凉州区规模场猪繁殖障碍性疫病疫苗免疫效果监测分析

任 菊 ，郝华山 ，王明奎

（1、凉州区畜牧兽医局，甘肃武威733000；2、凉州区柏树乡畜牧兽医站，甘肃武威733000）

1 材料和方法

1.1主要材料及试剂

1.1.1血清样品 从2012年至2014年，采集凉州区135个规模化猪场血清4061份，其中2012年1345份，2013年1380份，2014年1425份，用于猪瘟、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征、猪细小病毒、猪乙型脑炎免疫抗体检测，猪伪狂犬病可检测野毒感染。

1.1.2主要试剂

猪瘟正向间接血凝检测试剂盒（兰州兽研所生产），猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒、猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒、猪细小病毒抗体检测试剂盒、猪乙型脑炎病毒抗体检测试剂盒（均由深圳芬德生物技术有限公司生产）。

1.1.3主要仪器设备

酶标仪、洗板机、微量移液器、低速大容量多管离心机、恒温培养箱、水浴锅、纯水机、无菌采血器、离心管。

1.2方法

1.2.1采样仔猪、保育猪采用前腔静脉采血法采集血液，育肥猪、母猪、公猪采用耳静脉采血法采集血液。

1.2.2血清的分离

无菌采血器或真空采血管采集血液样本3～5ml，室温静置2～4h或经3000r/min离心析出血清，取上清液置于灭菌的离心管内，逐份进行编号。血清样本经56℃30min灭活后，置于-20℃保存备用。

1.2.3猪瘟正向间接血凝试验

按猪瘟正向间接血凝检测试剂盒使用说明书检测：在96孔110°V型微量血凝板上加稀释液50ul,再加待检血清、阴阳性血清50ul，对倍稀释待检血清、阴阳性血清，加血凝抗原25ul（充分摇匀瓶底应无红细胞沉淀），血凝板置于微量振荡器上振荡2～3分钟，然后盖上玻璃板，室温下或37℃下静置1.5-2小时判定结果，也可放在室温下延至翌日判定。阴阳性对照成立的条件下，再观察待检血清各孔，以呈现“++”凝集的最大稀释倍数为该份血清的抗体效价。接种猪瘟兔化弱毒疫苗的猪群免疫抗体效价达到1:32及以上（即第5孔呈现出“++”凝集）为免疫合格。

1.2.4猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬、猪细小病毒、乙型脑炎ELISA试验

按猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬、猪细小病毒、乙型脑炎病毒抗体检测试剂盒使用说明书检测：待检血清1:40稀释，加入抗原包被板中，经37℃温育半小时，洗板后加入酶标二抗，37℃温育半小时，洗板加入底物，37℃温育10分钟后，加入终止液，于450nm波长测定OD值。在阴阳性对照成立的情况下，按公式S/P=样品孔A值/阳性对照孔平均A值计算，S/P≥0.18为阳性，S/P＜0.15为阴性，0.15≤S/P＜0.18为可疑。

1.2.5猪伪狂犬病gE抗体检测试验

按猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书检测：

待检血清1:100稀释，加入抗原包被板中，经37℃温育半小时，洗板后加入酶标二抗，37℃温育半小时，洗板加入底物，37℃温育10分钟后，加入终止液，于450nm波长测定OD值。在阴性对照≤0.10，阳性对照≥0.6的情况下，样品A值≥0.38为阳性；样品A值在0.2到0.38之间为可疑；样品A值＜0.2为阴性。

2 结果

三年共检测血清6990份（次），平均抗体合格率分别为：猪瘟85.33%、猪繁殖和呼吸综合征84.96%、细小病毒病81.46%、乙型脑炎83.68%，这5中疫病免疫抗体合格率均达到国家农业部规定的70%以上。猪伪狂犬病野毒感染率分别为：2012年18.7%，2013年8.6%，2014年为0.3%。（见表1）

3 小结与讨论

（1）通过免疫抗体效果监测可以看出，我区规模场猪繁殖障碍性疫病通过三年的疫苗免疫，防控达到了一定的效果，抗体水平有逐年上升的趋势，疫苗免疫抗体合格率比防控前明显提高，表明了我区规模场猪繁殖障碍性疫病得到有效遏制，疫病净化工作已见成效。

（2）及时了解繁殖障碍性疫病免疫抗体水平，可及时调整规模场免疫程序，确定合理的免疫时间，达到预期的免疫效果。规模场应用伪狂犬病基因缺失苗免疫，实验室应用酶联免疫试验法可检测野毒感染猪，从表1检测结果可知，2012年猪伪狂犬野毒感染率为18.7%，2013年感染率为8.6%， 2014年感染率为0.3%，比防控前2011年32.41%，下降了32.01个百分点，猪伪狂犬病在我区的规模场已基本得到控制和净化。

（3）猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪细小病毒、乙型脑炎疫苗免疫抗体常年保持在75%以上，表明了项目组制定的免疫程序（猪瘟免疫：仔猪20-24日龄首免4头份、60日龄二次免疫2头份，种猪2月、6月、10月各免疫1次，2头份；猪蓝耳病免疫：仔猪45日龄2ml，母猪产前50天免疫1次、4ml，公猪每年2次、每次4ml；猪伪狂犬免疫（伪狂犬基因缺失苗）：仔猪50日龄免疫1次、1头份，母猪产前40天免疫1次、2头份，公猪每年2次、每次2头份；猪细小病毒免疫：母猪配种前30天免疫1次、2ml，公猪每年2次、每次2ml；猪乙型脑炎免疫：种猪每年4月份免疫1次、1头份），适合凉州区规模场猪繁殖障碍性疫病的预防，防控效果显著。