

1.2 方法所有患者均采用结核菌素试验（PPD）和结核感染T 细胞斑点试验（T-SPOT.TB）进行检测。T-SPOT.TB 具体方法为：抽取5 mL 患者的外周血，进行外周血单个核细胞分离，以全血模式进行细胞计数，配制成细胞悬液，悬液浓度为25×104 单核细胞/100 μL；在各个样板条上按顺序设置阴性、抗原A、抗原B、阳性对照，并按顺序在4 个孔内加入100 μL 细胞悬液，随后将培养板放于培养箱中培养16~20 h，培养箱温度为37.5℃，CO2 浓度为5%，PBS 洗板4 次；将50 μL 酶标二抗工作液加至各个孔内，并置于2~8℃条件下孵育1 h，取50 μL 显色液加至各个孔内，避光显色7~12 min 后，用蒸馏水终止显色，反复4 次后滤纸拍板，待其自然干燥后读取结果。对患者进行胸部CT 扫描和病理学检查，并依此作为最终检测结果。

1.3 结果判定阳性：若抗原A 斑点或抗原B 孔斑点-阴性对照孔斑点数≥2，阴性对照孔斑点为6~10个，则判读为阳性结果；阴性：若抗原A 斑点或抗原B孔斑点-阴性对照孔斑点数≥6，阴性对照孔斑点为0~5 个，则判读为阴性结果［5］。

1.4 统计学方法采用SPSS18.0 软件处理数据，使用百分数表示计数资料并使用χ2检验进行组间比较。若P<0.05，说明组间差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 T-SPOT.TB 试验与最终诊断结果比较本组90例患者均顺利完成诊断。对比T-SPOT.TB 试验与最终诊断结果可知，T-SPOT.TB 试验灵敏度为79.07%，特异度为87.23%，假阳性率为12.24%，假阴性率为20.93%。见表1。

表1 T-SPOT.TB试验与最终诊断结果比较

2.2 T-SPOT.TB 试验与结合抗体检测结果比较由表2 可知，对于43 例明确为COPD 伴肺结核患者，T-SPOT.TB 试验的阳性检出率为79.07%，PPD 试验的阳性检出率为48.84%。两组相比较，T-SPOT.TB 试验的阳性检出率显著高于对照组（P<0.01）。

表2 T-SPOT.TB试验与结合抗体检测结果比较

3 讨论

慢性阻塞性肺疾病是具有气流阻塞特征的肺气肿和（或）慢性支气管炎，若治疗不当，可进一步发展为呼吸衰竭和肺心病等常见慢性疾病，患者的致残率和病死率极高［6］。结核病是严重危害人类生命安全的慢性传染性疾病，近些年来，结核病在全球的流行和传播呈现持续蔓延之势［7］。据第四次结核病流行病学调查显示，我国结核分歧杆菌感染率高达44.5%，也就是说我国约有近6 亿人感染过结核分歧杆菌［8］。然而，临床研究显示，仅有不足10%的感染个体有进展为结核病的可能［8］。结核病的发生是多种因素相互作用的结果，临床研究表明COPD 患者是肺结核的易患人群，COPD伴发肺结核病例日益增多，二者并存导致机体免疫力进一步降低，给疾病的控制带来巨大难度，因此，设法提高COPD 伴肺结核的早期诊断率成为了救治患者的最佳选择［9］。

T-SPOT.TB 试验结合了γ-干扰素释放试验和酶联免疫斑点技术，通过检测受结核分歧杆菌抗原刺激而活化的效应T 细胞进行结核感染诊断。结核感染后体内会长期存在抗原特异性T 细胞，再次受到抗原刺激后，会迅速得到活化增殖，并释放γ-干扰素［10］。试验利用CFP10 与ESAT6 两种结核特异性抗原刺激外周血中结核特异性T 淋巴细胞分泌γ-干扰素，通过酶联免疫斑点技术检测γ-干扰素的释放情况，并依此判断机体是否感染了结核杆菌。CFP10 与ESAT6 均来自结核分歧杆菌基因组所特有的RD1 区域，因此特异性极强［11］。本文研究显示T-SPOT.TB 检测诊断肺结核的敏感度和特异性分别高达79.07%和87.23%，而其阳性检出率也显著高于结核抗体检测，可见，本实验充分证实了其在临床诊断COPD 中的可信度和有效性。PPD 试验目前较为认可的结核杆菌检测技术，PPD是一种体内试验，由于BCG 技术的广泛应用，因BCG接种所致的PPD 试验假阳性逐渐增多，而PPD 试验易受多种因素影响，临床诊断精确度难以得到保障［12］。T-SPOT.TB 试验结果较为客观，不易受体检人员读数及机体自身状态的影响，因此能为临床诊断提供更有保障的依据。

综上所述，T-SPOT.TB 试验具有高灵敏度和高特异性等优点，可以为COPD 伴肺结核的早期精确诊断提供确切的结核感染依据，具有积极的临床意义。

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